HPV-6/11 L1/E6、HPV-6/11 L1/E7嵌合DNA疫苗质粒的构建

目的 构建HPV 6 / 11L1/E6、HPV 6 / 11L1/E7预防、治疗性DNA疫苗质粒。方法 运用PCR扩增HPV 6 /11L1、E6、E7序列 ,PCR产物连接至pGEMT Easy质粒 ,测序鉴定正确后 ,分别连接至真核表达载体pVAX ,再用酶切、连接而构建成HPV 6 / 11L1 E6 /E7 pVAX质粒。运用电穿孔法将所获得质粒转染COS 7细胞 ,免疫组化检测蛋白表达情况。结果 所构建质粒的插入目的片段测序正确 ;免疫组化检测在胞浆胞核可见棕黄色点状阳性产物沉积。结论 所构建的HPV 6 / 11L1 E6 /E7 pVAX融合蛋白表达质粒可在体外表达L1 E6 /L1 E7蛋白 。

Prepartion and identification of activity of anti-HPV-6b/11E1 universal ribozyme——Rz1198 in vitro

Aim: To study the preparation and cleavage activity of Rz1196 directed against HPV-6bE1 and HPV-11E1 (HPV-6b/11E1) transcripts in vitro. Methods: HPV-6b/11E1 gene fragments were cloned into T-vector under the control ofT7 promoter, ～(32)P-labeted HPV-6b/11E1 transcripts as target-RNAs were transcribed in vitro and purified by PAGE.Rz1198 gene designed as a universal ribozyme for both HPV-6b/11E1 transcripts was cloned into vector p1.5 between5'-cis-Rz and 3'-cis-Rz. a2P-labeled Rzl198 transcript was gel-purified, incubated with target-RNAs at different condi-tions and autoradiographed after denaturing gel-electrophoresis. Results: Rz1198 was active at 37℃. The optimaltemperature was 50℃. For HPV-6bE1, k_m = 12.2 nmol/L, k_cat = 0.18 min～(-1); For HPV-11E1, k_m= 14.7 nmol/L,k_cat =0.14 min～(-1). All these revealed that the design of Rz1198 was correct. It could be a universal ribozyme for thetwo substrates--HPV-6bE1 and HPV-11E1 transcripts. Conclusion: Rz1198 prepared in vitro possesses the perfectspecific catalytic cleavage activity. It leads to the expectation that, in the future, it will be possible to develop a newnucleic acid drug from Rz1198 which can efficiently inhibit the replication of HPV-6b/11 DNA in vivo. (Asian J An-drol 1999 Dec; 1: 195-201)

尖锐湿疣患者人乳头瘤病毒6、11型的检测及L1基因的序列分析

目的 检测尖锐湿疣患者组织中人乳头瘤病毒 (HPV)6型和 11型的感染率，分析 L1晚期基因序列及其蛋白质的氨基酸序列，为基因工程疫苗的研究提供依据。方法 采用 PCR方法测定北京和锦州两地区 34例尖锐湿疣患者病损组织中 HPV6型及 11型的感染率 ,并扩增 L1晚期基因，构建重组测序质粒，双脱氧法测序观察其变异状况。结果 HPV11型感染率为 73.5％ (25/34)， 6型感染率为 44.1％ (15/34),其中两型混合感染率为 17.6％ (6/34)。 11型 L1基因 7～ 8个碱基变异，推导的蛋白质一级结构中可能有 1～ 3个氨基酸变异， 6型 L1基因仅有 3个碱基发生同义突变。结论 检测的 34例患者中以 HPV11型感染为主，兼有 6型和两型的混合感染。 11型 L1基因及蛋白有一定变异， 6型 L1基因仅发生少数碱基同义突变。

尖锐湿疣及湿疣样病变中HPV6／11DNA原位杂交的观察

对４８例生殖道尖锐湿疣（ＣＡ）及湿疣样病变常规石蜡包埋组织切片进行人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）６／１１型ＤＮＡ原位分子杂交及病理组织学观察，在１２例ＣＡ中９例（７５％）和湿疣样病变中１例（２．７％）检出ＨＰＶ６／１１ＤＮＡ，阳性细胞位于鳞状上皮中表层的凹空细胞及其周围细胞核内。在ＣＡ与湿疣样病变的鉴别诊断中，ＨＰＶ６／１１ＤＮＡ原位杂交检测具有重要的价值。

核因子-κBp50和P16^(INK4A)在尖锐湿疣皮损组织中的表达及意义

[目的]探讨核因子-κBp50(NF-κBp50)和P16INK4A在感染HPV6/11、HPV16/18型尖锐湿疣(condylo-mata acuminate CA)组织中的表达及其意义。[方法]采用荧光定量PCR法检测确定CA组织HPV6/11阳性同时HPV16/18阴性26例;HPV16/18阳性同时HPV6/11阴性21例;免疫组织化学Envision二步法检测26例低危型CA、21例高危型CA和18例正常包皮组织中NF-κBp50和P16INK4A的表达。[结果]NF-κBp50阳性表达主要定位于细胞浆,部分细胞核也表达,NF-κBp50在正常包皮、低危型、高危型.CA三组间阳性表达强度比较有统计学意义(χ2=26.739,P﹤0.05),P16INK4A阳性表达主要定位于细胞浆,P16INK4A在正常包皮、低危型、高危型CA三组间比较表达程度无差异(χ2=5.860,P﹥0.05)。[结论]NF-κBp50的表达增高可能在CA细胞增殖中起一定作用。

3013例门诊疑似性传播疾病病原体感染者感染特点分析

目的了解某医院门诊患者淋球菌（NGH）、沙眼衣原体（CT）、解脲脲原体（uu）、单纯疱疹病毒（HSV-II）、人乳头瘤病毒（HPV-6／11）5种性传播疾病（STD）病原体的检出情况、分布情况和流行特征，为临床预防提供依据。方法采用实时荧光定量PCR法对3013例患者进行NGH、CT、UU、HSV-II、HPV-6／11病原体DNA定量检测。结果STD病原体总阳性率为23．13％（697／3013），NGH、CT、UU、HSV-II和HPV-6／11F日陆溯U为8．32％（60／721）、15．99％（137／857）、34．80％（371／1066）、34．41％（85／247）和36．07％（44／122），男性和女性阳性率分别为20．09％和32．46％，21,--40岁年龄段患者占84．66％。结论加强泌尿生殖道炎症患者STD病原体的检测，对STD的防治有重要意义，应引起社会关注。