下调HPV16 E6/E7表达宫颈癌细胞Siha上清液代谢组学

目的 基于核磁共振氢谱(1H NMR)代谢组学筛选抑制HPV16 E6/E7表达,检测宫颈癌Siha细胞中差异代谢物以及相关通路,以明确感染高危型HPV16宫颈癌发生的关键代谢标志物。方法 通过RNAi片段转染Siha细胞下调E6/E7表达,分为正常对照组(Siha细胞)、空载组(si-NON)、si-E6组与si-E7组,并验证其转染效率。利用1H NMR代谢组学技术揭示干扰Siha细胞中E6/E7表达后所涉及的差异代谢物;结合MetaboAnalyst 5.0在线软件,得到改变的差异性代谢物和相关的代谢途径。结果 荧光倒置显微镜观察细胞荧光存在;Western blotting检测结果显示,与Siha组比较,si-E6组与si-E7组中E6/E7的表达量降低(F=145.8,P<0.001);下调E6/E7表达后,检测13种共有差异代谢物,包括异亮氨酸(Isoleucine),亮氨酸(Leucine),缬氨酸(Valine);MetaboAnalyst 5.0在线软件分析结果提示,以上代谢物主要涉及氨酰-tRNA生物化学合成途径;异亮氨酸、亮氨酸和缬氨酸的生物化学合成途径;酪氨酸、苯丙氨酸以及色氨酸的生物化学合成等10条代谢途径。结论 HPV16感染后通过改变葡萄糖及氨基酸相关代谢促进宫颈癌的进展,为宫颈癌的防治提供理论依据。

HPV16 E6-295T/G和E6-350T/G变异位点影响IFNκ、MHC-Ⅰ、STAT1和IRF9蛋白质表达的研究

目的探讨HPV16(Human Papillomavirus Type 16)E6-295T/G和E6-350T/G变异位点对IFNκ、MHC-Ⅰ、STAT1和IRF9蛋白质表达的影响。方法在宫颈癌细胞C33A(HPV阴性)中分别转染真核表达载体295G/350G-GV230、295T/350G-GV230和295T/350T-GV230作为实验组,以NC-GV230作为对照组。通过免疫组织化学法、Western blot方法检测HPV16 E6295T/G、350T/G不同变异位点对IFNκ、MHC-Ⅰ、STAT1和IRF9蛋白质表达的影响。通过IBM SPSS Statistics 26软件对实验结果进行统计学分析,P<0.05为差异具有统计学意义,免疫组织化学法定量采用image J软件进行阳性细胞计数。结果Western blot结果显示,免疫分子干扰素κ(Interferon Kappa,IFNκ)的表达,HPV16 E6-295G/350G变异组较HPV16 E6-295T/350T原型组和HPV16 E6-295T/350G组降低(P<0.01,P<0.05)。HPV16 E6-295G/350G变异组的免疫分子主要组织相容性复合体I类(Major Histocompatibility Complex Class I,MHC-I)的表达显著低于HPV16 E6-295T/350T原型组和HPV16 E6-295T/350G组(P<0.05)。HPV16 E6-295G/350G变异组的信号转导子和转录激活子1(Signal Transducer and Activator of Transcription 1,STAT1)表达显著低于HPV16 E6-295T/350T原型组和HPV16 E6-295T/350G组(P<0.05,P<0.01)。变异组HPV16 E6-295G/350G与HPV16 E6-295T/350T原型组和HPV16 E6-295T/350G变异组相比,干扰素调节因子9(Interferon Regulatory Factor 9,IRF9)表达显著降低(P<0.05,P<0.01)。结论HPV16病毒E6蛋白质可以降低IFNκ、MHC-Ⅰ、STAT1和IRF9的蛋白质表达水平,E6基因T295G/T350G变异降低这些分子的表达作用最强。

