中药单体川楝素介导hsa-circ-0025583/hsa-miR-671-5p/SYNGR2轴调控乳腺癌生长的分子机制研究

目的 探究中药单体川楝素介导的hsa-circ-0025583/hsa-miR-671-5p/SYNGR2轴调控乳腺癌生长的分子机制。方法 选取南通第三人民医院乳腺外科于2020年4月—2022年4月收治的乳腺癌患者40例为研究对象,患者均在医院进行手术,取患者乳腺癌及癌旁组织作为实验材料,采用定量荧光聚合酶链反应(quantitative polymerase chain reaction, qPCR)对其hsa-circ-0025583及SYNGR2的表达水平进行测定;取乳腺癌细胞株T47D细胞,加入不同浓度的川楝素,比较不同浓度川楝素对细胞增殖的抑制率;对所选乳腺癌细胞株系进行预处理,A组不进行特殊处理,B组中加入0.5μmol/L的川楝素,C组对乳腺癌细胞进行转染,敲除hsa-miR-671-5p,并向其中加入0.5μmol/L的川楝素,比较其hsa-circ-0025583及SYNGR2的表达水平,上述实验重复3次。结果 与正常癌旁组织相比较,乳腺癌组织中提取的hsa-circ-0025583及SYNGR2 mRNA表达水平均降低,差异有统计学意义(P<0.05)。hsa-circ-0025583及SYNGR2 mRNA在乳腺癌组织中均低表达,具有正相关性(r=0.965,P<0.05)。随着川楝素浓度的升高,乳腺癌细胞增殖的抑制率逐渐升高,且与0μmol/L浓度组比较均具有统计学意义(P<0.05)。对数据进行处理,得出乳腺癌细胞在24 h及48 h的半数抑制浓度分别为0.78μmol/L、0.49μmol/L。与A、C组相比较,B组的hsa-circ-0025583及SYNGR2 mRNA的表达水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);但A、C组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与A、C组相比较,B组24 h及48 h侵袭细胞数量明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);但A、C组间侵袭细胞数量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 川楝素通过介导hsa-circ-0025583/hsa-miR-671-5p/SYNGR2轴调控hsa-circ-0025583及SYNGR2水平,进而影响乳腺癌细胞的增殖及侵袭能力,抑制乳腺癌细胞的生长。

hsa-circ-002179靶向miR-143-3p调控自噬-凋亡平衡在胃癌5-氟尿嘧啶化疗耐药性中的作用研究

目的探究hsa-circ-002179靶向miR-143-3p调控自噬-凋亡平衡对胃癌的5-氟尿嘧啶(5-Fu)化疗耐药性的影响。方法通过5-Fu处理AGS细胞构建5-Fu耐药细胞模型(AGS/5-Fu),采用CCK8法检测5-Fu对AGS和AGS/5-Fu细胞活性的影响,采用荧光定量PCR(qRT-PCR)检测细胞中hsa-circ-002179和miR-143-3p的表达;通过流式细胞术和Western blot分别检测细胞凋亡水平与自噬相关蛋白LC3、Beclin-1和p62的表达。同时,通过软件预测hsa-circ-002179与miR-143-3p的结合位点,并采用RIP和双荧光素酶实验验证其结合作用。结果与对照组比较,耐药组的细胞活性[(172.33±9.53)%比(106.00±6.16)%,P<0.01]和自噬水平升高、凋亡率(20.5%比43.8%,P<0.01)降低,hsa-circ-002179表达升高[(4.46±0.34)比(1.05±0.66),P<0.01];转染si-002179后,耐药细胞活性降低[(80.00±2.45)%比(102.67±7.13)%,P<0.05],而凋亡水平升高(31.3%比21.8%,P<0.05)。RIP和双荧光素酶报告实验证实hsa-circ-002179与miR-143-3p直接结合,且与对照组比较,耐药细胞中miR-143-3p的表达降低[(0.38±0.05)比(1.04±0.07),P<0.01]。并且,hsa-circ-002179能够调控miR-143-3p的水平。同时,miR-143-3p抑制剂处理能够升高转染si-002179后的耐药细胞自噬水平。自噬抑制剂处理降低了耐药细胞的自噬水平和细胞活性,升高凋亡水平;在此基础上转染OE-002179则升高自噬水平和细胞活性,降低凋亡水平,进一步转染miR-143-3p模拟物可以逆转以上变化。结论hsa-circ-002179靶向miR-143-3p可能可以调控自噬-凋亡平衡,进而影响胃癌细胞的5-Fu化疗耐药性。

