西蒙得木HSP20基因家族的进化、表达和功能分析

【目的】研究西蒙得木HSP20家族成员的结构和功能,为后续研究提供支撑。【方法】从结构分析、系统发育、表达模式等方面对西蒙得木HSP20家族成员(ScHSP20s)进行系统分析,并对ScHSP20-17进行功能分析。【结果】西蒙得木基因组中包含35个HSP20基因座位,其中8个基因涉及串联重复,5个涉及片段重复。系统发育分析表明,35个ScHSP20聚为12个亚家族,其中核质亚家族数量最多。启动子分析表明,多数ScHSP20家族成员启动子区域含有激素响应和非生物胁迫等相关顺式作用元件。转录组分析表明,ScHSP20-35和ScHSP20-17等部分热激蛋白基因在花和种子发育过程中表达量发生显著性改变,而ScHSP20-17和ScHSP20-28等基因受高温诱导。亚细胞定位分析表明,ScHSP20-17编码的蛋白定位于细胞核中,并且在大肠杆菌、酵母和烟草中过表达ScHSP20-17能显著提高它们对高温胁迫的耐受性。【结论】部分ScHSP20家族成员参与了西蒙得木生殖发育和非生物胁迫应答。

番茄HSP20基因家族的全基因组鉴定、系统进化及表达分析

热激蛋白是从细菌到高等真核生物中普遍存在的一种在受到环境胁迫的响应后迅速合成的蛋白。因为小分子热激蛋白的分子量普遍在20k Da左右,故称为HSP20。借助番茄基因组数据库,利用生物信息学方法对HSP20基因家族进行鉴定及分析,结果表明,番茄中至少含有43个HSP20基因,不均匀的分布在番茄的12条染色体上。通过对茄科植物番茄、辣椒、马铃薯HSP20进行系统进化分析发现,三者存在同源关系。对HSP20基因启动子序列分析发现多个响应植物糖代谢和逆境胁迫的顺式作用元件,包括SURE、W-box等。基于RNA-Seq数据库中2种测序番茄(Heinz1706和pimpinellifolium)的表达分析发现,大多数家族成员在果实发育时期表达量高,在其他组织中的表达量相对较低。这些研究结果为鉴定番茄HSP20基因的进化及其功能奠定了基础。

牛双芽巴贝斯虫新疆株HSP20基因的克隆和真核表达质粒的构建

通过设计牛双芽巴贝斯虫热休克蛋白HSP20基因序列的特异性引物,采用PCR方法从疑似"牛焦虫病"的患牛全血基因组中扩增得到699 bp的HSP20基因,将其连入pMD18-T测序、鉴定,再将验证的699 bp的HSP20基因克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建真核载体PCDNA3.1-HSP20。经再次测序、鉴定后,尾静脉注射小白鼠进行HSP20基因的瞬时表达,取其肝脏提取总RNA,经RT-PCR方法扩增出一条534bp的目的条带,表明真核表达质粒构建成功。

菜粉蝶HSP20基因的克隆及温度胁迫下表达分析

【目的】克隆分析菜粉蝶(Pieris rapae)热激蛋白20基因(HSP20),并检测其在温度胁迫下的表达情况,为探析菜粉蝶适应温度胁迫机制提供参考。【方法】以菜粉蝶为试验材料,采用RT-PCR和RACE克隆获得菜粉蝶HSP20基因cDNA全长,并通过生物学软件分析其序列,明确其基因结构特征和亲缘关系;采用实时荧光定量PCR检测菜粉蝶HSP20基因在低温(-20～0℃)和高温(5～45℃)胁迫下的表达响应。【结果】菜粉蝶HSP20基因全长725 bp,5'-端非编码区105 bp,3'-端非编码区109 bp,开放阅读框531 bp,编码176个氨基酸,预测蛋白分子量19.5 kD,理论等电点6.61;其编码氨基酸序列中含有1个典型的HSP20家族结构域(位于第60～142位氨基酸)、1个α-晶体蛋白(位于第60～157位氨基酸)和1个Allato allatostatin(位于第14～24位氨基酸);基序列相似度分析其与二化螟、家蚕和甘蓝夜蛾HSP20蛋白氨基酸相似度较高并聚为一族。该基因随环境温度的升高或降低发生变化,在-5和40℃诱发该基因高效表达。【结论】低温和高温均能诱导菜粉蝶HSP20基因高效表达。

