HPV E6/E7mRNA检测与P16/Ki-67免疫组化检测对宫颈CIN2级病变的筛查价值探究

目的:研究人乳头瘤病毒(Human papilloma virus,HPV)E6/E7mRNA与免疫组化抑癌基因P16/细胞增殖核抗原Ki-67在宫颈上皮内瘤样病变(Cervical intraepithelial neoplasia,CIN)2级病变筛查中的应用价值。方法:选取2020年2月至2023年2月期间本院收治的92例宫颈炎症及病变患者作为研究对象。根据病理检查结果,将CIN2级患者纳入研究组(n=45),宫颈CIN1级和宫颈炎患者纳入对照组(n=47)。对比两组HPV E6/E7mRNA、P16/Ki-67单独及联合检测阳性表达率差异,采用Logistic回归分析影响CIN2诊断的危险因素,并采用受试者工作曲线分析HPV E6/E7mRNA与P16/Ki-67单独及联合检测在宫颈CIN2级病变筛查的价值。结果:研究组HPV E6/E7mRNA、P16/Ki-67单独检测阳性率、联合检测阳性率(82.22%,77.78%,84.44%)高于对照组(63.83%,48.94%,53.19%)(P<0.05)。Logistic回归分析显示HPV E6/E7mRNA、P16/Ki-67是影响CIN2诊断的危险因素(P<0.05);HPV E6/E7mRNA、P16/Ki-67联合检测CIN2级病变的受试者工作特征曲线下面积为0.688(95%CI:0.579~0.798),优于HPV E6/E7mRNA、P16/Ki-67单独预测[0.592(95%CI:0.476~0.708);0.634(95%CI:0.519~0.748)]。联合检测的准确度、灵敏度、特异度(68.8%,84.4%,53.2%)均高于单独检测HPV E6/E7mRNA(59.2%,82.2%,36.2%)、P16/Ki-67(63.4%,77.8%,48.9%)。结论:HPV E6/E7mRNA与P16/Ki-67免疫组化检测在宫颈CIN2级病变筛查中具有一定的应用价值,可以显著提高筛查宫颈CIN2级病变的诊断效能。

下调HPV16 E6/E7表达宫颈癌细胞Siha上清液代谢组学

目的 基于核磁共振氢谱(1H NMR)代谢组学筛选抑制HPV16 E6/E7表达,检测宫颈癌Siha细胞中差异代谢物以及相关通路,以明确感染高危型HPV16宫颈癌发生的关键代谢标志物。方法 通过RNAi片段转染Siha细胞下调E6/E7表达,分为正常对照组(Siha细胞)、空载组(si-NON)、si-E6组与si-E7组,并验证其转染效率。利用1H NMR代谢组学技术揭示干扰Siha细胞中E6/E7表达后所涉及的差异代谢物;结合MetaboAnalyst 5.0在线软件,得到改变的差异性代谢物和相关的代谢途径。结果 荧光倒置显微镜观察细胞荧光存在;Western blotting检测结果显示,与Siha组比较,si-E6组与si-E7组中E6/E7的表达量降低(F=145.8,P<0.001);下调E6/E7表达后,检测13种共有差异代谢物,包括异亮氨酸(Isoleucine),亮氨酸(Leucine),缬氨酸(Valine);MetaboAnalyst 5.0在线软件分析结果提示,以上代谢物主要涉及氨酰-tRNA生物化学合成途径;异亮氨酸、亮氨酸和缬氨酸的生物化学合成途径;酪氨酸、苯丙氨酸以及色氨酸的生物化学合成等10条代谢途径。结论 HPV16感染后通过改变葡萄糖及氨基酸相关代谢促进宫颈癌的进展,为宫颈癌的防治提供理论依据。