环状RNA hsa-circ-0001360在同型半胱氨酸诱导人脐静脉内皮细胞凋亡中的作用

背景:同型半胱氨酸水平上升会诱导人脐静脉内皮细胞发生凋亡,但机制尚不清楚。目的:探讨hsa-circ-0001360在同型半胱氨酸诱导人脐静脉内皮细胞发生凋亡中的作用。方法:体外培养人脐静脉内皮细胞,将其分为对照组、同型半胱氨酸组、干扰对照组、干扰对照+同型半胱氨酸组、干扰hsa-circ-0001360组、干扰hsa-circ-0001360+同型半胱氨酸组、过表达对照组、过表达对照+同型半胱氨酸组、过表达hsa-circ-0001360组和过表达hsa-circ-0001360+同型半胱氨酸组,同型半胱氨酸的干预浓度均为100μmol/L。干预细胞72 h后,应用Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和Caspase-3的表达;流式细胞仪检测细胞的凋亡率;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测hsa-circ-0001360的表达水平。结果与结论:①与对照组相比,同型半胱氨酸组人脐静脉内皮细胞中Caspase-3和Bax的表达明显升高(P<0.01),Bcl-2的表达明显降低(P<0.01),细胞凋亡率明显增高(P<0.01);②与对照组相比,同型半胱氨酸组人脐静脉内皮细胞中hsa-circ-0001360的表达明显升高(P<0.01);③hsa-circ-0001360在人脐静脉内皮细胞的细胞质中表达显著高于细胞核(P<0.01);④与干扰对照组或干扰对照+同型半胱氨酸组相比,干扰hsa-circ-0001360组和干扰hsa-circ-0001360+同型半胱氨酸组人脐静脉内皮细胞中Caspase-3、Bax的表达明显降低(P<0.01),Bcl-2的表达明显升高(P<0.01),细胞凋亡率明显降低(P<0.01);⑤与过表达对照组或过表达对照+同型半胱氨酸组相比,过表达hsa-circ-0001360组和过表达hsa-circ-0001360+同型半胱氨酸组人脐静脉内皮细胞中Caspase-3、Bax的表达明显升高(P<0.01),Bcl-2的表达明显降低(P<0.01),细胞凋亡率明显升高(P<0.01);⑥以上结果表明,hsa-circ-0001360可以促进同型半胱氨酸诱导人脐静脉内皮细胞发生凋亡。

hsa-miR-204-5p对人脐静脉内皮细胞生物学行为的影响

目的:探究hsa-miR-204-5p对人血管内皮细胞活力、迁移、周期及凋亡等生物学行为的影响。方法:使用人脐静脉内皮细胞株EA.hy926构建过表达hsa-miR-204-5p(hsa-miR-204-5p mimics)模型。通过细胞划痕、Transwell、CCK-8、细胞周期和凋亡率等指标评估hsa-miR-204-5p对内皮细胞功能状态的影响。接着,使用RNA测序和RT-qPCR寻找并验证hsa-miR-204-5p的下游靶基因,将RNA测序中log2FC≤−0.5、P<0.05的基因和miRWalk数据库预测的hsa-miR-204-5p的下游靶基因取交集,并进行基因本体论(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析。结果:过表达hsa-miR-204-5p可以抑制EA.hy926细胞的活力和迁移能力,降低EA.hy926细胞的凋亡率,并使聚集在S期的细胞减少。富集分析结果发现hsa-miR-204-5p下游靶基因富集在MAPK信号通路,富集在此通路的基因为MAPT、PPP3R1、PRKACB、PTPRR、MAP2K4、CACNA2D2和RPS6KA6。RT-qPCR结果显示,过表达hsa-miR-204-5p后,MAPT和MAP2K4扩增结果较好且表达为下调。其中,MAPT下降趋势最明显。结论:hsamiR-204-5p可能通过抑制MAPT/MAPK信号通路而影响内皮细胞的活力、迁移和凋亡等生物学行为。

hsa-miR-181a-5p靶基因预测及生物信息学分析

目的对hsa-miR-181a-5p进行系统的生物信息学分析,预测hsa-miR-181a-5p的靶基因、基因功能及信号通路,并对其进行生物学功能注释。方法利用数据库对hsa-miR-181a-5p基因定位,分析其序列保守性和在人类组织器官中的表达情况;利用数据库进行靶基因预测分析;并将预测交集靶基因进行GO功能分析及KEGG通路富集分析和蛋白间相互作用(PPI)网络分析;最后利用A549细胞进行hsa-miR-181a-5p转染实验,进行转录组测序同步验证生物信息学预测结果。结果发现基因定位于人类基因组chr1、chr9染色体,成熟序列在物种间具有高度保守性。3个数据库交集靶基因有483个,包含PTEN、MAPK8、AKT3等基因,其分布在胞浆等细胞组分,执行蛋白质结合等生物功能,并参与信号转导等生物学过程。靶基因富集于MAPK、PI3K-Akt、胰岛素抵抗、癌症中的miRNA等信号通路,其编码的蛋白间形成复杂网络图。实验后转录组测序结果验证了生信分析的准确性,对预测及富集结果提供了有力支撑。结论hsa-miR-181a-5p在多种生物学过程发挥重要作用,尤其是在神经系统疾病、血液免疫系统疾病以及癌症的发生发展中其将成为相关疾病发生机制和防治研究的新靶点。

