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密码子优化HPV16衣壳基因真核共表达载体的构建及细胞转染
1
作者
刘立鸿
许璐
+2 位作者
李轶杰
张富春
马正海
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第7期663-667,共5页
目的:构建密码子优化的HPV16衣壳基因真核共表达载体pcDNA3.1-L1-IRES-L2。方法:用PCR技术从988载体中获得L1-IRES-L2片段,将该片段克隆到pCR-XL-TO-PO载体,然后定向亚克隆到pcDNA3.1(+)真核表达载体中,从而构建真核共表达载体pcDNA3.1-...
目的:构建密码子优化的HPV16衣壳基因真核共表达载体pcDNA3.1-L1-IRES-L2。方法:用PCR技术从988载体中获得L1-IRES-L2片段,将该片段克隆到pCR-XL-TO-PO载体,然后定向亚克隆到pcDNA3.1(+)真核表达载体中,从而构建真核共表达载体pcDNA3.1-L1-IRES-L2;通过水动力转染技术(hydrodynamics-based transfection)和脂质体细胞转染法(liposome-mediated transfection of cells),检测衣壳基因的体内、外转录情况;重组质粒转染后293T细胞后观察其形态变化,用Western blot方法检测293T细胞中L1衣壳蛋白的表达。结果:酶切和测序结果表明真核共表达载体pcD-NA3.1-L1-IRES-L2构建正确。重组质粒中的L1和L2基因在小鼠肝脏、293T细胞中均发生转录。重组质粒转染293T细胞后出现CPE(cytopathic effect)现象,表明衣壳基因在细胞中已表达。Western blot方法检测发现L1蛋白在293T细胞中表达。结论:成功地构建了pcDNA3.1-L1-IRES-L2共表达真核载体,为进一步研究HPV16感染机制奠定基础。
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关键词
密码子优化
hpv16
衣壳基因
共表达真核载体
细胞转染
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职称材料
题名
密码子优化HPV16衣壳基因真核共表达载体的构建及细胞转染
1
作者
刘立鸿
许璐
李轶杰
张富春
马正海
机构
新疆大学生命科学与技术学院分子生物学重点实验室
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第7期663-667,共5页
基金
国家自然科学基金资助项目(30460008)
文摘
目的:构建密码子优化的HPV16衣壳基因真核共表达载体pcDNA3.1-L1-IRES-L2。方法:用PCR技术从988载体中获得L1-IRES-L2片段,将该片段克隆到pCR-XL-TO-PO载体,然后定向亚克隆到pcDNA3.1(+)真核表达载体中,从而构建真核共表达载体pcDNA3.1-L1-IRES-L2;通过水动力转染技术(hydrodynamics-based transfection)和脂质体细胞转染法(liposome-mediated transfection of cells),检测衣壳基因的体内、外转录情况;重组质粒转染后293T细胞后观察其形态变化,用Western blot方法检测293T细胞中L1衣壳蛋白的表达。结果:酶切和测序结果表明真核共表达载体pcD-NA3.1-L1-IRES-L2构建正确。重组质粒中的L1和L2基因在小鼠肝脏、293T细胞中均发生转录。重组质粒转染293T细胞后出现CPE(cytopathic effect)现象,表明衣壳基因在细胞中已表达。Western blot方法检测发现L1蛋白在293T细胞中表达。结论:成功地构建了pcDNA3.1-L1-IRES-L2共表达真核载体,为进一步研究HPV16感染机制奠定基础。
关键词
密码子优化
hpv16
衣壳基因
共表达真核载体
细胞转染
Keywords
codon optimization
hpv16 capsid gene
eu-karyotic co-expression vector
cell transfection
分类号
R392.7 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
密码子优化HPV16衣壳基因真核共表达载体的构建及细胞转染
刘立鸿
许璐
李轶杰
张富春
马正海
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2008
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