人乳头瘤病毒16型E7基因靶向调控cGAS-STING信号通路抑制宫颈癌细胞免疫功能的研究

目的:探讨HPV16 E7靶向调控cGAS-STING信号通路对宫颈癌细胞免疫功能的影响。方法:体外构建HPV16 E7过表达和干扰质粒,转染至SiHa细胞,qPCR检测HPV16 E7 mRNA表达水平,流式细胞术检测CD95、MICA/B、CD73、CD39、CTLA-4和CD25表达。在此基础上分别转染cGAS-siRNA和STING-siRNA至SiHa细胞,CCK8检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡。qPCR和Western blot分别检测cGAS、STING、IFN-Ⅰ、HPV16 E7的mRNA及蛋白表达。流式细胞术检测细胞CD95、MICA/B、CD73、CD39、CTLA-4和CD25表达。结果:STING-siRNA+HPV16 E7过表达组CD95和MICA/B水平降低(P<0.05),CD73、CD39、CTLA-4和CD25水平升高(P<0.05)。cGAS、STING和IFN-Ⅰ蛋白表达水平降低(P<0.05)。STINGsiRNA+HPV16 E7干扰组结果与之相反。结论:HPV16 E7靶向调控cGAS-STING信号通路进而抑制宫颈癌细胞免疫功能。

早期宫颈癌组织中ATG-12表达与HPV16-E6/E7-DNA病毒载量及预后的关系

目的探讨早期宫颈癌组织中自噬相关蛋白-12(ATG-12)与人乳头瘤病毒(HPV)16-E6/E7-DNA病毒载量及预后的关系。方法选取2015年1月至2017年12月期间在安徽皖北煤电集团总医院保存的宫颈活检或手术切除宫颈组织203例,包括30例慢性宫颈炎、18例宫颈上皮内瘤变(CIN)Ⅰ、23例CINⅡ、26例CINⅢ和106例早期(ⅠA2~ⅡB期)宫颈鳞状上皮癌(CSCC)。采用巢式多重聚合酶链式反应(NM-PCR)和免疫组化染色SP法检测组织中HPV 16-E6/E7-DNA病毒载量和ATG-12蛋白表达。分析ATG-12蛋白表达与早期CSCC临床病理特征的关系。随访CSCC患者无瘤生存时间(DFS)。采用Cox风险比例回归模型分析影响CSCC预后的因素。结果CSCC组织ATG-12蛋白阳性表达率为26.42%(28/106),低于慢性宫颈炎和CIN组织(P<0.05)。ATG-12蛋白表达与HPV16-E6/E7-DNA病毒载量呈负相关(r=-0.306,P=0.001;r=-0.436,P=0.001)。ATG-12蛋白表达与FIGO分期、间质浸润、淋巴脉管间隙浸润、淋巴结转移有关(P<0.05)。随访11~64个月,ATG-12蛋白阳性表达患者5年无瘤生存率为78.57%(22/28),ATG-12蛋白表达阴性患者5年无瘤生存率为60.26%(47/78)。多因素Cox风险回归模型结果显示,HPV16-E6/E7-DNA病毒载量和ATG-12蛋白表达是影响患者DFS的独立预后因素(P<0.05)。结论早期宫颈鳞状上皮癌组织中ATG-12阳性表达率低,与HPV16-E6/E7-DNA病毒载量呈负相关,有望成为评估HPV阳性早期宫颈癌患者预后的重要指标。

HPV16 E7和Brn-3a在宫颈癌前病变中的表达及其意义

目的研究HPV16E7和Brn3a在各级宫颈癌前病变(CIN)中的表达情况以及两者之间的关系,从分子生物学水平探讨其作为宫颈癌前病变的特异性标志物的可能性,以期寻找新的宫颈癌前病变筛查方法。方法对71例患者行宫颈薄层细胞学检查(ThinprepCellTest,TCT),并在阴道镜下组织学活检,其TCT残留标本,用RTPCR法检测各标本中HPV16E7和Brn3a的表达。结果HPV16E7和Brn3a表达按细胞学分级和病理学分级其阳性率呈逐级增高趋势,差异均有显著性(P<0.0001)。两者作为宫颈癌前病变和HPV活化状态的诊断标志物,其结果是一致的(P<0.05)。结论TCT残留标本适合进行RTPCR分析研究。HPV16E7可作为宫颈癌前病变和HPV活化状态的生物标志物。Brn3a可作为可靠的CIN3生物标志物和HPV致癌基因转录活化的标志物。HPV16E7和Brn3a相互作用,可能为宫颈高度癌变发展的原因之一。