配合物{[Cu(pcba)_(2)]_(2)·(MeOH)_(2)}的合成、结构、HSA结合及细胞毒性

以对氯苯甲酸为配体,合成了铜配合物{[Cu(pcba)_(2)]_(2)·(MeOH)_(2)}(pcba=对氯苯甲酸,MeOH=甲醇),经元素分析、IR和X射线单晶衍射表征,该配合物属于三斜晶系,P1空间群,晶胞参数为a=6.59180(10),b=10.7690(2),c=12.4722(2),α=90.1980(10)°,β=104.076(2)°,γ=99.673(2)°,Z=1,D c=1.593 mg/m^(3),F(000)=408,最终结构残差因子R 1=0.0400,wR 2=0.1145。采用紫外和荧光光谱对配合物及其跟人血清蛋白(HSA)相互作用的方式进行研究,结果表明,配合物浓度越大,紫外及荧光强度越低。配合物对HSA的猝灭常数K sv=5.78×10^(3)L·mol^(-1),猝灭速率常数K q=5.78×1011 L·mol^(-1)·s^(-1),配合物对HSA的结合常数K a=1.38×10^(2)L·mol^(-1),结合位点数n=0.592。同时,本文研究了{[Cu(pcba)_(2)]_(2)·(MeOH)_(2)}对胃癌细胞A549、宫颈癌细胞Hela、肝癌细胞HepG2和人正常肝细胞LO2的抗增殖能力,发现其对三种癌细胞的增殖抑制效果跟顺铂相当,对人正常肝细胞LO2的毒性比顺铂小。

血清hsa-miR-34a-3p及hsa-miR-206表达对妊娠合并甲减患者子代心肌损害的预测研究

目的探讨血清hsa-miR-34a-3p及hsa-miR-206表达对妊娠合并甲状腺功能减退(简称甲减)患者子代心肌损害的预测价值。方法选取2019年8月至2021年8月宜宾市第二人民医院收治的妊娠合并甲减患者248例作为观察组,另选取同期健康体检孕妇236例为对照组,均采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测血清hsa-miR-34a-3p及hsa-miR-206表达情况并进行比较;随访至妊娠结束,观察并比较两组子代心肌损害发生情况;观察组根据子代是否发生心肌损害将妊娠合并甲减患者进一步分为发生组和未发生组,比较此两组血清hsa-miR-34a-3p、hsa-miR-206水平;采用多因素Logistic回归分析法分析妊娠合并甲减患者子代心肌损害的影响因素,受试者工作特征(ROC)曲线分析各血清指标单项及联合对妊娠合并甲减患者子代心肌损害的预测价值。结果观察组血清hsa-miR-34a-3p、hsa-miR-206水平高于对照组(P<0.05);随访至妊娠结束,观察组子代心肌损害的发生率为20.97%(52/248),对照组子代心肌损害的发生率为1.69%(4/236);发生组血清hsa-miR-34a-3p、hsa-miR-206水平高于未发生组(P<0.05);多因素Logistic回归分析显示血清hsa-miR-34a-3p、hsa-miR-206、促甲状腺激素(TSH)、游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺素(FT4)、总三碘甲状腺原氨酸(TT3)、总甲状腺素(TT4)均是影响妊娠合并甲减患者子代心肌损害的影响因素(P<0.05);ROC曲线分析显示,hsa-miR-34a-3p、hsa-miR-206联合预测妊娠合并甲减患者子代心肌损害的灵敏度均高于单独预测(P<0.05),曲线下面积(AUC)也高于单独预测(P<0.05),特异度与单独预测比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论妊娠合并甲减患者血清hsa-miR-34a-3p、hsa-miR-206水平异常升高,此可能会增加子代心肌损害发生风险,且二者对妊娠合并甲减患者子代心肌损害具有一定的预测价值。

