硼替佐米对人类多发性骨髓瘤细胞系U266细胞抗凋亡蛋白HSP-90的影响

目的 探讨硼替佐米对人类多发性骨髓瘤（MM）细胞系U266细胞抗凋亡蛋白HSP-90的影响.方法 采用RT-PCR技术研究经不同浓度的硼替佐米作用于U266细胞4 h后其内HSP-90mRNA表达情况的变化.结果 随着硼替佐米浓度的增加,其MM细胞中HSP-90α的mRNA表达量逐渐增加.由低浓度组到高浓度组（0、50、100、150、200 nmol/L）所对应的HSP-90α的灰度值分别为0.343±0.017、0.505±0.039、0.640±0.029、0.760±0.059、0.963±0.054;两两组间比较差异有统计学意义（P〈0.05）.浓度由低到高组对应HSP-90β的灰度值分别为0.610±0.022、0.765±0.050、0.645±0.052、0.770±0.059、0.790±0.027,而HSP-90β的灰度值0 nmol/L组与50、150、200nmol/L组之间差异有统计学意义（P〈0.05）.50、100 nmol/L浓度组对应的HSP-90β的灰度值不同（P〈0.05）.100 nmol/L组与150、200 nmol/L组对应的HSP-90β的灰度值差异有统计学意义（P〈0.05）.HSP-90β的mRNA表达量增加趋势不很明显,但总体差异仍具统计学意义（P〈0.05）.结论 硼替佐米可以上调HSP-90的分子水平的表达,并且以上调HSp-90α的表达为主.

丁香酚慢性麻醉对红鲫血液生理及肝脏hsp70和hsp90mRNA表达量的影响

为研究丁香酚慢性麻醉对红鲫(Carassius auratus)血液生理及肝脏中应激基因hsp70和hsp90mRNA相对表达量的影响,试验设置丁香酚处理组和对照组,用15 mg/L丁香酚处理平均体质量(61.9±3.66)g红鲫12 h。试验结果表明,经12 h麻醉后,试验组红鲫除游动变缓外,其它行为表现正常,未出现死亡现象;麻醉组红鲫血液中皮质醇含量、乳酸脱氢酶活力显著下降,而血糖和K^(+)、Na^(+)浓度却显著上升。基因定量结果显示,麻醉组红鲫肝脏中hsp70和hsp90mRNA相对表达量显著高于对照组。综上所述,15 mg/L丁香酚处理12 h内对红鲫未造成明显损伤,可用于其保活运输。

肉鸡组织脏器的急性热应激损伤及HSP_(90)的表达

将 30日龄AA肉鸡在 ( 4 0± 1)℃高温中分别持续 2、 3、 5和 10h ,定期剖杀 ,进行临床血液病理学、组织病理学和免疫组织化学检测。结果表明 :在热应激 2～ 5h内 ,受试鸡外周血液中肌酸激酶活性持续升高 (P <0 0 1) ;当热应激持续到 10h时其活性出现降低 ,但仍明显高于对照组 (P <0 0 1)。受试鸡的组织脏器在应激前期损伤较严重 ,热应激 2～ 5h内 ,各主要脏器组织如心肌纤维、肝细胞、肾小管上皮细胞出现颗粒变性和脂肪变性 ,甚至坏死 ;而后期组织细胞的损伤则无明显坏死。提示在热应激持续一定时间后 ,机体可通过自身调节逐渐获得对高热的耐受能力。免疫组化结果显示 ,HSP90 广泛分布在热应激受试鸡脏器组织细胞的胞浆和胞核中 ,尤其在组织的小动脉、毛细血管内皮细胞内呈现强表达。提示血管壁中HSP90 可能通过血管的舒缩而影响组织器官的血液供应。

