用虫体抗原进行斑点酶联免疫吸附试验检测弓形虫抗体的研究

应用完整弓形虫速殖子为抗原,以HRP-SPA代替酶标第二抗体进行Dot ELISA检测58例兔血清中弓形虫抗体,同时用速殖子可溶性抗原检测比较。两种抗原检测结果一致。阳性反应最高稀释度为1:25600。本法检测阿米巴阳性兔血清、感染球虫的兔血清,血吸虫阳性兔血清无交叉反应。阻抑试验显示高抗体滴度的阳性兔血清经抗原吸收后,反应明显抑制。实验表明本法特异性强、敏感性高、重复性好抗原制备简单不需特殊设备。为人畜弓形虫病临床诊断、流行病学现场调查、单克隆抗体杂交瘤细胞的筛选提供了一种较理想的简易可行的方法。

HRP-SPA ELISA检测猪日本乙型脑炎病毒抗体的研究

将盐析法提纯的、用Hela细胞系增殖的猪日本乙型脑炎病毒JapaneseBencephalitis(JEV)抗原包被酶标板,以HRP-SPA作为第二抗体,建立了检测JEV抗体的ELISA试验方法。结果表明,抗原的最适包被浓度为1∶800,待检血清最适稀释度为1∶50,HRP-SPA最佳工作浓度为1∶1000,各步反应时间确定为5min。交叉试验、阻断试验、重复性试验、敏感性试验证明本实验特异性强,重复性好,敏感性高。包被的病毒抗原经甲醛固定15min即可进行正式试验。确定其测定标准为:S/N≥14.81为阳性,S/N<12.53为阴性,12.53≤S/N<14.81为可疑。

快速ELISA法诊断犬内脏利什曼病及应用价值的研究

本研究建立了一种用PVC薄膜作载体、将前鞭毛体可溶性抗原包被在PVC凹板上,采用HRP-SPA作第二抗体及无毒的TMB作底物的快速ELISA方法,该法简便、经济、实用。与经典ELISA平行对照检测24份骨髓穿刺证实的内脏利什曼病犬血清,结果:快速ELISA法阳性符合率为100％(24/24),而经典ELISA法为95.83％(23/24);对47份采自非流行区的正常犬血清,两法均仅有1例呈假阳性反应,占2.13％;用快速ELISA法检测实验感染了旋毛虫、肺吸虫、钩虫、弓形虫等犬血清共26份,均未见交叉反应。用该法又调查了四川汶川县黑热病重流行区的124份犬血清,同时进行骨髓涂片检查,结果快速ELISA查出阳性犬39只,占31.45％(39/124),骨髓涂片查见利什曼原虫者有24只,占19.35％(24/124),这24只犬血清对快速ELISA法均呈阳性反应。

旋毛虫肌幼虫排泄—分泌抗原诊断猪旋毛虫病的研究与应用

应用“ES”抗原和酶复合物对猪旋毛虫病进行了ELISA的诊断研究,其抗原是对Gamble(1984)的肌幼虫培养方法经过改进研制而成的.应用这种抗原和免疫制剂建立起来的酶联免疫吸附试验诊断方法,具有灵敏度高、特异性强、操作简便、容易判断等优点,改变了我国过去应用粗制虫体抗原诊断猪旋毛虫病的状况.通过对71头人工感染旋毛虫病猪血清的诊断,可获得100%的阳性检出率.对旋毛虫病流行区120万头猪的检测证明,患猪检出率达93—95%.对250头ELISA阳性猪与宰后检查对照,其诊断符合率为98%左右.

猪瘟免疫程序的研究

采用HRP—SPA—ELISA方法,在同一猪场相同的饲养条件下,对5种常用猪瘟免疫程序免疫后不同时间的猪瘟免疫抗体水平进行了研究.结果表明:超前免疫,1月龄1次免疫,2月龄1次免疫和1月龄、2月龄2次免疫猪均有良好的免疫应答,90日龄检测80倍稀释血清的ELISA OD值均在0.30以上(0.31～0.48),120～240日龄血清ELISA抗体一直保持在较高水乎(OD值0.42～0.66);而超前、2月龄2次免疫猪的免疫应答明显低于前4种免疫程序,120日龄时的ELISA OD值仅为0.25,此后上升也较缓慢,至240日龄时才达0.43.根据本研究结果,综合过去的报道,建议在“猪瘟控制地区”采用1月龄1次免疫或2月龄1次免疫,在“猪瘟未控制地区”采用1月龄1次免疫或超前免疫.