hsa-miR-340-5p靶基因预测及生物信息学分析

目的 通过对hsa-miR-340-5p的靶基因进行预测和生物信息学分析,探讨其靶基因所发挥的生物学功能及参与的信号传导通路。方法 应用RNAcentral和miRBase数据库在线对比分析miR-340-5p序列在不同物种之间的保守性。运用在线数据库DIANA-microT、Target Scan、miRWalk和miRDB分别预测hsa-miR-340-5p的靶基因,随后使用Venny2.1绘制韦恩图得到交集靶基因的集合,并对其交集靶基因的集合进行基因本体论(GO)功能注释分析、京都基因与基因组百科全书信号通路(KEGG Pathway)富集分析、蛋白互作(PPI)网络构建及关键(hub)基因筛选。结果 通过对比序列分析发现,miR-340-5p的成熟碱基序列在8个不同的物种中高度保守。采用4个miRNA靶基因在线数据库预测后,发现与hsa-miR-340-5p存在结合位点的交集靶基因集合共有92个,占其预测靶基因总和的1.9%。GO功能注释分析发现,hsa-miR-340-5p交集靶基因集合主要富集在核质、黏着斑、细胞间连接等细胞组分,同时,还参与了RNA聚合酶Ⅱ启动子转录的正调控、RNA聚合酶Ⅱ启动子的转录和蛋白质结合等多种生物学过程和分子功能。KEGG Pathway富集分析发现,hsa-miR-340-5p所结合的交集靶基因集合主要富集在癌症中的蛋白多糖、癌症通路、人类嗜T细胞病毒Ⅰ型(HTLV-I)感染等7个信号通路中。基于hsa-miR-340-5p交集靶基因集合的PPI网络构建,筛选出了度(degree)值前10位的hub基因,分别是:母体抗生物皮肤生长因子同源物(SMAD)2、无翅型MMTV整合位点家族成员(WNT)3、激活素A的1C型受体(ACVR1C)、F-框蛋白(FBXO)30、重组人缺陷于清选蛋白neddylation蛋白1域含1(DCUN1D1)、PH结构域相互作用蛋白(PHIP)、CUB和Sushi多结构域(CSMD)3、分拣连接蛋白(SNX)9、人免疫缺陷病毒Ⅰ增强子结合蛋白(HIVEP)2、RWD结构域蛋白(RWDD)2A。结论 hsa-miR-340-5p调控的靶基因参与了癌症、炎症等疾病的多种生物学过程。

Hsa-miR-148a-3p通过下调DUSP1基因促进乳腺癌细胞的恶性行为

目的通过生信分析结合体内外实验验证Hsa-miR-148a-3p调控双特异性磷酸酶1(DUSP1)对乳腺癌细胞生物学行为的影响。方法TCGA数据库下载数据并鉴定差异微小RNA(miRNA)和信使RNA(mRNA);数据库筛选差异miRNA靶基因;String和Cytoscape构建蛋白质互作网络及筛选TOP10 hub基因;TCGA数据库验证TOP10hub基因的表达;Cytoscape构建miRNA-TOP10hub基因网络。定量逆转录PCR(RT-qPCR)实验检测Hsa-miR-148a-3p和DUSP1在人乳腺癌组织和细胞中的表达。采用Hsa-miR-148a-3p mimic、Hsa-miR-148a-3p inhibitor及对照NC转染MCF-7细胞。分为NC组,NC mimics组,HsamiR-148a-3p mimics组,NC inhibitor组,Hsa-miR-148a-3p inhibitor组;荧光素酶报告基因实验验证Hsa-miR-148a-3p和DUSP1的结合;CCK-8,划痕实验,Transwell和细胞凋亡实验验证Hsa-miR-148a-3p对乳腺癌细胞增殖,迁移,侵袭和凋亡的影响。建立裸鼠成瘤模型,测量小鼠肿瘤质量和体积;Kaplan-Meier生存曲线分析小鼠生存情况;免疫组化检测DUSP1的表达水平。结果获得乳腺癌差异miRNA 54个(8个下调,46个上调),差异mRNA799个(509个下调,290个上调);54个差异miRNA预测靶基因3716个,与差异mRNA取交集,得到150个交集基因;蛋白-蛋白互作网络图中的TOP10hub基因为MET,LPAR1,LAMC1,FOS,EGFR,PIK3R1,DUSP1,GNAI1,LAMA4,NR3C1,这些基因在乳腺癌组织中均显著下调;双荧光素酶报告基因实验证实Hsa-miR-148a-3p能与DUSP1结合;RT-qPCR结果表明,Hsa-miR-148a-3p在乳腺癌组织和细胞中显著上调(P<0.01),而DUSP1则显著下调(P<0.01)。细胞实验结果表明,Hsa-miR-148a-3p促进乳腺癌细胞增殖,迁移和侵袭,抑制细胞的凋亡(P<0.01)。动物实验结果表明,Hsa-miR-148a-3p促进小鼠体内肿瘤质量和体积的增长(P<0.01),缩短小鼠的存活时间(P<0.01),免疫组化结果显示,Hsa-miR-148a-3p抑制DUSP1的表达水平(P<0.01)。结论Hsa-miR-148a-3p通过抑制DUSP1的表达而作为癌基因发挥作用,这有助于开发针对乳腺癌的新型治疗靶点。