HPV-16 L1甲基化和HPV E6/E7 mRNA检测宫颈病变的临床价值

目的:探讨HPV-16 L1甲基化程度、HPV E6/E7 mRNA表达水平在检测宫颈病变中的临床价值。方法:选择50例HPV-16感染患者的宫颈脱落细胞学标本,其中CIN1 11例、CIN2 11例、CIN3 21例、宫颈鳞癌(SCC)7例,另取11例病理检测HPV-16阴性或慢性炎症者为对照。采用甲基化敏感性高分辨溶解曲线法检测HPV-16 L1甲基化水平,采用b DNA技术检测HPV E6/E7 mRNA的表达情况。结果:对照组、CIN1组、CIN2组、CIN3组和SCC组HPV-16 L1甲基化阳性率分别为9.1%、72.7%、81.8%、90.5%、100.0%,HPV E6/E7 mRNA阳性率分别为45.5%、72.7%、90.9%、100.0%、100.0%;CIN2以上病变中HPV-16 L1甲基化阳性率均高于对照组,而CIN3以上病变中HPV E6/E7 mRNA阳性率均高于对照组(P均<0.005)。HPV-16 L1甲基化程度和HPV E6/E7 mRNA水平均随宫颈病变严重程度的增加而升高(rS=0.638和0.525,P均<0.001);HPV-16 L1甲基化程度与HPV E6/E7mRNA表达水平呈正相关(rS=0.420,P=0.001)。结论:HPV-16 L1甲基化与HPV E6/E7 mRNA检测在分流HPV感染或细胞学阳性患者方面具有良好的临床应用前景。

HPV16E7抗原HLA-A2限制性CTL表位预测及其合成

目的 预测、合成、纯化及鉴定人乳头瘤病毒E7抗原的HLA A2限制性细胞毒性T淋巴细胞表位 ,为表位抗原特异性鉴定和临床研究提供靶肽。方法 采用超模体、多项式和量化模体方案相结合的方法 ,对靶抗原HPV16E7的HLA A2限制性细胞毒性T淋巴细胞 (CytotoxicTlymphocyte ,CTL)表位进行预测 ,并运用固相合成法合成多肽 ,经RP HPLC纯化及纯度分析 ,用质谱进行定性鉴定。结果 分别预测出了 16个、10个和 3个九肽表位 ,确定其中 5个九肽为候选合成表位 ,各合成肽的纯度都在 95 %以上。经质谱分析 ,各肽的分子量测定值与理论值相符。结论 超模体、多项式和量化模体方案联合应用可提高预测效率 ,避免了在研究E7抗原表位时盲目合成多肽 ;所合成的多肽为高纯度靶肽 。

子宫颈鳞状细胞癌中Aurora-A、MCM7和HPV 16 E7的表达与临床病理特征的关系

目的探讨子宫颈鳞状细胞癌(cervical squamous cell carcinoma,CSCC)中Aurora-A激酶、微小染色体维持蛋白7(minichromosome maintenance protein 7,MCM7)和人乳头瘤病毒16型E7蛋白(human papillomavirus type 16 E7 protein,HPV 16 E7)的表达及与临床病理特征的关系。方法应用免疫组化PV 9001两步法检测子宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)(CIN1者20例、CIN2+3者30例)、40例子宫颈鳞状细胞癌(cervical squamous cell carcinoma,CSCC)及20例慢性子宫颈炎组织中Aurora-A、MCM7及HPV 16 E7的表达,并进行定位、半定量及相互关系的分析。结果 (1)Aurora-A定位于细胞质和细胞核,MCM7蛋白阳性染色定位于细胞核,HPV 16 E7以细胞核和(或)细胞质出现棕黄色颗粒为阳性。(2)AuroraA、MCM7及HPV 16 E7在CSCC组、CIN 2+3组的表达分别高于CIN1组、慢性子宫颈炎组(P<0.008 3)。(3)子宫颈浸润癌中,Aurora-A与HPV 16 E7的表达呈正相关(P<0.001,rs=0.657),MCM7与HPV 16 E7的表达呈正相关(P<0.001,rs=0.616),Aurora-A与MCM7的表达呈正相关(P<0.001,rs=0.597)。(4)Aurora-A表达与肿瘤分化程度、临床分期及有无淋巴结转移相关(P<0.05);MCM7表达与肿瘤分化程度、临床分期相关(P<0.05);HPV 16 E7表达与患者年龄、肿瘤直径、肿瘤分化程度、临床分期及有无淋巴结转移无相关性(P>0.05)。结论 Aurora-A、MCM7及HPV 16 E7的表达随子宫颈病变进展逐渐增加,三者与子宫颈癌发生、发展密切相关,有望成为子宫颈癌早期诊断、早期治疗的生物学指标。