热休克蛋白27,60和90在胃癌中表达及其临床价值

目的:探讨HSP-27、-60和-90在胃癌中的表达及其临床意义。方法:采用免疫组织化学检测66例胃癌组织中HSP-27、-60和-90的表达情况,并结合临床病理特征、肿瘤增殖能力和患者生存期分析三种热休克蛋白表达的临床意义。结果:HSP-27、-60和-90在胃癌组织中异常高表达。HSP-27表达与肿瘤大小(p T,P=0.026)、器官转移(p M,P=0.046)及病理分期(P=0.041)相关,而HSP-27染色强度与淋巴腺状态明显相关(p N,P=0.042)。HSP-60表达与患者性别相关(P=0.011),而HSP-60染色强度与患者年龄(P=0.027)和肿瘤病理组织学分级(P=0.031)相关。HSP-90表达与本研究分析的临床病理参数无相关性;但是,HSP-90染色强度与肿瘤大小存在着显著关系(p T,P=0.020)。单因素分析表明HSP-90高表达与生存期更长显著相关(P=0.033),多因素分析证实HSP-90高表达是胃癌独立预后因素(P=0.026)。结论:HSP-27、-60和-90与某些临床病理参数有关,这些参数对于胃腺癌患者的治疗至关重要。胃腺癌患者HSP-90高表达是独立预后指标。

毒害艾美耳球虫感染对雏鸡肠道组织热休克蛋白-90 mRNA表达的影响

将90只海蓝褐雏鸡随机分为对照组、毒害艾美耳球虫（E.necatrix）一次感染组和毒害艾美耳球虫两次感染组,应用二重PCR方法,通过对肠道组织热休克蛋白-90（HSP-90）mRNA表达的检测,较全面系统地研究了毒害艾美耳球虫感染对雏鸡肠道组织HSP-90 mRNA表达的影响。结果发现,14日龄雏鸡经口第一次感染毒害艾美耳球虫后0~14d,其肠道组织HSP-90mRNA表达虽然不同程度的低于对照雏鸡,但总体呈上升趋势;上述雏鸡于28日龄时再次攻击性感染毒害艾美耳球虫,其十二指肠、空肠和回肠HSP-90 mRNA表达均呈先下降后上升,而盲肠HSP-90 mRNA表达始终呈下降趋势。28日龄雏鸡一次性大剂量感染毒害艾美耳球虫后,其十二指肠、空肠、盲肠HSP-90 mRNA表达均下降,而回肠HSP-90 mRNA表达先下降后上升。结果表明毒害艾美耳球虫感染雏鸡初期,肠道组织HSP-90 mRNA表达受到一定抑制,其表达量与肠道组织细胞损伤程度密切相关。

热休克蛋白90联合甲胎蛋白在肝细胞癌早期诊断中的价值

背景肝细胞癌是全球第六大常见癌症,早期诊断主要依靠血清学检查,随着热休克蛋白90(heat shock protein 90,HSP90)对于肝细胞癌分子研究的深入,本研究创新性采用HSP90联合甲胎蛋白(alpha fetoprotein,AFP)的方法,探究联合诊断对于肝细胞癌的诊断价值.目的评估HSP90联合甲胎蛋白AFP在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的诊断价值.方法选取2017-08/2020-07原发性肝癌、病毒性肝炎后肝硬化(乙型、丙型)、健康体检者共383位,采用电化学法检测AFP血清浓度,ELLISA法检测HSP90血清浓度,并使用统计学软件对结果进行处理及分析.结果单独分析AFP及HSP90对HCC的诊断价值,敏感度HSP90>AFP,特异度AFP>HSP90,AFP联合HSP90的灵敏度和特异度达到87.8%和91.2%.结论AFP联合HSP90建立新型HCC诊断模型能显著提高HCC诊断价值.

HSP90表达与牛精子抗冻性研究进展

热应激蛋白(HSPs)是生物体抵抗温度升高、氧化刺激和缺氧等环境变化时广泛合成的一组蛋白。论文简述了冷冻-解冻后精子蛋白质含量变化的研究进展以及热应激蛋白HSP90表达量对牛冷冻精液质量影响的机理,为提高牛精液冷冻品质提供理论参考。

反义HSP90诱导HeLa细胞凋亡的研究

目的 探讨反义ＨＳＰ９０降低ＨｅＬａ细胞恶性度的机制。方法 经荧光染色观察细胞形态，ＤＮＡ Ｌａｄｄｅｒ及流式细胞仪检测凋亡细胞。结果 转染有反义ＨＳＰ９０的ＨｅＬａ细胞经荧光染色细胞呈不均一亮蓝色，荧光染色观察可见细胞变小，染色质浓缩并产生凋亡小体，ＤＮＡ Ｌａｄｄｅｒ可见明显的梯形条带，流式细胞仪检测有凋亡的细胞。结论 反义ＨＳＰ９０可诱导细胞凋亡。

