HPV-E6/E7-mRNA和HPV-DNA检测在宫颈病变筛查中的应用价值

目的 评估HPV-E6/E7-mRNA和HPV-DNA检测在宫颈病变筛查中的参考价值。方法 收集2019年10月至2021年12月期间于蚌埠医学院第一附属医院行宫颈病变筛查人员的宫颈脱落细胞学样本1 637例,依次行宫颈液基细胞学检测(TCT)、HPV-E6/E7-mRNA和HPV-DNA检测。基于TCT诊断结果,将宫颈病变者依年龄分为≤30、31~、41~、51~、≥61组;依据TBS分类标准,将宫颈病变者分为NILM组、ASC-US组、LSIL组、ASC-H组、HSIL组。采用卡方检验方法分析HPV-E6/E7-mRNA和HPV-DNA检测在宫颈病变筛查和诊断中的辅助价值。结果 在不同年龄段的宫颈病变患者中,HPVE6/E7-mRNA检出率相对于HPV-DNA均有增高趋势,差异无统计学意义(P>0.05);NILM组HPV-E6/E7-mRNA阳性检出率显著低于HPV-DNA阳性检出率,差异有统计学意义(χ^(2)=100.453,P<0.05);ASC-US、LSIL、ASC-H、HSIL组中,HPV-E6/E7-mRNA阳性检出率均高于HPV-DNA,差异无统计学意义(P>0.05);HPV-E6/E7-mRNA检测的灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值均显著高于HPV-DNA,差异有统计学意义(P均<0.05)。结论 HPV-E6/E7-mRNA和HPV-DNA检测在宫颈病变筛查中均有一定的应用价值,但HPV-E6/E7-mRNA检测的参考价值更高。

HPV-DNA联合HPV-E6蛋白检测在宫颈癌筛查中的价值

目的探讨HPV-DNA联合HPV-E6蛋白检测用于筛查宫颈癌的价值。方法选取近期来我院门诊就诊检查的患者中选取宫颈液基细胞学检查(TCT)为阳性的患者作为观察对象,共计525例,并对以上患者分别行HPV-DNA检测、HPV-E6蛋白检测及宫颈活组织检查,比较HPV-DNA及HPV-E6蛋白两种单独检测及联合检测对于宫颈癌筛查的临床价值。结果 TCT阳性的患者中,375例为子宫颈正常或宫颈炎,134例为上皮内瘤变,14例为宫颈癌。HPV-DNA检测出的阳性率在宫颈癌前病变中均显著高于HPV-E6蛋白检测法(P<0.05)。宫颈癌的检测率均为100.0%。在上皮内瘤变和宫颈癌的检出率比较中,3组比较差异有统计学意义(P<0.05),其中联合检测阳性率高于HPV-DNA及HPV-E6蛋白单独检测。结论随着宫颈病变程度的加重,检测的阳性率也逐渐升高,HPV-DNA检测具有较高的灵敏度,HPV-E6蛋白检测有较高的特异度,二者联合检测可提高宫颈病变检出的灵敏度。

人乳头状瘤病毒HPV-E6及P53蛋白与食管鳞癌关系

目的研究人乳头状瘤病毒 HPV-E6和 p53在食管鳞癌中的表达,以探讨它们在食管鳞癌中发生发展的生物学意义.方法应用 LSAB 免疫组化方法对16例正常食管粘膜,18例慢性炎症,22例不典型增生以及60例食管鳞癌组织进行HPV-E6和 P53蛋白表达的研究.结果在正常食管粘膜、慢性炎症、不典型增生及食管鳞癌中HPV-E6蛋白阳性率分别为37%,39%,50%及73%,P53蛋白阳性率在上述四组中则为0%,6%,41%及63%.四组比较,HPV-E6和 P53蛋白表达均有显著差别(P<0.05).在60例食管鳞癌Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ级分组中,HPV-E6阳性率分别为59%,78%和85%,p53阳性率则分别为45%,67%,80%.三个分级组比较,HPV-E6和 P53蛋白表达均有显著差别(P<0.05).结论 HPV-E6及 p53与食管鳞癌的发生发展有着一定相关性,且 HPV-E6及 p53共同作用很可能更为食管鳞癌发生发展的重要因素.