浸润性宫颈癌及宫颈上皮内瘤变组织中HPV16-E7蛋白和端粒酶的表达及意义

目的探讨16型人乳头瘤病毒E7(HPV16-E7)蛋白和端粒酶在浸润性宫颈癌及宫颈上皮内瘤变组织中的表达以及在宫颈癌发生、发展过程中的作用。方法30例浸润性宫颈癌(ICC组);90例宫颈上皮内瘤变(CIN),其中CINⅠ(CINⅠ组)30例,CINⅡ(CINⅡ组)30例,CINⅢ(CINⅢ组)30例。采用免疫组化Elivision二步法检测各组组织标本中HPV16-E7蛋白和端粒酶的表达。另设10例正常宫颈组织标本作为对照组。结果对照组、CINⅠ组、CINⅡ组、CINⅢ组和ICC组中的HPV16-E7蛋白阳性表达率分别为30.0%、63.3%、63.3%、76.7%和96.7%,ICC组和CINⅢ组显著高于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05);而ICC组与CINⅢ组比较,CINⅢ组与CINⅡ组比较,差异均无统计学意义(均P>0.05)。对照组、CINⅠ组、CINⅡ组、CINⅢ组和ICC组的端粒酶阳性表达率分别为30.0%、40.0%、43.3%、70.0%和93.3%,ICC组显著高于CINⅢ组,CINⅢ显著高于CINⅡ组,差异均有统计学意义(均P<0.05);而CINⅡ组与CINⅠ组比较,CINⅠ组与对照组比较,差异均无统计学意义(均P>0.05)。浸润性宫颈癌及宫颈上皮内瘤变患者的HPV16-E7蛋白与端粒酶的表达呈正相关(r=0.376,P<0.01)。结论HPV16-E7蛋白和端粒酶的表达与宫颈癌的发生、发展有关。

表达HPV16-E6/E7基因的人喉鳞癌细胞系的建立

目的建立表达HPV16-E6/E7基因的人喉鳞癌细胞系。方法用阳离子脂质体基因转染技术将携带有HPV16-E6/E7DNA的真核表达质粒导入体外连续传20代的HPV阴性的Lscc-02喉鳞癌细胞系,采用PCR和Western blot检测HPV16-E6/E7基因在Lscc-02细胞系中的整合和表达。结果第22代和第35代细胞中,PCR和Western blot均分别检测出E6/E7基因和蛋白的存在,显示HPV16-E6/E7基因整合于Lscc-02细胞系中并能稳定表达。结论成功建立了表达HPV16-E6/E7基因的人喉鳞癌细胞系,为进一步研究HPV16-E6/E7基因在喉癌细胞中的作用机制以及喉癌的基因治疗奠定了基础。

全酿酒酵母HPV16-E7疫苗的构建及免疫原性研究

目的构建人乳头状瘤病毒16型(HPV16)E7重组全酿酒酵母疫苗,评价疫苗的免疫效应。方法将HPV16 E7 cDNA亚克隆入酵母表达载体pYES2/NT,重组质粒转化酿酒酵母,经诱导表达、热灭活制备全酵母HPV16-E7疫苗,免疫C57BL/6小鼠。ELISA、MTT、LDH法分别检测疫苗诱导的细胞因子、脾淋巴细胞增殖和细胞毒性T淋巴细胞(CTL)应答水平。结果全酵母疫苗能够有效表达HPV16-E7蛋白;疫苗小鼠免疫,能够刺激脾淋巴细胞增殖,并诱导出Th1型细胞因子和特异性CTL杀伤效应;免疫效果优于单纯HPV16-E7蛋白免疫(P<0.01)。结论全酵母疫苗既能表达HPV16-E7蛋白,又能有效诱导特异性CTL免疫应答。研究结果为进一步进行疫苗抗肿瘤疗效研究,提供了实验基础。