急性冷应激对阿勒泰羊HSP60、HSP70和HSP90基因mRNA表达的影响

为研究急性冷应激通过影响热休克蛋白含量的变化对阿勒泰羊抗寒性能、生产性能及抗病性能等的影响,试验设置常温组(15℃±2℃)与冷应激组(-25℃±2℃),每组各5只羊,屠宰后分别采集急性冷应激组(冷应激24 h后)和常温组的心脏、肝脏、脾脏和肾脏组织。采用实时荧光定量PCR技术对HSP60、HSP70和HSP90 mRNA含量变化进行检测,并对HSP 60、HSP 70和HSP 90基因进行同源性分析。结果显示,HSP 70和HSP 90基因与已有绵羊序列同源性高于99%,而HSP 60基因与已有波斯金牛序列同源性高于99%;冷刺激后HSP 60基因在心脏、肝脏、脾脏和肾脏组织中的表达较常温组均升高,且在肾脏中的表达量差异极显著(P<0.01);冷刺激后HSP 70基因在心脏、肝脏、脾脏和肾脏组织中的表达较常温组均升高,且在肝脏和肾脏组织中的表达量差异极显著(P<0.01);冷刺激后HSP 90基因在心脏、肝脏、脾脏和肾脏组织中的表达较常温组均升高,且在肝脏组织中表达量差异显著(P<0.05),而在脾脏和肾脏组织中的表达量差异极显著(P<0.01)。表明急性冷应激极大程度地刺激了机体的产热机能,通过通路中的产热相关基因的相互调节使其能量代谢发生改变,从而提高细胞生存率,增强机体对环境胁迫的耐受力,能更好地适应环境温度的变化。试验结果为进一步深入研究急性冷应激对阿勒泰羊机体的影响提供一定理论依据。

二苯乙烯苷对APP/PS1/Tau三转基因小鼠痴呆模型CK1、HSP90、 PP5的影响

目的观察二苯乙烯苷(TSG)对淀粉样前体蛋白/早老蛋白-1/tau蛋白(APP/PS1/Tau)三转基因小鼠痴呆模型脑组织中酪蛋白激酶(CK)1、磷酸丝氨酰/磷酸苏氨酰蛋白磷酸酶(PP)5、热休克蛋白(HSP)90的表达影响。方法8月龄APP/PS1/Tau三转基因小鼠45只,随机分为模型组、阳性药对照组(石杉碱甲0.15 mg/kg)、TSG低、中、高剂量组(TSG 0.033、0.100、0.300 g/kg),另取同龄C5B7L/6J小鼠9只为正常对照组。各组灌胃60 d相应药物后,采用Morris水迷宫观察各组小鼠空间认知能力;逆转录-聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测CK1、PP5和HSP90 mRNA表达情况;Western印迹法检测CK1、PP5和HSP90蛋白表达情况。结果与模型组相比,TSG能够提高小鼠空间认知能力;降低CK1、HSP90及提高PP5的mRNA表达水平(P<0.05,P<0.01);降低CK1和HSP90和提高PP5的蛋白表达水平(P<0.05,P<0.01)。结论TSG治疗阿尔茨海默病的机制可能与降低CK1和HSP90的表达水平与蛋白表达水平,提高PP5的表达水平与蛋白表达水平等机制有关。

BIIB021对MDS细胞株Skm-1增殖的多靶点抑制作用研究

目的探讨热休克蛋白90(HSP-90)抑制剂BIIB021对骨髓增生异常综合征(MDS)细胞株Skm-1增殖的多靶点抑制作用。方法分别将0、100、200、400nmol/L BIIB021作用于4组Skm-1细胞(对照组、100 nmol/L组、200 nmol/L组、400 nmol/L组),培养24h后采用Western blot法检测各组细胞雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、mTOR复合物1(mTORC1)、低氧诱导因子-1α(HIF-1α)蛋白表达水平。结果各组Skm-1细胞mTOR蛋白表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。各组Skm-1细胞mTORC1、HIF-1α蛋白表达水平比较差异均有统计学意义(均P<0.05);组间两两比较差异亦均有统计学意义(均P<0.05),即100nmol/L组、200 nmol/L组、400 nmol/L组Skm-1细胞mTORC1、HIF-1α蛋白表达水平均低于对照组,且400 nmol/L组表达水平最低。结论 BIIB021通过抑制mTORC1和HIF-1α蛋白的表达抑制Skm-1细胞增殖。