子宫颈肿瘤患者HPV-E6/E7 mRNA表达的临床意义

目的探讨子宫颈肿瘤患者人乳头瘤病毒(HPV)-E6/E7 mRNA表达的临床意义。方法选择2019年1月至2021年12月在平顶山市妇幼保健院经阴道镜下宫颈活检的102例患者作为研究对象,所有对象行宫颈液基薄层细胞学(TCT)检查,收集患者宫颈管及宫颈口脱落细胞行HPV分型和HPV-E6/E7 mRNA定量检测,在阴道镜下行宫颈多点活检,根据活检结果,患者分为宫颈癌浸润组(21例)、宫颈上皮内瘤变(CIN)Ⅲ级组(33例)、CINⅡ级组(29例)及CINⅠ级组(19例),选择慢性宫颈炎女性40例设置为对照组,比较各组的HPV-E6/E7 mRNA的表达水平,分析HPV-E6/E7 mRNA与宫颈肿瘤病变分级的关系及其对宫颈肿瘤的诊断价值。结果HPV-E6/E7 mRNA表达水平:宫颈癌组>CINⅢ组>CINⅡ组>CINⅠ组>对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。随TBS分级的降低,HPV-E6/E7 mRNA水平呈降低趋势,差异有统计学意义(P<0.05)。HPV-E6/E7 mRNA表达水平与疾病严重程度呈正相关(r=0.525,P=0.007)。HPV-E6/E7 m RNA鉴别诊断慢性宫颈炎与CIN的AUC为0.747(P<0.05);HPV-E6/E7 mRNA鉴别诊断宫颈癌与CIN的AUC为0.711(P<0.05)。结论HPV-E6/E7 mRNA在宫颈肿瘤患者中呈高水平表达,且表达水平随着疾病严重程度的增加而增加,检测HPV-E6/E7 mRNA的表达可鉴别诊断慢性宫颈炎、CIN及宫颈癌,对于疾病诊断及评估具有一定临床价值。

简述HPV-E6及bcl-2蛋白表达与宫颈癌演化的相关性

HPV-E6及bcl-2蛋白表达与宫颈癌的发生发展密切相关,在宫颈癌疾病的演化过程中,两者相互作用,并最终导致细胞癌变。HPV是一种无包膜的小DNA病毒,其感染可导致人类皮肤和黏膜的异常增生;bcl-2是细胞凋亡的关键调节分子;本文概述了HPV-E6及bcl-2蛋白的作用机制及其与宫颈癌相关的研究进展。

宫颈癌患者HPV-E6/E7mRNA HPV-DNA检测及临床意义

目的研究宫颈癌患者人乳头瘤病毒(HPV)E6/E7mRNA、HPV-DNA水平及临床意义,为患者的临床诊断提供指导。方法选取2018年3月-2019年3月在丽水市中心医院经阴道镜下宫颈活检的97例患者作为研究对象,所有患者行液基薄层细胞学(TCT)检查,并行病理学检查即阴道镜下组织活检。根据病理检查结果将患者分宫颈上皮内瘤变(CIN)Ⅰ级组、CINⅡ级组、CINⅢ级组及宫颈浸润癌组,其中CINⅠ级患者28例,CINⅡ级患者23例,CINⅢ级患者31例,宫颈浸润癌患者15例。另选择40例其他妇科疾病患者作为对照组。以病理学检查为金标准,比较各组HPV-E6/E7mRNA、HPV-DNA的表达水平,比较HPV-E6/E7mRNA、HPV-DNA检测对疾病检出的灵敏度、特异度、阳性预测值及阴性预测值。结果 CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ级组及宫颈浸润癌组患者的HPV-E6/E7mRNA、HPV-DNA阳性率及拷贝数均明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。CINⅠ级、CINⅡ级、CINⅢ级、宫颈浸润癌患者HPV-E6/E7mRNA检测的拷贝数依次明显增高,差异有统计学意义(P<0.05)。CINⅠ、Ⅱ、Ⅲ级及宫颈浸润癌患者HPV-DNA检测的拷贝数无明显变化,差异无统计学意义(P>0.05)。HPV-E6/E7mRNA检测宫颈病变的灵敏度、阳性预测值及阴性预测值明显高于HPV-DNA检测,差异有统计学意义(P<0.05)。两种检测方式的特异度比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 HPV-E6/E7mRNA、HPV-DNA可提高宫颈疾病患者检出率,反映宫颈病变程度,可对疾病作出有效诊断及预测疾病发展,两种方法联合使用在妇女宫颈病变早期筛查中有很高临床价值。