宫颈鳞状细胞癌及尖锐湿疣中HPV 16-E6、HPV16-E7蛋白的表达

使用免疫组化方法检测HPV16-E6、HPV16-E7蛋白在宫颈鳞状细胞癌及宫颈尖锐湿疣、外阴尖锐湿疣的情况，结果显示宫颈鳞状细胞癌、宫颈尖锐湿疣及外阴尖锐湿疣中HPV16-E6蛋白的表达分别为50％、0％、0％；HPV16-E7蛋白的表达分别为78.3％、68.4％、85.3％。宫颈鳞状细胞癌及尖锐湿疣中均有HPV16-E7蛋白表达，但同时发现低危型HPV感染中也表达HPV16-E7蛋白，原因尚须进一步研究。

HPV-16 E6、E7基因慢病毒真核表达载体的构建及鉴定

目的构建人乳头瘤病毒(HPV)E6、E7基因慢病毒真核表达载体。方法以Si Ha宫颈癌细胞总RNA为模板,利用RT-PCR技术扩增出E6、E7目的片段;选用病毒载体p Lenti6/V5 Directional TOPO Cloning Kit系统构建E6、E7基因慢病毒真核表达载体;分别使用构建好的E6、E7载体转染病毒包装细胞,获得含病毒的上清液,并测定上清液中慢病毒的滴度。结果质粒测序所得序列与人乳头瘤病毒E6、E7基因序列完全吻合,载体构建成功;慢病毒滴度测定结果显示E6样品的慢病毒滴度为1.5×108TU/m L,E7样品的慢病毒滴度为2×108TU/m L,该滴度能够满足后续研究所需。结论 HPV-16 E6、E7基因慢病毒真核表达载体构建成功,可以为进一步研究人乳头瘤病毒E6、E7基因致病机理奠定物质基础。

干扰素α-2b对宫颈癌细胞HPV16 E6E7基因抑制作用的研究

目的 研究干扰素α- 2b对宫颈癌SiHa细胞生长的调节作用,从细胞生物学及分子生物学水平探讨干扰素α- 2b对宫颈癌细胞SiHa的作用机制。应用RT -PCR半定量检测细胞内HPV16E6E7mRNA表达,观察干扰素α- 2b对宫颈癌SiHa细胞中HPV16E6E7mRNA表达的影响。方法 以不同浓度的人重组干扰素α- 2b含药培养液作用于感染HPV16的人宫颈癌细胞系—SiHa细胞,并设立无药对照,通过MTT及流式细胞分析技术检测该药对细胞生长及增殖的影响;进行细胞凋亡检测并用RT -PCR法半定量检测对HPV16E6E7基因表达的影响。结果 经含有干扰素α- 2b的培养液作用后,细胞数量减少,10 0 0IU/ml的干扰素α- 2b对细胞抑制作用最强;细胞周期各时相中,S期细胞所占比例明显减少;均可诱导细胞凋亡;均使细胞中HPV16E6E7mRNA表达明显减少。结论 干扰素α- 2b不仅可直接抑制宫颈癌细胞的生长,并可能通过抑制HPV16E6E7基因表达的分子机制,达到抑制肿瘤目的。