微小RNA hsa-miR-93靶向STAT3提高鼻咽癌对放疗敏感性的机制研究

目的研究hsa-miR-93在鼻咽癌放疗抗拒过程中的作用及分子机制。方法以人鼻咽癌细胞株CNE-1、CNE-2、CNE-2R、HONE1、C666.1以及鼻咽上皮永生细胞NP460为研究对象,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测各组细胞经放疗后hsa-miR-93的表达;采用Western blot法检测各组细胞经放疗后STAT3蛋白的表达;通过miRWalk软件和RNAHybrid软件预测hsa-miR-93和STAT3的结合作用及结合位点;通过双荧光素酶报告基因法检测hsa-miR-93对STAT3靶向结合情况;瞬时转染小分子模拟物或抑制剂调控hsa-miR-93的表达后,采用qRT-PCR和Western blot法检测STAT3的表达;转染siSTAT3沉默STAT3的表达后,通过细胞集落形成实验检测鼻咽癌细胞经放疗后的集落形成能力。结果与CNE-1、CNE-2细胞(相对放疗敏感)相比,hsa-miR-93在HONE1、CNE-2R细胞(相对放疗抗拒)中表达降低(P<0.001),且各组鼻咽癌细胞经放疗后hsa-miR-93的表达呈剂量及时间依赖性降低(P<0.05);与CNE-1、CNE-2细胞相比,STAT3在HONE1、CNE-2R细胞中表达升高,且各组鼻咽癌细胞经放疗后表达呈剂量及时间依赖性升高;经预测,hsa-miR-93可直接靶向结合STAT3。过表达hsa-miR-93可以在mRNA以及蛋白水平上显著抑制STAT3的表达(P<0.05),而抑制hsa-miR-93的表达可以显著上调STAT3的表达(P<0.05);过表达hsa-miR-93或沉默STAT3均使鼻咽癌细胞的集落形成显著减少(P<0.001);抑制hsa-miR-93减弱了鼻咽癌对放疗的敏感性,而同时抑制hsa-miR-93和STAT3后,可提高鼻咽癌对放疗的敏感性。结论hsa-miR-93可能通过靶向STAT3提高鼻咽癌对放疗的敏感性。

hsa-let-7a-5p调控牙周膜干细胞增殖及凋亡

目的探讨hsa-let-7a-5p对牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cells,PDLSCs)增殖及凋亡的影响。方法将let-7a-5p mimics、mimics nc、let-7a-5p inhibitor、inhibitor nc转染进入PDLSCs,通过RT-qPCR测定转染效率,通过CCK-8、细胞周期、EdU实验检测let-7a-5p对PDLSCs增殖的影响,通过细胞凋亡实验检测PDLSCs的凋亡率。结果let-7a-5p成功转染进入PDLSCs。let-7a-5p mimics可抑制PDLSCs增殖能力(P<0.05),促进PDLSCs凋亡(P<0.01)。let-7a-5p inhibitor可促进PDLSCs增殖能力(P<0.05),抑制PDLSCs凋亡(P<0.01)。结论hsa-let-7a-5p可抑制PDLSCs增殖,促进PDLSCs凋亡。

hsa-miR-423-5p激活IL1R1基因在冠心病中的作用机制

目的:通过人群表达水平及转录组测序分析hsa-miR-423-5p靶向目标基因在冠心病(CHD)中的作用机制。方法:选取广西医科大学第一附属医院收治的151例CHD患者(CHD组),同期选择健康体检者作为健康对照组。通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测外周血白细胞中hsa-miR-423-5p表达水平,通过Spearman相关分析对hsa-miR-423-5p与各临床指标的相关关系进行分析。在EA.hy 926细胞中过表达hsa-miR-423-5p后进行hsa-miR-423-5p的亚细胞定位实验及转录组测序。针对测序结果预测hsa-miR-423-5p的潜在靶基因,对其进行RT-qPCR实验验证并分析目标基因与hsa-miR-423-5p表达水平及各临床指标之间的相关关系。结果:CHD组外周血白细胞中hsa-miR-423-5p的表达水平显著低于健康对照组(P<0.05)。hsamiR-423-5p的表达量与总胆固醇(TC)呈负相关关系,与高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)呈正相关关系(P<0.05)。在EA.hy926细胞中过表达hsa-miR-423-5p,亚细胞定位实验显示hsa-miR-423-5p主要存在于细胞核内。转录组测序结果经过分析验证后,发现过表达hsa-miR-423-5p后可上调IL1R1表达。CHD组中IL1R1的表达水平低于健康对照组(P<0.01),IL1R1表达水平与hsa-miR-423-5p表达水平、HDL-C均呈正相关关系(P<0.01)。结论:hsa-miR-423-5p及IL1R1在CHD患者中呈低表达且与TC和HDL-C相关;hsa-miR-423-5p在内皮细胞上调IL1R1的表达进而影响血脂水平,提示hsa-miR-423-5p可能通过调控IL1R1基因影响脂质代谢及内皮细胞功能从而参与CHD的进展。