HPV感染负荷量及HPV-E6蛋白表达预测宫颈癌新辅助化疗效果的价值

目的研究宫颈癌患者人乳头瘤病毒（HPV）感染负荷量及宫颈癌组织HPV-E6蛋白表达与新辅助化疗效果的相关性,探讨其预测宫颈癌化疗效果的可能性。方法收集云南省肿瘤医院2010年6月~2011年12月收治的40例宫颈癌患者,对其进行新辅助化疗1~3个疗程,化疗结束后4周评价治疗效果;化疗前采用二代杂交捕获技术（hc2HPV DNA）检测HPV负荷量,免疫组化MaxVision法检测宫颈癌组织HPV-E6蛋白表达,研究化疗效果与化疗前HPV负荷量、HPV-E6蛋白表达的关系。结果新辅助化疗临床有效率为85%。宫颈鳞癌患者HPV感染负荷量为466.78±695.48,显著高于腺癌患者的277.78±167.72（P〈0.05）。化疗有效组HPV感染负荷量为472.40±726.62,显著低于化疗无效组的1 969.68±32.19,宫颈癌患者HPV感染负荷量与新辅助化疗效果呈负相关（P〈0.05）。宫颈癌组织HPV-E6蛋白表达与宫颈癌病理类型、分期、HPV负荷量及新辅助化疗疗效均无相关性（P〉0.05）。结论 HPV感染负荷量与宫颈癌新辅助化疗效果有关,其负荷量越大化疗效果越差,通过宫颈癌患者HPV负荷量可有效预测宫颈癌新辅助化疗效果。

TCT联合HPV E6/E7 mRNA检测对子宫颈癌前早期病变诊断价值的meta分析

目的系统评价液基薄层细胞学检查(thinprep cytologic test,TCT)联合人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)E6/E7 mRNA检测对子宫颈癌前早期病变的诊断价值。方法计算机检索CNKI、维普数据库(VIP)、万方数据库、中国生物医学文献数据库(CBM)、PubMed、The Cochrane Library、Embase、Science数据库中关于TCT联合HPV E6/E7 mRNA检测诊断子宫颈癌前早期病变的相关文献,检索时限均为建库至2023年1月。由2位评价员按纳入标准和排除标准各自筛选文献、提取资料和评价质量后,应用RevMan 5.3、Stata 15.0、Meta-Disc 1.4统计软件分析TCT联合HPV E6/E7 mRNA检测对子宫颈癌前早期病变的诊断价值,计算诊断敏感性的Spearman相关系数验证阈值效应,进行异质性检验;计算合并敏感性、特异性、阳性似然比和阴性似然比、诊断比值比、SROC曲线下面积。结果共纳入15篇文献,合计6620例患者。Meta分析显示,合并敏感性、特异性、阳性似然比、阴性似然比、诊断比值比均不存在明显异质性(I^(2)=31.6%、14.2%、10.9%、16.7%、17.2%,P=0.1162、0.2947、0.3311、0.2663、0.2610),采用固定效应模型进行统计分析,其结果分别为0.95(95%CI:0.94~0.96)、0.87(95%CI:0.86~0.88)、6.86(95%CI:6.26~7.51)、0.06(95%CI:0.05~0.07)、113.23(95%CI:86.44~148.31)。SROC曲线下面积为0.9414。结论TCT联合HPV E6/E7 mRNA检测对诊断子宫颈癌前早期病变有重要价值。

HPV E6/E7 mRNA联合细胞学检查用于子宫颈癌早期筛查的初步评价

目的探讨人乳头瘤病毒(HPV)E6/E7 mRNA联合液基薄层细胞学检查(TCT)用于宫颈癌早期筛查的初步评价。方法收集2015年10月—2019年7月在本院进行宫颈癌筛查患者825例,均进行HPV E6/E7 mRNA、TCT检测,以组织病理学为金标准,分析HPV E6/E7 mRNA与TCT联合检测用于评估患者宫颈病变风险的诊断效能。结果HPV E6/E7 mRNA检测和TCT检测不同病理分级患者宫颈慢性炎、低级别鳞状上皮内病变(LSIL)、高级别鳞状上皮内病变(HSIL)、宫颈癌的阳性率分别为12.17%、39.04%、86.61%、87.88%和36.51%、82.89%、82.14%、81.82%。HPV E6/E7 mRNA检测的敏感性为86.90%,特异性为80.44%,准确性为81.58%。TCT检测的敏感性为82.07%,特异性为50.74%,准确性为56.24%。HPV E6/E7 mRNA联合TCT检测的敏感性为70.34%,特异性为83.68%,准确性为81.33%。HPV E6/E7 mRNA与TCT联合检测特异性高于单一检测,差异有统计学意义(P<0.001)。HPV E6/E7 mRNA与TCT两种检测方法的受试者工作特征曲线(ROC)曲线下面积(AUC)分别为0.837和0.664,两者联合检测的AUC为0.860,差异性显著(P<0.001),提示联合诊断可提高诊断宫颈HSIL的性能。结论HPV E6/E7 mRNA联合TCT能够更好预测宫颈病变的进展,且针对高级别病变的筛查具有更高的特异性,可为临床宫颈癌筛查提供参考。