PRDX2调控HPV16 E6对宫颈癌Siha细胞活性的影响

目的探究PRDX2在宫颈癌组织中的表达以及对宫颈癌Siha细胞的恶性生物学行为的影响。方法免疫组化方法检测宫颈癌组织以及癌旁组织中PRDX2的表达;将宫颈癌Siha细胞设置为4个组:Siha组、siRNA NC组、siRNA PRDX2组与siRNA HPV16 E6组。EDU染色法检测Siha细胞的生长活性;Transwell实验方法分析Siha细胞的侵袭数量;流式细胞术检测Siha细胞的凋亡情况;蛋白免疫印迹方法分析Siha细胞中PRDX2/HPV16 E6蛋白的表达水平。结果与宫颈癌旁组织比较,宫颈癌组织PRDX2的表达上调。与Siha组和siRNA NC组比较,siRNA PRDX2和siRNA HPV16 E6组的Siha细胞增殖能力下降(P<0.05);siRNA PRDX2和siRNA HPV16 E6组的Siha细胞侵袭数量下降(P<0.05);siRNA PRDX2和siRNA HPV16 E6组的Siha细胞凋亡率增加(P<0.05);siRNA PRDX2组的Siha细胞的HPV16 E6蛋白表达下调(P<0.05)。结论PRDX2在宫颈癌组织中表达增加,抑制PRDX2表达后,Siha细胞的增殖速度与侵袭数量降低,凋亡率增加,该机制与PRDX2调节HPV16 E6蛋白的表达相关。

HPV16 E6 下调 DHRS2 表达可介导宫颈上皮细胞的致癌转化

目的探讨HPV16 E6对宫颈上皮细胞基因及信号通路的影响,筛选与致癌转化相关的基因。方法构建HPV16 E6感染的正常人宫颈上皮细胞(HUCEC)模型,进行转录组测序筛选差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs),并进行基因本体(Gene Ontology,GO)和京都基因和基因组(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)富集分析差异信号通路。采用RT-qPCR验证主要差异下调表达基因。对主要差异基因的蛋白结构与HPV16 E6蛋白进行分子对接预测分析,通过RT-qPCR及Western blot验证HUCEC细胞模型中主要差异基因表达情况,并采用RT-qPCR及Western blot实验在宫颈癌细胞系SiHa及CaSki中进一步验证差异基因的表达。结果共筛选出差异表达2倍以上的基因55个。本研究聚焦下调差异基因,结果表明:负调控的差异基因GO功能富集于氧化还原过程;KEGG富集分析主要与碳水化合物代谢及癌症等相关。10个差异基因mRNA下调表达趋势与测序结果基本一致。分子对接预测DHRS2与HPV16 E6蛋白存在相互作用。与对照组比较,HUCEC细胞模型中HPV16 E6下调DHRS2的mRNA(P<0.01)和蛋白(P<0.05)、ETV5的蛋白(P<0.01)表达;在SiHa、CaSki细胞系中,与对照组比较,DHRS2的mRNA及蛋白表达亦明显下调(P<0.05),并与P53蛋白表达趋势正相关。结论HPV16 E6可能通过下调DHRS2表达介导宫颈细胞致癌转化,促进宫颈癌发生。

HPV E6/E7mRNA检测与P16/Ki-67免疫组化检测对宫颈CIN2级病变的筛查价值探究

目的:研究人乳头瘤病毒(Human papilloma virus,HPV)E6/E7mRNA与免疫组化抑癌基因P16/细胞增殖核抗原Ki-67在宫颈上皮内瘤样病变(Cervical intraepithelial neoplasia,CIN)2级病变筛查中的应用价值。方法:选取2020年2月至2023年2月期间本院收治的92例宫颈炎症及病变患者作为研究对象。根据病理检查结果,将CIN2级患者纳入研究组(n=45),宫颈CIN1级和宫颈炎患者纳入对照组(n=47)。对比两组HPV E6/E7mRNA、P16/Ki-67单独及联合检测阳性表达率差异,采用Logistic回归分析影响CIN2诊断的危险因素,并采用受试者工作曲线分析HPV E6/E7mRNA与P16/Ki-67单独及联合检测在宫颈CIN2级病变筛查的价值。结果:研究组HPV E6/E7mRNA、P16/Ki-67单独检测阳性率、联合检测阳性率(82.22%,77.78%,84.44%)高于对照组(63.83%,48.94%,53.19%)(P<0.05)。Logistic回归分析显示HPV E6/E7mRNA、P16/Ki-67是影响CIN2诊断的危险因素(P<0.05);HPV E6/E7mRNA、P16/Ki-67联合检测CIN2级病变的受试者工作特征曲线下面积为0.688(95%CI:0.579~0.798),优于HPV E6/E7mRNA、P16/Ki-67单独预测[0.592(95%CI:0.476~0.708);0.634(95%CI:0.519~0.748)]。联合检测的准确度、灵敏度、特异度(68.8%,84.4%,53.2%)均高于单独检测HPV E6/E7mRNA(59.2%,82.2%,36.2%)、P16/Ki-67(63.4%,77.8%,48.9%)。结论:HPV E6/E7mRNA与P16/Ki-67免疫组化检测在宫颈CIN2级病变筛查中具有一定的应用价值,可以显著提高筛查宫颈CIN2级病变的诊断效能。