过表达Hsa-miR-133a-2对宫颈癌细胞增殖与侵袭的影响

目的 探究hsa-mir-133a-2对宫颈癌细胞表型的影响及其在宫颈癌细胞增殖与侵袭中的潜在分子机制。方法 通过癌症基因组图谱-宫颈鳞癌和腺癌(The Cancer Genome Atlas-Cervical squamous cell carcinoma and endocervical adenocarcinoma, TCGA-CESC)验证宫颈癌组织和癌旁组织中hsa-mir-133a-2的表达情况;对TCGA-CESC中提取的307例高表达和低表达hsa-mir-133a-2的宫颈癌患者的临床信息进行K-M生存分析以评估其预后价值;采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)技术对正常宫颈细胞和宫颈癌细胞中hsa-mir-133a-2的表达进一步检测;采用细胞计数试剂盒-8(CKK8)和transwell法检测hsa-mir-133a-2对宫颈癌细胞增殖和侵袭的影响。结果 与宫颈癌癌旁组织细胞和正常宫颈细胞相比,hsa-mir-133a-2在宫颈癌细胞中表达水平均显著下调(P<0.05);K-M生存分析结果表明,高表达hsa-mir-133a-2的宫颈癌患者具有相对较长的总生存期(P<0.05);hsa-mir-133a-2模拟处理导致宫颈癌细胞的活力和侵袭能力降低,而hsa-mir-133a-2抑制剂处理的宫颈癌细胞的活力和侵袭能力均显著提高。结论 hsa-mir-133a-2可以抑制宫颈癌细胞的增殖与侵袭,为宫颈癌的临床治疗提供新的策略。

颈动脉血流动力学、hsa-microRNA-139-5p与2型糖尿病大血管病变的相关性研究

目的 探究剪切应力相关的颈动脉多普勒超声参数在2型糖尿病(T2DM)大血管病变早期诊断中的临床价值,并通过对剪切应力敏感性微小RNAs(miRs) hsa-miR-139-5p的研究在基因水平进行相关机制的进一步探究。方法 选择2022年1—12月在本院内分泌科就诊的T2DM患者200例作为研究对象,将T2DM合并大血管病变患者100例设为T2DM大血管病变组(观察组),将单纯T2DM患者100例设为单纯T2DM组(对照组)。比较两组研究对象颈总动脉(CCA)收缩期最大流速(PSV)、CCA舒张末期容积(EDV)和CCA血管阻力指数(RI)等超声参数,研究对象工作特征(ROC)分析各参数对T2DM大血管病变的诊断价值。预测T2DM大血管病变相关的剪切应力敏感性miRs,选择目标miR。qRT-PCR测定两组研究对象外周血单个核细胞hsa-miR-139-5p表达水平,免疫印迹蛋白试验(WB)测定其下游靶基因VEGF和IGFIR蛋白表达,并进行统计学分析。结果 T2DM大血管病变组CCA-PSV、CCA-EDV明显低于单纯T2DM组(P<0.001),T2DM大血管病变组CCA-RI明显高于单纯T2DM组(P<0.001)。CCA-PSV和CCA-EDV是T2DM大血管病变的独立危险因素,对于T2DM大血管病变的诊断价值较高。T2DM大血管病变组单个核细胞hsa-miR-139-5p表达高于单纯T2DM组(P<0.001)。T2DM大血管病变组VEGF的表达高于单纯T2DM组(P<0.05),单纯T2DM组IGFIR表达高于T2DM大血管病变组(P<0.05)。结论 hsa-miR-139-5p通过调节下游靶基因VEGF和IGFIR的表达参与T2DM大血管病变的发生发展,而CCA-PSV和CCA-EDV作为间接反映血管壁剪切应力的血流动力学参数或可作为T2DM大血管病变早期诊断的临床影像学参考指标。