下调HPV16 E6/E7表达宫颈癌细胞Siha上清液代谢组学

目的 基于核磁共振氢谱(1H NMR)代谢组学筛选抑制HPV16 E6/E7表达,检测宫颈癌Siha细胞中差异代谢物以及相关通路,以明确感染高危型HPV16宫颈癌发生的关键代谢标志物。方法 通过RNAi片段转染Siha细胞下调E6/E7表达,分为正常对照组(Siha细胞)、空载组(si-NON)、si-E6组与si-E7组,并验证其转染效率。利用1H NMR代谢组学技术揭示干扰Siha细胞中E6/E7表达后所涉及的差异代谢物;结合MetaboAnalyst 5.0在线软件,得到改变的差异性代谢物和相关的代谢途径。结果 荧光倒置显微镜观察细胞荧光存在;Western blotting检测结果显示,与Siha组比较,si-E6组与si-E7组中E6/E7的表达量降低(F=145.8,P<0.001);下调E6/E7表达后,检测13种共有差异代谢物,包括异亮氨酸(Isoleucine),亮氨酸(Leucine),缬氨酸(Valine);MetaboAnalyst 5.0在线软件分析结果提示,以上代谢物主要涉及氨酰-tRNA生物化学合成途径;异亮氨酸、亮氨酸和缬氨酸的生物化学合成途径;酪氨酸、苯丙氨酸以及色氨酸的生物化学合成等10条代谢途径。结论 HPV16感染后通过改变葡萄糖及氨基酸相关代谢促进宫颈癌的进展,为宫颈癌的防治提供理论依据。

基于LncRNA SENCR/MDK轴探究HPV E6宫颈癌发生发展的机制

目的 探究HPV E6通过LncRNA SENCR/MDK轴促进宫颈癌发生发展的分子机制。方法 选取宫颈癌Hela细胞,原代培养,P3代单层细胞为研究对象;Hela细胞内转染LncRNA SENCR、MDK、E6过表达质粒,构建Control组(细胞不做处理),pcDNA-SENCR组(细胞内转染SENCR过表达质粒),pcDNA-MDK组(细胞内转染MDK过表达质粒),pcDNA-SENCR+MDK组(细胞内转染SENCR、MDK过表达质粒),pcDNA-E6组(细胞内转染E6过表达质粒)。双荧光素基因检测系统确定LncRNA SENCR、MDK、E6之间靶向关系;比较各组细胞增殖、凋亡、迁移及血管生成的能力。结果 LncRNA SENCR、MDK在Hela细胞内成功过表达,二者存在靶向关系,差异有统计学意义(P<0.05);与Control组相比,SENCR过表达可以抑制Hela细胞的增殖活性、克隆及迁移能力,促进细胞凋亡性,上调Cleaved-caspase-3表达,下调Cyclin D1、VEGF、ephrin B2表达;MDK过表达可以促进Hela细胞的增殖活性、克隆及迁移能力,抑制细胞凋亡性,下调Cleaved-caspase-3表达,上调Cyclin D1、VEGF、ephrin B2表达,差异有统计学意义(P<0.05)。LncRNA SENCR的mRNA 3’非编码区预测E6结合位点,二者之间存在靶向关系(P<0.05);与Control组相比,E6过表达可以抑制LncRNA SENCR的表达,E6沉默后,LncRNA SENCR表达上调,LncRNA SENCR过表达可以下调E6表达,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 HPVE6/LncRNA SENCR/MDK轴在宫颈癌发生发展中扮演了重要作用,HPV E6通过靶向抑制LncRNA SENCR活性来促进MDK表达,提高宫颈癌细胞的增殖、克隆、迁移及血管生成能力,促进宫颈癌的发展。

评价HPV E6/E7mRNA结合细胞倍体检查在宫颈癌筛查中的价值

目的评价高危人乳头瘤病毒(HPV)E6/E7mRNA结合宫颈细胞倍体检查在宫颈恶性肿瘤筛查中的意义。方法选择取得2020年3月至2021年3月在某人民医院妇科门诊就诊以及妇科住院部治疗进行宫颈癌筛查的女性患者628例,收集病人的宫颈脱落细胞,将所有得到的细胞标本同时做两种化验,即HPV E6/E7 mRNA+宫颈细胞倍体检查,得到的检查结果中如果有一个提示阳性,那么再进一步在阴道镜指引下完成宫颈活检,活检的病理结果将作为最终的诊断,把得到的每一步检查结果进行逆向分析,探索只使用一项检查和选择两者结合时分别对宫颈肿瘤及早发现产生的不同评价。结果单一评价方法时:HPV E6/E7 mRNA检测敏感性(96.55%)最高,其特异性为(75.10%)、准确度为(79.10%),细胞倍体分析的阴性预测值(95.94%)最高。两者结合评价时:其特异性(84.98%)、阳性预测值(55.81%)和准确度(84.57%)最高。结论HPV E6/E7 mRNA和宫颈细胞倍体相结合共同评价时,看其在特异性、阳性预测值和准确性三方面的表现,呈现出的最后效果好于单一评价方法,建议将两者联合筛查应用于宫颈恶性肿瘤临床筛查中。