TCT联合p16/Ki-67双染、HPV E6/E7 mRNA检测在宫颈鳞状上皮内病变中的诊断价值

目的:探讨液基薄层细胞学检查(TCT)联合p16/Ki-67双染、HPV E6/E7 mRNA检测在宫颈鳞状上皮内病变中的诊断价值。方法:选择在郑州大学第一附属医院病理科行细胞学筛查并在1个月内行宫颈组织病理学检查的女性患者624例,年龄18~81岁,均进行了TCT、p16/Ki-67双染、HPV E6/E7 mRNA检测。对比病理学结果,评价各项检测方法单独或联合的诊断价值。结果:病理组织学结果显示624例患者中阴性(慢性炎症)183例,阳性441例(低级别鳞状上皮内病变176例、高级别鳞状上皮内病变227例、鳞状细胞癌38例);TCT阳性376例,阴性248例;p16/Ki-67双染阳性317例,阴性307例;HPV E6/E7 mRNA阳性360例,阴性264例;TCT+p16/Ki-67双染阳性425例,阴性199例;TCT+HPV E6/E7 mRNA阳性434例,阴性190例;3项联合阳性367例,阴性257例。以病理组织学结果为金标准,TCT+p16/Ki-67、TCT+HPV E6/E7 mRNA和3项联合诊断宫颈鳞状上皮内病变的敏感度分别为87.30%、89.11%、77.32%,特异度分别为78.14%、77.60%、86.34%。结论:TCT联合p16/Ki-67双染、HPV E6/E7 mRNA检测可提高宫颈鳞状上皮内病变的诊断效能。

p16/Ki-67双染、HPV E6/E7 mRNA联合检测与单独检测对宫颈癌前病变检出效能的比较

目的比较p16/Ki-67双染、HPV E6/E7 mRNA联合检测与单独检测对宫颈癌前病变的检出效能。方法收集2021—2022年接受宫颈癌前病变筛查的患者112例,液基薄层细胞检测(TCT)宫颈细胞的病变情况,并经病理学检查确诊。根据宫颈HPV E6/E7 mRNA检测试剂盒检测宫颈脱落细胞的HPV E6/E7 mRNA水平,利用CINtec PLUS细胞学试剂盒检测宫颈细胞p16/Ki-67双染情况。分析p16/Ki-67双染、HPV E6/E7 mRNA单独或联合检测对宫颈癌前病变检出效能的影响。结果112例宫颈癌前病变筛查患者的病理学结果显示,低度鳞状上皮内病变(LSIL)33例,高度鳞状上皮内病变(HSIL)79例。HPV E6/E7 mRNA阳性72例(64.3%),阴性40例(35.7%);p16/Ki-67双染阳性83例(74.1%),阴性29例(25.9%)。不同癌前病变组间HPV E6/E7 mRNA表达和p16/Ki-67双染间差别均有统计学意义(P<0.05)。不同年龄段癌前病变组间差别有统计学意义(P<0.05),HPV E6/E7 mRNA表达和p16/Ki-67双染间差别无统计学意义(P>0.05)。HPV E6/E7 mRNA联合p16/Ki-67双染检测宫颈癌前病变的敏感度和准确性均高于两者单独检测,阴性预测值高于HPV E6/E7 mRNA单独检测(P<0.05)。两者联合检测HSIL的敏感度、特异度和阳性预测值均高于HPV E6/E7 mRNA单独检测,准确性和阴性预测值均高于两者单独检测。另外,p16/Ki-67双染检测HSIL的敏感度、准确性和阴性预测值均高于HPV E6/E7 mRNA单独检测(P<0.05)。结论HPV E6/E7 mRNA和p16/Ki-67双染联合检测在宫颈癌前病变检出中具有临床价值。