Survivin、HPV 16-E7蛋白、VEGF在宫颈鳞癌及癌前病变中的表达及临床意义

目的探讨Survivin、HPV16-E7蛋白、血管内皮生长因子(VEGF)在宫颈鳞癌及宫颈上皮内瘤样病变组织中的表达及在宫颈癌发生、发展中的作用。方法采用免疫组化SP法检测50例宫颈鳞癌、90例宫颈上皮内瘤变(其中CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ各为30例)中Survivin、HPV16-E7蛋白及VEGF的表达,另取正常宫颈者20例为对照组。结果 Survivin、HPV16-E7蛋白及VEGF在宫颈鳞癌及宫颈上皮内瘤变(CINⅡ、CINⅢ)中的表达均随宫颈病变而呈递增趋势(P<0.05);Survivin的高表达与分化程度、临床分期及淋巴结转移有关(P<0.05);VEGF的高表达与分化程度、临床分期及淋巴结转移有关(P<0.05);HPV16-E7蛋白的高表达与分化程度、临床分期及淋巴结转移无关(P>0.05)。Survivin与HPV16-E7蛋白和VEGF的表达间存在正相关(r=0.417,P<0.01;r=0.378,P<0.01)。结论 Survivin、HPV16-E7蛋白及VEGF与宫颈癌的发生、发展密切相关。

人乳头瘤病毒HPV16L1-E7C重组腺病毒载体的构建

采用ＰＣＲ方法，从ＨＰＶ１６型野毒株质粒中分离出ＨＰＶ１６Ｌ１（５５５９７１５１ｂｐ）、ＨＰＶ１６Ｅ７Ｃ（６８２８５５ｂｐ）基因片段，采用ＰＣＲ产物的ＴＡ克隆法，将Ｌ１、Ｅ７Ｃ分别插入ｐＧＥＭＴＥａｓｙ载体，构建克隆载体ｐＴＡＬ１、ｐＴＡＥ７Ｃ。ＢａｍＨⅠ、ＨｉｎｄⅢ酶切ｐＴＡＥ７Ｃ，Ｂｇ１Ⅱ、ＣｌａⅠ酶切ｐＴＡＬ１，回收Ｌ１、Ｅ７Ｃ片段，利用ＢａｍＨⅠ、Ｂｇ１Ⅱ酶切产生相同粘末端的特点，产生Ｌ１Ｅ７Ｃ重组基因片段，将其克隆入质粒ｐＢｌｕｅＳｃｒｉｐｔｓｋ，构建了ｐＢＳＬ１Ｅ７Ｃ重组克隆质粒，ＨｉｎｄⅢ、ＸｈｏⅠ酶切ｐＢＳＬ１Ｅ７Ｃ，释放Ｌ１Ｅ７Ｃ基因片段，定向重组入ｐＣＡ１４腺病毒载体，成功构建真核表达载体ＨＰＶ１６Ｌ１Ｅ７Ｃ重组腺病毒载体：ｐＣＡ１４Ｌ１Ｅ７Ｃ。

HPV16-E7在Pichia pastoris酵母中的分泌表达

本研究利用酵母Pichia pastoris真核表达系统表达人乳头瘤病毒16(HPV16)E7蛋白,试图解决新疆维吾尔妇女高发宫颈癌的诊断、疫苗的研究中抗原蛋白需要的问题.依据新疆维吾尔妇女宫颈癌组织克隆获得的HPV16-E7基因序列设计引物,并分别在5’引物和3’引物中引入了EcoR Ⅰ和Xba Ⅰ酶切位点,经PCR扩增后连接到pMD18-T载体上,再将HPV16-E7克隆至穿梭质粒pGAPZαA上,获得的重组穿梭质粒pGAPZαA-E7经线性化后.采用LiCl法将重组穿梭质粒转入酵母细胞内,Zeocin+筛选阳性克隆,经小瓶发酵后,取上清作SDS-PAGE,并做Western印迹检测表达的蛋白质,结果表明HPV16-E7成功地在酵母真核表达系统获得表达,表达产物的分子量分别是22KDa和88KDa,为深入开展HPV16-E7蛋白功能和应用的研究奠定了理论基础.