山东省滨州市不同年龄女性HPV高危型感染率及E6/E7 mRNA表达情况分析

目的探讨山东省滨州市不同年龄妇女人乳头瘤病毒(HPV)高危型感染率及HPV E6/E7 mRNA表达情况。方法选取2022年1-10月在该院妇产科就诊行HPV-DNA分型检测的女性患者10887例。按年龄分组(<30岁组2180例,30~<40岁组3222例,40~<50岁组3438例,≥50岁组2047例)并统计HPV-DNA分型检测结果。在入选患者中分层随机选取HPV-DNA 16型阳性女性患者250例,各年龄组50例,统计其HPV E6/E7 mRNA检测结果,比较不同年龄组女性患者HPV-DNA分型及HPV E6/E7 mRNA表达的差异。结果10887例女性患者中阳性1666例,感染率为15.3%,其中高危型阳性1393例,占83.6%(1393/1666),低危型感染273例,占16.4%(273/1666)。HPV高危型阳性分布排前5位者依次为HPV 16、52、58、33、18型。不同年龄组女性患者感染率不同,HPV感染年龄分布曲线呈“V”形。不同年龄HPV-DNA 16型阳性女性患者HPV E6/E7 mRNA阳性率不同,40~<50岁组、≥50岁组女性患者HPV E6/E7 mRNA阳性率均高于30~<40岁组,差异均有统计学意义(P<0.05)。HPV-58型E6/E7 mRNA阳性率、拷贝值均高于HPV 16、18、52型,差异均有统计学意义(P<0.05)。HPV高危型混合感染与单一感染E6/E7 mRNA表达存在差异。结论通过开展HPV-DNA筛查工作及研究了解本地区HPV亚型的分布具有非常重要的价值。年轻妇女和围绝经期及以上妇女HPV感染风险较高。随年龄增加HPV 16型感染人群中HPV E6/E7 mRN阳性率逐渐升高,即发生宫颈病变的风险增加。不同HPV高危型感染E6/E7 mRNA阳性率、拷贝值均存在差异,且HPV高危型混合感染者E6/E7 mRNA阳性率、拷贝值均高于单一感染者。

Reid阴道镜评分、HPV E6/E7 mRNA表达量在宫颈癌中的临床应用价值研究

目的研究Reid阴道镜评分(以下简称Reid评分)、高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)mRNA表达量与宫颈癌国际妇产科联盟(FIGO)分期、血清常规肿瘤标志物水平的相关性及对宫颈癌术后淋巴结转移的预测价值。方法选取2021年3月至2022年5月在菏泽市立医院就诊的100例宫颈癌患者作为宫颈癌组,另选同期诊治的50例低级别鳞状上皮内病变(LSIL)患者作为LSIL组,50例高级别鳞状上皮内病变(HSIL)患者作为HSIL组。比较3组Reid评分、HPV E6/E7 mRNA表达量及血清常规肿瘤标志物[糖类抗原125(CA125)、癌胚抗原(CEA)]水平;分析宫颈癌组Reid评分、HPV E6/E7 mRNA表达量与血清常规肿瘤标志物水平及宫颈癌FIGO分期的相关性;根据宫颈癌组患者术后随访结果分为术后有淋巴结转移和无淋巴结转移,比较有无淋巴结转移患者Reid评分、HPV E6/E7 mRNA表达量及血清CA125、CEA水平,分析Reid评分、HPV E6/E7 mRNA表达量对宫颈癌术后淋巴结转移的预测价值。结果宫颈癌组Reid评分、HPV E6/E7 mRNA表达量及血清CA125、CEA水平均高于HSIL组、LSIL组(P<0.05);HSIL组Reid评分、HPV E6/E7 mRNA表达量及血清CA125、CEA水平均高于LSIL组(P<0.05)。宫颈癌患者Reid评分、HPV E6/E7 mRNA表达量与血清CA125、CEA水平均呈正相关(r=0.405~0.705,P<0.05)。Reid评分、HPV E6/E7 mRNA表达量与宫颈癌FIGO分期呈正相关(r=0.415、0.501,P<0.05)。宫颈癌组术后淋巴结转移患者的Reid评分、HPV E6/E7 mRNA表达量及血清CA125、CEA水平均高于无淋巴结转移的患者(P<0.001)。Reid评分、HPV E6/E7 mRNA表达量、CA125、CEA预测宫颈癌术后淋巴结转移的曲线下面积(AUC)分别为0.756(95%CI:0.657~0.838)、0.760(95%CI:0.662~0.841)、0.803(95%CI:0.710~0.877)、0.768(95%CI:0.670~0.848)。将CA125、CEA联合检测作为常规预测方案,Reid评分、HPV E6/E7 mRNA表达量、CA125、CEA联合检测作为新预测方案,常规预测方案预测宫颈癌术后淋巴结转移的曲线下面积(AUC)为0.826(95%CI:0.724~0.889),新预测方案预测宫颈癌术后淋巴结转移的AUC为0.955(95%CI:0.892~0.987),新预测方案预测的AUC明显大于常规预测方案(Z=1.981,P=0.045)。与常规预测方案比较,新预测方案的净重新分类指数为0.021(95%CI:0.015~0.039)、综合判别改善指数为0.046(95%CI:0.033~0.069),均P<0.05。结论Reid评分、HPV E6/E7 mRNA表达量与宫颈癌FIGO分期及血清CEA、CA125水平相关,且在预测宫颈癌术后淋巴结转移方面具有一定价值。