重组人干扰素α2b联合洁悠神对宫颈持续HPV感染患者端粒酶与HPV16/18 E6蛋白表达的影响

目的对重组人干扰素α2b(rh IFN-α2b)联合洁悠神治疗宫颈持续HPV感染的临床效果及其对端粒酶与HPV16/18 E6蛋白表达的影响进行研究。方法随机选取2015年1月-2016年1月于常州市第一人民医院进行治疗的宫颈持续人乳头瘤病毒(HPV)感染的108例患者,按照数字随机表法分为观察组和对照组各54例,对照组使用rh IFN-α2b治疗,观察组在对照组的基础上使用洁悠神治疗。分别对两组患者的疗效、临床指标进行统计,并检测端粒酶与HPV16/18 E6蛋白的表达水平。结果观察组治疗有效率与对照组比较,差异有统计学意义(χ~2=5.240,P=0.022);观察组患者治愈时间周、阴道排液时间以及出血时间与对照组比较,差异有统计学意义(t=3.485、4.765、4.365,P=0.001、0.000和0.000),观察组均短于对照组;治疗后观察组的HPVDNA负荷量低于对照组,并且转阴率与对照组比较,差异有统计学意义(χ~2=6.546,P=0.000);治疗后两组患者的端粒酶阳性率和HPV16/18 E6蛋白阳性率均降低,差异有统计学意义(χ~2=4.746、4.964,均P=0.000),其中观察组患者端粒酶阳性率和HPV16/18 E6蛋白阳性率均低于对照组。结论联合使用rh IFN-α2b和洁悠神治疗宫颈持续HPV感染具有良好的治疗效果,可有效降低端粒酶和HPV16/18 E6蛋白阳性率,并可降低患有宫颈癌的风险。

喉癌组织中HPV16/18E6、p53和EZH2的表达及其相关性分析

目的检测HPV16/18E6、p53和EZH2在喉鳞状细胞癌(喉癌)组织中的表达,探讨它们在肿瘤发生发展过程中的相互作用。方法采用免疫组化En Vision法检测78例喉癌、15例癌旁正常组织、20例声带息肉中HPV16/18E6、p53和EZH2蛋白的表达情况,分析它们的表达与喉癌临床病理特征之间的关系以及三者之间的相关性。结果喉癌组织、癌旁正常组织、声带息肉中HPV16/18E6蛋白的阳性表达率分别为47.4%(37/78)、20.0%(3/15)和0(0/20);p53蛋白阳性表达率为60.3%(47/78)、33.3%(5/15)和0(0/20);EZH2蛋白阳性表达率为65.4%(51/78)、40.0%(6/15)和5.0%(1/20),差异均具统计学意义(P<0.05)。HPV16/18E6、EZH2的阳性表达率均随肿瘤T分期升高而增高(P<0.05);淋巴结转移组HPV16/18E6、p53阳性表达率高于无淋巴结转移组(P<0.05);p53阳性表达率随分化程度升高而增高(P<0.05)。p53和EZH2阳性表达表达一致(kappa值=0.451,P<0.05)。结论 HPV16/18E6、p53和EZH2蛋白表达与喉癌的发生关系密切。EZH2过表达与p53失活有关,二者在促进喉癌发展过程中发挥重要作用。