hsa-miR-767通过调控IGF1基因对乳腺癌细胞生物学行为的影响

目的:探讨hsa-miR-767调控IGF1对人乳腺癌细胞生物学行为的影响。方法:利用生信数据分析乳腺癌的差异基因,并构建miRNA-mRNA网络,筛选hsa-miR-767/IGF1信号轴进行验证。建立hsa-miR-767过表达和敲除MCF7细胞株,RT-qPCR验证hsa-miR-767的表达,双荧光素酶报告基因实验检测hsa-miR-767和IGF1的结合,CCK-8实验、划痕实验、Transwell实验和流式细胞术检测乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡能力。结果:识别出26个差异miRNA(DEMs)和1108个差异基因(DEGs)。预测获得靶基因254个,靶基因与测序DEGs取交集得到73个mRNA。鉴定出10个hub基因(IGF1、NTRK2、CEBPA、FOS、KLF4、GABRA1、NRG1、LPL、GABBR2、ANGPT1),其中IGF1所连接的基因较多,说明其在乳腺癌中较为重要。miRNA-mRNA网络图中发现hsa-miR-767/IGF1轴可能在乳腺癌中起关键作用。细胞实验证实hsa-miR-767表达水平在乳腺癌中上调(P<0.05),其能靶向结合IGF1;hsa-miR-767还可促进乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭,抑制细胞的凋亡(P<0.05)。结论:hsa-miR-767可促进乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭,抑制细胞凋亡,且可与IGF1结合。

血浆hsa-let-7d-3p在阿尔茨海默病中的诊断价值及功能

目的探索hsa-let-7d-3p在阿尔茨海默病(AD)中的诊断价值和功能。方法收集2018年4月至2022年3月于徐州市第一人民医院就诊的80例AD患者作为AD组,同期招募60名健康者作为健康对照组。筛选GSE46579和GSE120584数据集中AD患者血浆中显著变化的微RNA(miRNA),采集两个数据集中上调及下调的miRNA进行生物标志物的筛选。通过实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测所筛选的差异miRNA的表达水平。应用受试者工作特征曲线(ROC曲线)、简易智力状态检查量表(MMSE)和蒙特利尔认知评估基础量表(MoCA_B)评分评价hsa-let-7d-3p对AD的诊断价值。此外,建立Aβ25~35损伤SH-SY5Y的细胞模型,采用RT-qPCR检测hsa-let-7d-3p水平。通过转染使细胞表达hsa-let-7d-3p,使用四唑盐法验证其是否影响Aβ25~35对细胞活力的作用。结果AD组MMSE评分、MoCA_B评分低于健康对照组(P<0.01)。在GSE120584与GSE46579中均上调的miRNA为hsa-miR-5001-3p、hsa-let-7d-3p、hsa-miR-589-5p、hsa-miR-4435、hsa-miR-3605-3p,均下调的miRNA为hsa-miR-548h-5p、hsa-miR-29c-3p。AD组血浆hsa-miR-5001-3p、hsa-let-7d-3p、hsa-miR-589-5p水平明显高于健康对照组(1.43±0.37比1.00±0.32,1.60±0.35比1.00±0.30,1.34±0.38比1.00±0.26)(P<0.01),血浆hsa-miR-29c-3p水平明显低于健康对照组(0.58±0.35比1.00±0.29)(P<0.01),两组hsa-miR-4435、hsa-miR-3605-3p、hsa-miR-548h-5p比较差异无统计学意义(P>0.05)。在AD患者血浆中变化最为显著的上调miRNA为hsa-let-7d-3p,hsa-let-7d-3p的ROC曲线下面积为0.910;AD患者血浆hsa-let-7d-3p与MMSE评分呈负相关(r=-0.536,P<0.01),与MoCA_B评分呈负相关(r=-0.617,P<0.01)。与控制组相比,Aβ25~35处理可显著降低SH-SY5Y细胞的活力(P<0.01);与Aβ+mimics NC组相比,Aβ+mimics组SH-SY5Y细胞活力下降(P<0.01),与Aβ+inhibitor NC组相比,Aβ+inhibitor组SH-SY5Y细胞活力升高(P<0.01)。结论AD患者和AD细胞模型中的hsa-let-7d-3p表达均上调,hsa-let-7d-3p在AD中参与病理作用机制,并可作为AD诊断的生物标志物。