HPV E6通过Rap1信号通路影响宫颈癌细胞增殖、侵袭及迁移的研究

目的探讨人乳头瘤病毒E6蛋白(human papillomavirus E6 protein,HPV E6)对宫颈癌Hela细胞增殖、侵袭和迁移的影响及潜在分子机制。方法基于Illumina Hiseq 4000转录组测序技术检测12例不同程度的宫颈病变组织之间的基因表达特征,筛选与HPV相关的差异基因;利用GO、KEGG Pathway方法对差异基因进行生物学功能富集分析;Western blotting检测正常宫颈上皮细胞HCerEpic、宫颈癌细胞Hela中Rap、Rap1GAP蛋白表达水平;通过平板克隆实验、Transwell实验和划痕实验检测其增殖、侵袭及迁移能力;通过sh-E6慢病毒转染下调细胞内HPV E6表达,分为对照组(Hela细胞)、空载组(sh-NON)和sh-E6组(低表达HPV E6);下调HPV E6表达,采用平板克隆和CCK-8实验分别检测每组细胞增殖能力和细胞活力;Transwell和划痕实验检测细胞侵袭、迁移能力;Western blotting检测各组细胞中E6、Rap1、Rap1GAP、CyclinD1、E-cadherin、N-cadherin蛋白的表达水平。在sh-E6组基础上过表达Rap1,Western blot检测细胞中Rap1通路及相关蛋白的表达水平;平板克隆实验、Transwell实验和划痕实验分别检测细胞增殖、侵袭和迁移能力。结果测序结果显示,与正常宫颈HPV阴性比较,HPV阳性的正常宫颈、CIN、宫颈癌组织中差异上调表达的基因分别有340、864和1036个;3个数据集寻找共有差异基因共24个。GO|KEGG富集分析24个差异表达基因主要富集在Rap1相关信号通路。与HCerEpic细胞相比,Hela细胞内Rap1表达升高,Rap1GAP表达降低(P<0.01);其细胞的增殖、侵袭和迁移能力增强(P<0.01);下调HPV E6表达后,与Hela组比较,sh-E6组细胞的增殖、细胞集落形成、侵袭和迁移能力降低(P<0.001);Western blotting表明,与Hela组比较,sh-E6组细胞内Rap1、CyclinD1、N-cadherin蛋白表达降低,Rap1GAP和E-cadherin蛋白表达升高(P<0.001)。与sh-E6组相比,过表达Rap1组(sh-E6/OE Rap1)细胞内Rap1/Rap1GAP、CyclinD1、E-cadherin和N-cadherin蛋白表达被恢复(P<0.001),细胞增殖、侵袭迁移能力被恢复(P<0.01)。结论在宫颈癌发展过程中,HPV E6通过激活Rap1信号通路促进宫颈癌细胞增殖、侵袭及迁移。

HPV DNA、HPV E6/E7蛋白和TCT在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌筛查中的价值