子宫颈癌、子宫颈上皮内病变组织中SIRT1、HPV 16/18E6的表达及其意义

目的检测子宫颈癌及癌前病变中SIRT1的表达情况,探讨其与临床病理特征的关系。同时检测早期癌蛋白中HPV16/18E6的表达,分析两者的相关性。方法应用免疫组化En Vision法检测30例子宫颈炎、100例子宫颈上皮内病变(高级别、低级别各50例)、30例子宫颈鳞状细胞癌组织中SIRT1和HPV 16/18E6的表达。结果子宫颈癌组织中SIRT1阳性率为93.33%(28/30),高于子宫颈炎组织(13.33%,4/30),差异有统计学意义(P<0.05)。子宫颈高级别上皮内病变SIRT1阳性率(88%,44/50)高于低级别上皮内病变(14%,7/50),差异有统计学意义(P<0.05)。但高级别上皮内病变与子宫颈癌SIRT1阳性率差异无统计学意义(P>0.05);低级别上皮内病变与子宫颈炎中SIRT1阳性率差异无统计学意义(P>0.05)。在子宫颈癌中,SIRT1的阳性率与临床分期和组织学分级有关,晚期、分化差的子宫颈癌阳性率高于早期、分化好的子宫颈癌,差异有统计学意义(P<0.05)。在子宫颈癌中SIRT1的阳性率(93.33%,28/30)高于HPV 16/18E6(30%,9/30),在子宫颈高级别上皮内病变中SIRT1的阳性率(88%,44/50)高于HPV 16/18E6(28%,14/50),但在低级别上皮内病变中SIRT1的阳性率(14%,7/50)低于HPV 16/18E6(36%,18/50),两者差异有统计学意义(P<0.05)。结论 SIRT1的阳性率随着病变程度增加而升高,提示SIRT1与细胞恶性转变有关,其过表达可能促进上皮向高级别内病变乃至子宫颈癌进展。

宫颈鳞癌和癌前病变中eIF-4E表达及其与HPV16/18感染的关系

目的探讨真核翻译启始因子eIF-4E在宫颈鳞癌和癌前病变中的表达规律及其与人乳头瘤病毒(HPV)感染之间的关系。方法采用免疫组化ABC法和原位杂交技术检测eIF-4E蛋白和HPV16/18DNA在10例正常宫颈鳞状上皮,29例低级别上皮内瘤变(CIN1级),31例高级别上皮内瘤变(CIN2、3级)和31例宫颈鳞癌中的表达。结果eIF-4E在正常宫颈鳞状上皮中呈阴性表达,随着上皮病变级别升高,表达逐渐增强:低级别<高级别上皮内瘤变<宫颈鳞癌(P<0.05),且在宫颈鳞癌中表达更强;HPV16/18DNA在四组中的阳性表达率,除高级别上皮内瘤变和宫颈鳞癌两组之间没有差别(均为96.8%)以外,其余各组之间差异均有显著性(P<0.01);在低级别、高级别上皮内瘤变和宫颈鳞癌三组中eIF-4E蛋白表达和HPV感染均呈明显正相关(P<0.01)。结论宫颈鳞癌的发生与eIF-4E蛋白表达及HPV16/18感染密切相关;二者在宫颈鳞癌的发病机制中可能起着协同作用。

HPV16/18E6、cyclinD1、hTERT在喉癌组织中的表达及意义

目的:检测人乳头状瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)16/18E(HPV16/18E6),周期素D1(CyclinD1)、端粒酶逆转录酶(Human telomerase transcriptase,hTERT)在喉癌组织中的表达水平,探讨HPV16/18E6、cyclinD1、hTERT与喉癌的关系。方法:收集手术标本的石蜡切片42例,用免疫组织化学法检测喉癌组织中HPV16/18E6、cyclinD1、hTERT的表达情况。结果:(1)在喉癌组织中,HPV16/18E6、cyclinD1、hTERT阳性表达率分别为42.9%(18/42)、50.0%(21/42)、83.3%(35/42),明显高于对照组。(2)在喉癌组织中,HPV16/18E6和cyclinD1阳性表达率随T分期的增加及淋巴结转移而升高。hTERT阳性表达率随T分期增加而升高,而与淋巴结转移无关。三者都与年龄及性别无关。(3)HPV16/18E与cyclinD1,HPV16/18E与hTERT两者相互间都呈正相关。结论:(1)HPV16/18E6、cyclinD1、hTERT的高表达可能与喉癌的发生及发展相关。(2)喉癌中HPV16/18E6与cyclinD1,HPV16/18E6与hTERT之间可能存在相互作用,这种相互作用可能导致喉癌的发生,这可能为HPV16/18与喉癌发生之间的关系研究提供重要信息。