HPV16 E7通过调控miR-29a-CDK6信号通路促进肿瘤细胞增殖

目的探究人乳头瘤病毒16 E7(HPV16 E7)通过调控细胞内miR-29a表达促进细胞增殖的分子机制,从miRNA的视角探讨高危型HPV的致癌机制。方法将HPV16 E7基因构建到真核表达载体pcDNA3.1(-),将重组质粒及空载质粒分别转染人前列腺癌细胞PC3;通过半定量RT-PCR检测细胞周期相关基因及miR-29a潜在靶基因CDK6、HBP1的表达水平,通过荧光素酶报告实验确定miR-29a的靶基因;将miR-29a mimic及inhibitor分别瞬时转染PC3-E7和PC3-3.1细胞,Western blot检测CDK6蛋白表达,流式细胞术检测细胞周期分布。结果与对照组相比,克隆细胞株PC3-E7中CDK4、CDK6、Cyclin E2、E2F1等细胞周期相关调节因子及miR-29a的潜在靶基因HBP1、CDK6等表达均有不同程度的上调(均P<0.01);而PC3-E7细胞中CDK6蛋白表达水平亦明显高于对照组(P<0.01);miR-29a通过靶向3′-UTR区域调控CDK6基因转录和蛋白表达,E7高表达后下调了miR-29a的表达水平,使得CDK6表达升高,而加速细胞周期G;期向S期进展。上调miR-29a后可以抑制CDK6的表达,并调控下游细胞周期,部分逆转E7的促增殖效应。结论miR-29a与CDK6 mRNA 3′UTR结合并下调其表达,从而抑制细胞的增殖,E7-miR-29a-CDK6信号通路可能是高危型HPV致细胞发生恶性增殖的重要途径。

cFLIP与HPV-16 E7在宫颈组织中的表达及其相互关系

目的检测宫颈病变组织中cFLIP与人乳头瘤病毒-16E7(HPV-16E7)的表达,并研究二者在宫颈组织恶性转化过程中的作用及其相互关系。方法应用免疫组化SP染色法检测40例宫颈癌、40例宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)及20例宫颈炎组织中HPV-16E7与cFLIP的表达情况。结果cFLIP在宫颈癌、CIN及宫颈炎组织中的阳性表达率分别为92.50%、70.00%及30.00%,两两比较差异均有统计学意义(均P<0.05);3种宫颈组织中HPV-16E7的阳性表达率分别为82.50%、75.00%及60.00%,两两比较差异均无统计学意义(均P>0.05)。cFLIP、HPV-16E7表达阳性率与宫颈癌病理类型、组织学分级、淋巴结转移及临床分期无明显关系(均P>0.05)。cFLIP表达与HPV-16E7表达呈正相关(r=0.268,P=0.02)。结论cFLIP在宫颈癌组织中特异性高表达,可能通过抗凋亡作用及逃避免疫监视影响机体对HPV感染的免疫反应,并可能协同HPV-16E7影响细胞生长周期,在宫颈癌的恶性转化过程中共同促进肿瘤的发生、发展。

TCT联合p16/Ki-67双染、HPV E6/E7 mRNA检测在宫颈鳞状上皮内病变中的诊断价值

目的:探讨液基薄层细胞学检查(TCT)联合p16/Ki-67双染、HPV E6/E7 mRNA检测在宫颈鳞状上皮内病变中的诊断价值。方法:选择在郑州大学第一附属医院病理科行细胞学筛查并在1个月内行宫颈组织病理学检查的女性患者624例,年龄18~81岁,均进行了TCT、p16/Ki-67双染、HPV E6/E7 mRNA检测。对比病理学结果,评价各项检测方法单独或联合的诊断价值。结果:病理组织学结果显示624例患者中阴性(慢性炎症)183例,阳性441例(低级别鳞状上皮内病变176例、高级别鳞状上皮内病变227例、鳞状细胞癌38例);TCT阳性376例,阴性248例;p16/Ki-67双染阳性317例,阴性307例;HPV E6/E7 mRNA阳性360例,阴性264例;TCT+p16/Ki-67双染阳性425例,阴性199例;TCT+HPV E6/E7 mRNA阳性434例,阴性190例;3项联合阳性367例,阴性257例。以病理组织学结果为金标准,TCT+p16/Ki-67、TCT+HPV E6/E7 mRNA和3项联合诊断宫颈鳞状上皮内病变的敏感度分别为87.30%、89.11%、77.32%,特异度分别为78.14%、77.60%、86.34%。结论:TCT联合p16/Ki-67双染、HPV E6/E7 mRNA检测可提高宫颈鳞状上皮内病变的诊断效能。