目的 探讨人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)DNA、HPV E6/E7蛋白和液基薄层细胞学检查(thin-prep cytology test,TCT)在宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)及宫颈癌筛查中的价值。方法 选取2021年7月至2022年6月于诸暨市人民医院妇科接受早期宫颈癌筛查的成年女性190例为研究对象,分别进行HPV DNA、HPVE6/E7蛋白及TCT检测,并进一步行阴道镜活检检查。比较不同病变患者的HPVDNA、HPVE6/E7蛋白和TCT对高级别病变的诊断效能。结果 CIN3及宫颈癌患者的HPV DNA、HPV E6/E7蛋白、TCT检查及三者联合检测的阳性率均显著高于宫颈炎患者(P<0.05),宫颈癌患者的HPV DNA、HPV E6/E7蛋白、TCT检查及三者联合检测的阳性率均显著高于CIN1患者(P<0.05)。CIN2+患者的HPV DNA、HPV E6/E7蛋白、TCT及三者联合检测的阳性率显著高于CIN1-患者。HPVDNA、HPVE6/E7蛋白、TCT三者联合诊断高级别病变的敏感度、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为90.80%、30.10%、52.32%、79.48%。结论 HPV DNA、HPV E6/E7蛋白及TCT可作为筛查宫颈癌和癌前病变的手段,且三者联合检测的敏感度最高。

宫颈脱落细胞HPVE6/E7 mRNA检测在宫颈癌早期筛查与HPV分型诊断中的应用

目的研究宫颈脱落细胞E6/E7 mRNA检测在宫颈癌早期筛查与HPV分型诊断中的应用价值。方法选取2018年3月至2020年3月安康市妇幼保健院收治的268例宫颈癌疑似病变患者作为研究对象,取宫颈脱落细胞作为实验标本,检测E6/E7mRNA阳性率及拷贝数,并行HPV分型检查。以病理诊断为金标准,其中140例纳入宫颈癌组,128例为非宫颈癌组。并对268例患者进行HPV分型,高危型HPV组212例,低危型HPV组15例,低危混合型HPV组41例,记录宫颈癌发生率。采用多因素回归分析宫颈癌与高危型HPV的影响因素,利用受试者工作曲线(ROC)分析各影响因素单项和联合对检测宫颈癌与HPV分型的准确性。结果宫颈癌组患者E6/E7 mRNA阳性率和拷贝数均高于非宫颈癌组,高危型HPV组患者E6/E7 mRNA阳性率和拷贝数均高于低危型及低危混合型HPV组,差异均有统计学意义(P<0.05)。多因素分析结果显示受教育程度初中及以下(95%CI:0.187~0.836)、孕次≥3次(95%CI:1.079~1.625)、初次性生活时间<18岁(95%CI:1.075~1.611)、鳞状细胞癌抗原(SCC)(95%CI:1.058~1.782)及HPVE6/E7mRNA阳性(95%CI:1.251~2.049)是宫颈癌的高危因素(P<0.05)。年龄(35~65岁)(95%CI:1.134~1.436)、孕次≥3次(95%CI:1.346~2.472)、性伴侣≥3个(95%CI:1.526~2.386)、阴道分泌物异常(95%CI:1.021~1.778)及HPVE6/E7 mRNA阳性(95%CI:1.216~1.920)是高危型HPV的危险因素(P<0.05)。ROC分析显示孕次、初次性生活时间、SCC及HPVE6/E7 mRNA多项联合检测宫颈癌的AUC为0.826,高于单项检测(P<0.05)。年龄、孕次、性伴侣、阴道分泌物及HPVE6/E7 mRNA联合检测高危型HPV的AUC为0.880,高于单项检测(P<0.05)。结论HPVE6/E7 mRNA阳性是宫颈癌和高危型HPV共同的独立影响因素,基于HPVE6/E7 mRNA的多项联合检测较单项检测能显著提高检测宫颈癌与HPV分型的准确性。

宫颈癌组织中黏蛋白5B的表达及与HPV E6/E7 mRNA表达关系

目的:探究宫颈癌组织中黏蛋白5B(MUC5B)表达及与人乳头状瘤病毒(HPV)E6/E7 mRNA表达关系。方法:回顾性收集2018年6月-2021年6月本院收治的疑似宫颈癌患者212例临床资料,均接受宫颈活检,根据病理学诊断结果分为宫颈上皮内瘤变(CIN)Ⅰ级组49例、Ⅱ级组50例、Ⅲ级组51例、宫颈癌组62例。采用全自动核酸检测系统检测宫颈组织HPV E6/E7 mRNA表达,免疫组化法测定宫颈组织MUC5B表达情况。分析宫颈癌组织MUC5B水平与患者临床病理特征关系;Spearman法分析分析MUC5B与HPV E6/E7 mRNA的相关性。采用Kaplan-Meier法分析宫颈癌组织MUC5B表达与患者生存关系。结果:MUC5B阳性表达率、HPV E6/E7 mRNA阳性表达率在CINⅠ级组(24.5%、32.7%)、CINⅡ级组(46.0%、54.0%)、CINⅢ级组(66.7%、74.5%)、宫颈癌组(77.4%、82.3%)均依次增加;不同MUC5B蛋白表达患者其淋巴结转移、浸润深度存在差异;MUC5B与HPV E6/E7 mRNA表达呈正相关;Kaplan-Meier生存曲线显示,MUC5B阴性组3年累积生存率(86.9%)高于MUC5B阳性组(71.7%)(均P<0.05)。结论:宫颈癌组织中MUC5B高表达,且MUC5B蛋白表达与HPV E6/E7 mRNA表达呈正相关,且与患者预后有关。