p53基因第72位密码子多态性与宫颈癌及HPV-16、18E6之间关系的研究

目的探讨宫颈癌及其癌前病变中p53基因第72位密码子多态性的表达及其与HPV16、18E6表达之间的关系，以了解p58基因第72位密码子多态性是否可以作为预测宫颈癌发生的一项高危因子。方法以PCR法检测81例宫颈鳞癌（高分化13例、中分化24例、低分化44例；Ⅰb期24例、Ⅱa期15例、Ⅱb期37例、Ⅲa期5例）、18例宫颈腺癌、88例宫颈上皮内瘤样病变（CINⅡ30例、CINⅢ58例）及60例正常宫颈组织中p53基因第72位密码子多态性及HPV16、18E6的表达。结果p53Arg纯合子、p53Arg／Pro杂合子及p53Pro纯合子在宫颈鳞癌、腺癌和CIN（Ⅱ～Ⅲ）中分别占58．02％、30．86％、11．12％；55．55％、27．78％、16．67％I59．09％、21．59％、19．32％。各组中p53Arg纯合子明显高于p53Arg／Pro杂合子及p53Pro纯合子，且差异有统计学意义（P〈0．05IP〈0．01）。正常宫颈组织中p53Arg纯合子、p53Arg／Pro杂合子及p53Pro纯合子分别为23．33％、40．OO％、36．67％，三者间无统计学意义（P〉0．05）。宫颈癌组（鳞癌及腺癌）、CIN（Ⅰ～Ⅱ）组中p53Arg纯合子均高于正常对照组中p53Arg纯合子，且差异有统计学意义（P〈0．05）；宫颈鳞癌中HPVl6、18E6（＋）亚组中p53Arg纯合子显著高于HPV16、18E6（-）亚组及HPVl6、18E6（＋）正常对照组亚组（P〈0．05，P〈0．01）。各组中p53Arg纯合子均高于p53Pro纯合子（P〈0．05）；p53Arg纯合子及等位基因均未随宫颈癌临床分期及分化程度而变化，与宫颈癌前病变程度亦无关系。结论p53Arg纯合子可作为预测宫颈癌及其癌前病变的一项高危因子，与高危型HPVE6同时检测可提示宫颈病变的发展趋势；p53Arg纯合子与宫颈癌临床分期及分化程度无明显相关性。

HLA-DR抗原及HPV16/18E6蛋白在宫颈癌组织的表达及意义

目的:通过检测HLA-DR抗原及HPV16/18E6蛋白在宫颈癌组织中的表达情况,探讨由HLA-DR抗原介导的免疫应答在感染高危型人乳头瘤病毒(HPV)至发展为宫颈癌过程中的作用机制。方法:采用免疫组织化学SP法检测正常宫颈、宫颈上皮内瘤病变(CIN)及宫颈癌组织中HLA-DR抗原及HPV16/18E6的表达情况。结果:HLA-DR抗原的阳性表达率在正常宫颈、CIN、宫颈癌组织中分别为37.5%、73.3%、81.8%,而HPV16/18E6蛋白的阳性表达率则分别为37.5%、60.0%、75.8%,两者在3组的表达差异显著,P均<0.05。HLA-DR抗原及HPV16/18E6蛋白在宫颈癌组织中的阳性表达率随临床分期、分化程度及淋巴结是否转移而不同,但无显著性差异,P均>0.05。结论:HLA-DR抗原递呈病毒抗原给T细胞引起的免疫应答可能在宫颈癌的发生发展过程中起重要的作用。