针灸预处理对心肌缺血再灌注损伤兔不同时间热休克蛋白27、70、90表达的影响

目的:探讨针灸预处理诱导热休克蛋白(HSP)表达对心肌缺血再灌注损伤(MIRI)兔延迟保护作用的机制。方法:新西兰大耳白兔随机分为假手术组、模型组、电针组和艾灸组,每组18只,各组按预处理后不同时相再分为0、24、48h3个亚组,每组6只。电针组及艾灸组造模前电针或艾灸"内关",每次20min,每日1次,共治疗5d。各组于预处理5d后0、24、48h行冠脉结扎法复制心肌缺血再灌注模型。HE染色观察左心室肌病理变化,电镜观察左心室肌超微结构变化。免疫组化法检测兔心肌组织HSP 27、HSP 70、HSP 90的表达。结果:各组预处理家兔的HE染色及超微结构结果显示,与假手术组比较,模型组心肌损伤较严重,肌纤维紊乱,部分溶解,小血管扩张;与模型组比较,电针组及艾灸组心肌损伤较轻,肌纤维大多正常,肌丝间局灶性水肿减少,线粒体丰富。在不同时相,模型组心肌HSP 27、HSP 70、HSP 90表达与假手术组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。在0h时,各组兔心肌HSP 27表达差异均无统计学意义(P>0.05);在24、48h时,电针及艾灸组比模型组的心肌HSP 27表达均明显增强(P<0.05,P<0.01)。在0、24h时,艾灸组的HSP 70表达均高于模型组(P<0.05,P<0.01),而且在24h时,艾灸组HSP 70的表达明显高于电针组(P<0.05);在48h时,艾灸组及电针组HSP 70的表达均明显高于模型组(P<0.01)。0、24、48h各组的HSP 90表达差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:电针与艾灸"内关"对兔MIRI均有预保护作用,可减轻兔心肌组织病理改变,其作用与心肌组织HSP 27及HSP 70表达的增强有关,且这种预保护效应存在时间差异,体现在24、48h时更为明显,提示电针与艾灸均具有延迟性保护作用。

缺氧诱导因子1α对脑缺血再灌注损伤后热休克蛋白90及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3和9表达的影响

缺氧诱导因子1α（HIF-1α）是一种转录活化因子，在低氧情况下充当基因表达使者，无论是全身缺氧、脑半球缺血、脑局灶性缺血，脑组织中均有HIF1α的激活。脑梗死后缺血缺氧条件可诱导HIF-1α表达，其可与下游靶基因的缺氧诱导原件结合，通过调节其下游靶基因的表达，使缺氧的组织和细胞耐受低氧环境而发挥脑保护作用。本文对HIF-1α及其重要靶基因在急性脑卒中的表达做一综述，为临床基因治疗提供理论依据。

基于均相时间分辨荧光技术(HTRF)的HSP90-HOP相互作用抑制剂活性测试方法的构建及其应用

热休克蛋白90(HSP90)是细胞内大量表达的一类蛋白,其主要功能是辅助细胞内其他蛋白(客户蛋白)的成熟。HSP90的众多客户蛋白与肿瘤的发生发展有重要的关系,因此抑制HSP90的功能可以使这些癌症相关蛋白降解,从而诱导肿瘤细胞凋亡,达到治疗肿瘤的目的。HSP90在发挥功能时还需要与辅伴侣蛋白HOP相互作用,因此靶向HSP90-HOP的相互作用开展抑制剂研发成为抑制HSP90伴侣系统的新策略。本文基于均相时间分辨荧光技术(HTRF)构建了稳定的用于测试HSP90-HOP相互作用抑制剂活性的方法,并用该方法研究了HSP90 C-端五肽MEEVD及其突变肽段对HSP90-HOP相互作用的抑制活性,为新型HSP90-HOP相互作用抑制剂的筛选和发现提供了重要基础。