宫颈HPVE6/E7检测联合计算机辅助诊断TCT及阴道炎检测在宫颈细胞学筛查中的应用价值

目的 分析宫颈人乳头瘤病毒(HPV)E6/E7检测联合计算机辅助诊断宫颈液基细胞学(TCT)及阴道炎检测在宫颈细胞学筛查中的应用价值。方法 采用宫颈HPVE6/E7检测、计算机辅助诊断TCT、阴道炎检测法和阴道炎+TCT+HPVE6/E7检测对2023年2~8月在北京市昌平区中西医结合医院检查的1 586例女性进行宫颈癌筛查,发现181例疑似高级别鳞状上皮内病变(HSIL)病例,对疑似“HSIL”追加病理检查,并以病理检查作为金标准,分析上述筛查4种方法对HSIL的检出率及病理检查结果的一致性,并计算4种筛查方法对HSIL诊断的灵敏度和特异度。结果 181例疑似HSIL患者经病理检查发现共86例HSIL患者。阴道炎检测对HSIL的检出率为16.57%,Kappa值为0.488。计算机辅助诊断TCT检测对HSIL的检出率为24.86%,Kappa值为0.554。宫颈HPVE6/E7检测对HSIL的检出率为19.34%,Kappa值为0.512。阴道炎+TCT+HPVE6/E7检测对HSIL的检出率为38.67%,Kappa值为0.742。阴道炎+TCT+HPVE6/E7检测的AUC值>0.85,预测价值较高,灵敏度、特异度分别为81.40%、84.21%;阴道炎检测、TCT检测、HPVE6/E7检测的AUC值均>0.70,预测价值一般,各检测方法灵敏度、特异度分别为34.88%、52.63%,52.33%、61.05%,40.70%、64.21%。结论 宫颈HPVE6/E7、计算机辅助诊断TCT及阴道炎检测联合筛查可在一定程度上提升宫颈病变的检出率,对宫颈病变诊断具有明显指导意义。

DNA倍体定量分析、HPV E6/E7 mRNA检测及HPV筛查在宫颈病变诊断中的价值

目的比较分析宫颈病变筛查中人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)DNA基因分型检测、DNA倍体定量分析、HPV E6/E7 mRNA检测的价值。方法选取宫颈病变筛查者258例作为研究对象,均接受HPV DNA基因分型检测、HPV E6/E7 mRNA、DNA倍体定量分析及宫颈组织病理检查,对比DNA倍体定量分析、HPV E6/E7 mRNA检测、HPV DNA基因分型检测与宫颈组织病理检查结果,统计分析DNA倍体定量分析、HPV E6/E7 mRNA检测、HPV DNA基因分型检测的价值。以宫颈组织病理检查为金标准。结果DNA倍体定量分析的灵敏性为70.00%(42/60),特异性为77.27%(153/198),准确性为75.58%(195/258),阳性预测值为48.28%(42/87),阴性预测值为89.47%(153/171)。HPV E6/E7 mRNA检测的灵敏性为86.67%(52/60),特异性为59.60%(118/198),准确性为65.89%(170/258),阳性预测值为39.39%(52/132),阴性预测值为93.65%(118/126)。HPV DNA基因分型检测的灵敏性为95.00%(57/60),特异性为39.39%(78/198),准确性为52.33%(135/258),阳性预测值为32.20%(57/177),阴性预测值为96.30%(78/81)。HPV DNA基因分型检测的灵敏性、阴性预测值均高于DNA倍体定量分析、HPV E6/E7 mRNA检测,特异性、准确性、阳性预测值均低于DNA倍体定量分析、HPV E6/E7 mRNA检测(P<0.05),HPV E6/E7 mRNA检测的灵敏性、阴性预测值均高于DNA倍体定量分析,特异性、准确性、阳性预测值均低于DNA倍体定量分析(P<0.05)。结论宫颈病变筛查中HPV DNA基因分型检测的价值高于DNA倍体定量分析及HPV E6/E7 mRNA检测,值得应用。