宫颈腺癌p53、HPV16/18-E6蛋白和ER的表达及其临床意义

目的 探讨宫颈腺癌组织中 p5 3蛋白、HPV16 / 18 E6蛋白及ER的表达及其临床意义。 方法 采用免疫组织化学S P法对 6 3例宫颈腺癌组织进行p5 3蛋白、HPV16 / 18 E6蛋白及ER检测。结果 6 3例宫颈腺癌中p5 3、HPV16 / 18 E6蛋白和ER阳性表达率分别为为 5 2 .3%、31.7%和 4 9.2 %。p5 3表达与肿瘤病理分级、临床分期 (Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期 )有关。HPV16 / 18 E6、ER的表达与宫颈腺癌的病理学分级、临床分期无关 ,但与 p5 3表达呈负相关 (P <0 .0 1) ,HPV16 / 18 E6、ER在宫颈腺癌中的表达呈正相关 (P <0 .0 1)。结论 随宫颈腺癌组织病理分级和临床分期增高p5 3阳性表达率逐渐增高 ,可能与 p5 3突变有关 ,部分宫颈腺癌的发病可能与HPV16 / 18 E6蛋白过度表达有关。部分宫颈腺癌可能属于激素依赖性 ,雌激素可能有协同HPV致癌的作用。

HPV16、18E6基因在喉癌组织中的表达

目的 检测HPV16、18E6基因在喉癌中的表达 ,探讨其在喉癌发病过程中的作用。方法 应用RT PCR、琼脂糖凝胶电泳方法检测 30例声带息肉组织及 48例喉癌组织。结果 30例声带息肉组织中 6 .6 7% (2 30 )有HPV16、18E6基因表达 ,48例喉癌组织中 87.5 % (4 2 48)扩增HPV16E6基因 ,79.17% (38 48)有HPV18E6基因表达。HPV16、18E6基因与喉癌的临床分型、病理分化程度、临床分期无明显关系 (P >0 .0 5 ) ,与淋巴结转移有关 (P <0 .0 5 )。结论 HPV16、18E6基因与喉癌的发生密切相关 ,是喉癌恶性转化的关键 。

多重PCR技术检测宫颈癌组织中HPV16、18和11/6E_6基因的研究

目的 :研究宫颈癌发病与 HPV16、18E6基因的关系。方法 :采用多重 PCR技术检测 83例宫颈癌组织中 HPV16、18及 11/ 6 E6基因。结果 :( 1)新疆地区 36例宫颈癌中 HPV E6基因检出率为 86 .11% ( 31/ 36 ) ,其中HPV16 E6占构成比 80 .5 6 % ( 2 5 / 31)。 ( 2 )山西地区宫颈癌中 HPV DNA阳性检出率 5 1.0 6 % ( 2 4/ 47) ,其中HPV16 E6占构成比 5 0 .0 0 % ( 12 / 2 4)。 ( 3)两组 HPV E6阳性检出率比较 P <0 .0 1,差异有显著性。两组 HPV16E6构成比比较 ,P >0 .0 5 ,差异无显著性。结论 :宫颈癌发生与 HPV感染的关系密切 ,且新疆地区比山西地区更为密切。两组 HPV感染以