MS相关的hsa-miR-17-5p靶基因预测和关键基因筛选

目的对人类miR-17-5p(hsa-miR-17-5p)靶基因预测和富集分析,并结合基因的差异表达寻找多发性硬化症的生物学标志物。方法利用生物信息学方法,预测hsa-miR-17-5p靶基因,对预测结果进行基因本体数据库(Gene Ontology,GO)、京都基因和基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genome,KEGG)富集分析,并构建蛋白质互作网络图(Protein-Protein Interaction Networks,PPI)。再结合多发性硬化症患者和健康对照组的差异表达基因,进一步筛选出hsa-miR-17-5p对多发性硬化症影响的关键基因。最后,利用RNA22 v2验证关键基因是否存在结合位点。结果不同网站预测后,取交集获取376个公共靶基因,这些靶基因有复杂的相互作用,主要存在于胞浆与核质,参与多种转录调控和蛋白质磷酸化等生物学过程,同时也与癌症、病毒感染和免疫系统等信号通路相关;靶基因和多发性硬化症患者的相对下调基因有三个共同基因PDLIM5、KCNB1、BTBD7。进一步验证上述关键基因结合位点,发现仅有PDLIM5存在P值小于0.05的结合位点。结论hsa-miR-17-5p靶基因参与多种生物学过程,而且PDLIM5、KCNB1、BTBD7基因很可能是hsa-miR-17-5p对多发性硬化症产生影响的重要桥梁,其中PDLIM5尤为重要。

hsa-miR-877-3p通过靶向MCM10调控卵巢癌细胞迁移和活性氧产生

目的探讨has-miR-877-3p调控卵巢癌细胞迁移和活性氧(ROS)产生的作用机制。方法运用生物信息学分析hsa-miR-877-3p在卵巢癌组织中表达,RT-qPCR检测卵巢癌细胞株中hsa-miR-877-3p表达。构建hsa-miR-877-3p过表达及抑制SKOV3细胞,RNA干扰技术敲低SKOV3细胞中MCM10基因,划痕实验及流式细胞术分别检测细胞迁移、ROS水平。结果hsa-miR-877-3p在卵巢癌中表达低于正常组织(P<0.01),其在卵巢癌细胞株SKOV3、A2780、A1847和8910中表达也降低(P<0.01)。hsa-miR-877-3p过表达抑制SKOV3细胞迁移、增加ROS水平(P<0.01),而抑制hsa-miR-877-3p表达增加SKOV3细胞迁移(P<0.01)。MCM10基因沉默抑制SKOV3细胞迁移、促进ROS表达(P<0.01)。结论hsa-miR-877-3p可以通过调控MCM10基因抑制SKOV3细胞迁移并提高其活性氧水平。

胃癌耐药相关hsa-miR-194-5p的靶基因预测及生物信息学分析

目的:研究胃癌耐药相关hsa-miR-194-5p的靶基因,并分析其参与的生物学过程和信号转导通路,为胃癌耐药机制的表观遗传学研究提供前期基础.方法:通过NCBI数据库检索hsa-miR-194-5p的基本信息;使用预测数据库预测hsa-miR-194-5p的靶基因;使用DAVID数据库对靶基因集合进行功能富集分析(GO)和信号转导通路富集分析(KEGG).结果:成熟的miR-194-5p序列多个物种之间具有高度保守性.预测靶基因共325个,参与的生物学过程主要有Golgi组织和细胞对DNA损伤刺激的反应(P<0.01),分子功能包括泛素蛋白连接酶结合和泛素介导的蛋白水解(P<0.01),细胞组分富集在细胞核和细胞表面,调控包括TGF-β和WNT等多条信号转导通路(P<0.01).结论:miR-194-5p的靶基因SMURF1、RAC1、MAPK1与胃癌细胞的增殖密切相关.

外泌体hsa-miR-522-3p通过调节CDK6参与卵巢癌进程

目的:探讨外泌体hsa-miR-522-3p在卵巢癌发生发展中的作用及其潜在机制。方法:采用荧光实时定量PCR检测hsa-miR-522-3p在组织和细胞中的表达水平。使用EdU、Transwell和流式细胞术检测外泌体hsa-miR-522-3p对卵巢癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响。通过荧光素酶测定和蛋白质印迹评估hsa-miR-522-3p对CDK6表达的调控作用。进一步构建裸鼠成瘤模型验证外泌体hsa-miR-522-3p对肿瘤生长的影响。结果:本研究发现hsa-miR-522-3p在卵巢癌组织、血浆外泌体及卵巢癌细胞的外泌体中表达显著升高。与NC组比较,hsa-miR-522-3p模拟物组细胞的迁移和侵袭能力显著增高且差异具有统计学意义(P<0.05)。此外,hsa-miR-522-3p抑制剂组可以促进caspase3和Bax的表达并抑制Bcl2的表达。荧光素酶报告结果显示,hsa-miR-522-3p能够靶向结合CDK6的3′-非翻译区(3′-UTR)来抑制其表达。裸鼠成瘤结果表明,外泌体hsa-miR-522-3p可增加瘤的体积及重量。结论:外泌体hsa-miR-522-3p通过调节CDK6参与卵巢癌的进程。本研究的发现将为外泌体hsa-miR-522-3p在卵巢癌发生中的机制提供新的见解。