姜黄素通过抑制骨髓瘤MM1.R细胞HSP90增强硼替佐米效应的研究

目的:探讨姜黄素对骨髓瘤细胞株MM1.R细胞中HSP9的抑制及增强硼替佐米效应的分子机制。方法:MTT比色法观察不同浓度姜黄素单用和联用0.01 mmol/L硼替佐米对MM1.R细胞的生长抑制作用;用流式细胞仪(Annexin-V和PI标记)分析细胞凋亡;Western-blot方法检测caspase 3,caspase 9蛋白表达,NF-κB蛋白,HSP-90蛋白表达变化。结果:姜黄素单用对MM1.R细胞有一定程度的生长抑制和诱导凋亡作用。而联用0.01 mmol/L硼替佐米后,其浓度依赖作用更明显。而且Western-blot显示两药联用后,上调caspase 3,caspase 9,和下调NF-κB,HSP 90作用更明显,与凋亡和生长抑制呈相关性。结论:姜黄素增加MM1.R细胞对硼替佐米的敏感性,诱导凋亡发生,可能是通过下调NF-κB蛋白和HSP 90蛋白活性实现的。

热休克蛋白90对大鼠缺氧心肌细胞丝氨酸苏氨酸蛋白激酶表达的影响

目的探讨内源性热休克蛋白90(HSP 90)在缺氧心肌细胞丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(AKT)相关信号通路中的作用。方法建立新生Wistar大鼠心肌细胞缺氧模型,将细胞分为正常组、缺氧组、加入HSP 90特异性阻断剂格尔德霉素后再缺氧组(格尔德霉素+缺氧组)。于缺氧后1、3、6、12、24、48 h用噻唑蓝法检测心肌细胞的活力;缺氧24 h,原位缺口末端标记法检测心肌细胞凋亡指数(AI);缺氧1、3、6、12、24 h,蛋白质印迹法检测大鼠心肌细胞中内源性HSP 90及AKT表达水平。结果(1)缺氧24、48 h,缺氧组、格尔德霉素+缺氧组细胞活力均较正常组明显下降(P<0.05);格尔德霉素+缺氧组细胞活力缺氧12 h即开始明显下降,缺氧48 h时明显低于缺氧组(P<0.05)。(2)缺氧24 h,缺氧组细胞AI为(10.7±1.2)%,明显高于正常组[(1.9±0.3)%,P<0.05];格尔德霉素+缺氧组细胞AI为(26.3±5.3)%,明显高于缺氧组(P<0.01)。(3)缺氧12 h,缺氧组心肌细胞内源性HSP 90及AKT表达水平高于正常组与格尔德霉素+缺氧组;缺氧24 h,缺氧组有所下降,格尔德霉素+缺氧组则下降更明显。结论内源性HSP 90对维持心肌细胞的活力有重要作用,缺氧心肌细胞AKT表达水平可受内源性HSP 90表达水平的影响。

基于网络药理学的黄精抗肿瘤成分筛选研究

目的探讨黄精抗肿瘤的药效物质基础及分子作用机制。方法采用中药网络药理学数据库和分析平台(TCMSP)对黄精的化学成分进行收集,借助计算机辅助预测吸收、分布、代谢和排泄(ADME)性质并结合obioavail 1.1和pre-Caco-2预测模型对活性成分群进行初筛;对所有潜在活性成分进行靶点识别;采用Cytoscape3.6.1软件进行"活性成分-靶标"网络的构建,并利用"network analyzer"插件对网络的拓扑性质进行分析;采用在线分析工具DAVID进行KEGG通路富集分析。结果黄精中已鉴定的39个化合物,其中18个具有良好的ADME性质的化合物,这些潜在的活性成分中,共有14个活性成分及其对应的19靶标与黄精抗肿瘤的活性密切相关。通过构建"活性成分-靶点"网络及对网络进行分析,共获得个4关键化合物:黄芩素、3’-甲氧基大豆苷元、异甘草素、(2R)-7-羟基-2-(4-羟苯基)-4-苯丙二氢呋喃;2个关键靶标:前列腺素G/H合酶2、热休克蛋白90AA1。在对靶点进行KEGG通路分析时,共获得12条与抗肿瘤相关的通路。结论黄精可通过多成分、多靶点及多通路的作用机制发挥其抗肿瘤活性。