β-D-葡聚糖通过下调HPV16 E6和重新激活p53调节HPV16阳性宫颈癌细胞的生物学行为

目的:研究β-D-葡聚糖在宫颈癌细胞中的作用及可能机制。方法:CCK-8法检测β-D-葡聚糖对宫颈癌细胞CaSki、HeLa和SiHa细胞增殖的影响,伤口愈合试验检测细胞迁移情况,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡情况。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测细胞中HPV16 E6/E7、HPV18 E6/E7、p53和p21 mRNA表达水平,Western blot检测N-钙黏蛋白、E-钙黏蛋白、p53、波形蛋白、p21蛋白表达水平。以宫颈癌CaSki细胞为研究对象,在雌性BALB/c小鼠皮下注射成瘤,验证β-D-葡聚糖在体内对肿瘤生长的抑制作用。结果:β-D-葡聚糖对不同宫颈癌细胞增殖的影响不同,对CaSki细胞增殖有显著的时间依赖性抑制作用,对HeLa细胞增殖无显著影响,对SiHa细胞作用72h后表现为促进增殖作用(P<0.05)。β-D-葡聚糖对CaSki、HeLa和SiHa细胞的迁移都有抑制作用(P<0.05)。β-D-葡聚糖对CaSki、SiHa的细胞周期有调节作用并能促进其凋亡(P<0.05),但对HeLa细胞无显著影响。与对照组相比,β-D-葡聚糖处理组CaSki和HeLa细胞中HPV16 E6 mRNA表达水平降低,p53和p21 mRNA表达水平在3种细胞中均升高(P<0.05)。与对照组相比,β-D-葡聚糖处理组3种细胞波形蛋白表达量降低,E-钙黏蛋白、p53和p21表达量增加(P<0.05)。结论:β-D-葡聚糖抑制宫颈癌细胞中HPV16 E6表达并上调p53和p21表达,抑制HPV16阳性宫颈癌细胞的增殖、迁移,调节细胞周期,促进细胞凋亡,并在体内发挥抗肿瘤作用。

p16^(INK4a)与HPV16/18-E6在宫颈组织中的表达及其临床意义

目的研究p16INK4a与HPV在不同宫颈组织中的表达及其临床意义,以寻求预测宫颈癌前病变及宫颈癌进展及预后的生物学标记。方法选取不同的宫颈组织,采用免疫组织化学方法检测宫颈组织上HPV16/18-E6和p16INK4a的表达,并结合临床资料进行分析。结果HPV16/18-E6和p16INK4a在正常宫颈组织、慢性宫颈炎组织和宫颈上皮内瘤变组织CIN I级上呈阴性表达或弱表达,在CINⅢ级和宫颈癌组织上表达明显增强(P<0.01)。p16INK4a在宫颈癌上的表达和宫颈癌的病理分化和肌层浸润程度有明显的相关性(P<0.01)。结论HPV16/18-E6和p16INK4a在宫颈CIN III和宫颈癌上的表达有明显的相关性。p16INK4a和HR-HPV联合检测可提高对宫颈癌前变及宫颈癌的早期诊断率。

HPV(16/18)E6、PKR、p-PKR、p-EIF2α在宫颈病变组织表达的意义

目的:探讨HPV(16/18)E6、蛋白激酶R(PKR)、磷酸化型PKR(p-PKR)、磷酸化型真核细胞翻译起始因子2α(p-EIF2α)在各级别宫颈病变组织的表达差异与宫颈病变级别的相关性及对宫颈癌患者预后的影响。方法:采用免疫组化法检测HPV(16/18)E6、PKR、p-PKR、p-EIF2α在63例宫颈癌、114例宫颈上皮内瘤样病变(CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ)、15例正常宫颈组织中的表达。结果:HPV(16/18)E6在各组的阳性表达率为6.7%、15.4%、22.9%、27.5%、39.7%,宫颈癌组明显高于正常组及CINⅠ组(P<0.01,P<0.05);PKR在各组的阳性表达率为6.7%、17.9%、25.7%、30.0%、46.0%,宫颈癌组明显高于正常及CINⅠ-Ⅱ组(P<0.01,P<0.01,P<0.05);p-PKR在各组的阳性表达率(6.7%、15.4%、20.0%、15.0%、15.9%)无统计学差异(P>0.05);p-EIF2α在各组的阳性表达率为6.7%、23.1%、31.4%、40.0%、30.2%,CINⅢ组高于正常宫颈组(P<0.05);HPV(16/18)E6、PKR在各组的阳性表达率与宫颈病变级别成正相关(P<0.05,P<0.05);在宫颈癌组,PKR的阳性表达率明显高于p-PKR(P<0.01);宫颈癌患者临床分期晚者病情进展快(P<0.01),p-PKR、p-EIF2α阴性表达者病情进展快(P<0.05,P<0.05)。结论:HPV(16/18)E6使p-PKR、p-EIF2α失活,促进宫颈病变进展,导致宫颈癌患者预后不良;p-PKR、p-EIF2α能抑制病情进展,改善其预后。