细粒棘球蚴Eg HSP20蛋白基因的分子特征、表达及其反应原性研究

【目的】本文构建细粒棘球蚴(Echinococcus granulosus,Eg)HSP20基因的重组表达载体并表达、纯化重组蛋白,研究其反应原性。【方法】根据Gen Bank中Eg HSP20蛋白基因c DNA序列设计特异性引物,以细粒棘球蚴Eg头节总RNA为模板,进行RTPCR扩增,将PCR产物克隆至p MD19-T载体,测序验证后,将Eg HSP20抗原基因亚克隆至表达载体p ET-32a中,再将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞内,用IPTG进行诱导表达,并对表达的蛋白进行纯化及反应原性分析。【结果】Eg HSP20 c DNA全长945个核苷酸,编码314个氨基酸。该多肽含有1个N端糖基化位点,1个CAMP磷酸化位点,5个PKC磷酸化位点,10个CKⅡ磷酸化位点;抗原表位区集中在39~53位和120~168位。SDS-PAGE检测显示,重组菌可表达分子量为51 k Da的重组蛋白;Western blot结果显示,表达的重组蛋白Eg HSP20抗原能与Eg阳性血清发生特异性反应。【结论】证实Eg HSP20蛋白具有较强的反应原性,为进一步利用Eg HSP20重组蛋白作为Eg感染诊断中候选标识分子奠定了前期基础。

沙鼠前脑缺血再灌注后脑组织HSP20和EPO的表达变化及相关性

目的观察沙鼠前脑短暂性缺血再灌注后,HSP20与EPO在脑组织中的表达,探讨二者的相关性和保护机制,并评估它们的临床应用前景。方法 45只健康雄性蒙古沙鼠随机分为三组:正常对照组、假手术组和脑缺血再灌注组,其中假手术组和脑缺血再灌注组又分为4个亚组:6 h组,1 d组,3 d组和7 d组。予以夹闭双侧颈总动脉并再通造成脑缺血再灌注模型。HE染色观察沙鼠前脑组织的病理变化。免疫组织化学染色观察HSP20和EPO的表达情况。结果 HE染色:正常对照组和各假手术组的沙鼠前脑组织形态结构没有明显的变化;脑缺血再灌注组根据时间点的不同可见胶质细胞肥大、增生,细胞和细胞间质水肿,神经元坏死。免疫组化染色:与对照组及假手术组相比,缺血再灌注损伤后HSP20及EPO的表达均上调,于第三天达到高峰,后开始下降至7 d时仍高于正常组和假手术组(P<0.05),且两者的表达趋势相同呈正相关(r=0.777,P<0.05)。结论缺血再灌注的沙鼠脑组织中HSP20及EPO表达均升高并可能减轻缺血再灌注所导致的脑损伤。

玉米种胚HSP20基因对人工老化处理的响应

以玉米杂交种"郑单958"为材料,采用高温(45°C)高湿(100%相对湿度)对玉米种子进行人工老化处理,并用转录组技术,研究植物HSP20基因对种子人工老化处理的响应,旨在为揭示种子衰老的分子机制提供依据。结果表明,随着老化时间的延长,种子活力和种胚内过氧化氢酶的活性均表现下降趋势;过氧化氢含量在老化第3天达到最大值,随后下降;丙二醛含量逐渐升高;转录组检测表明,种子老化过程中差异显著的HSP20基因有25个,这些基因编码的HSP20蛋白主要被定位在细胞核、线粒体、以及叶绿体上,其序列中均含有ACD保守序列(RVDWRETPDAHEIVVDVP GMRREDLRIEVEDNRVLRVSGERRRAEERKGDHWHREERSYGRFWRRFRLPENADLDSVAASLDSGVLTVRFRK)。该序列中含有较多的Arg (11.2%)、Lys(7.2%)、Pro(4.2%)、Thr(3.9%)等氨基酸,老化过程中积累的ROS可能氧化这些氨基酸,导致HSP20结构破坏、功能丧失。利用qRT-PCR技术对挑选的编码细胞质、叶绿体和线粒体HSP20的基因的表达模式分析显示,随着老化程度的加深,2个编码细胞质HSP20的基因上调表达,另外两个编码叶绿体和线粒体HSP20基因的表达量在老化第3天达最大值,随后下降。推测HSP20基因对种子老化有重要作用,HSP20蛋白的ACD结构域中Arg、Lys等氨基酸的靶向氧化可能是种子衰老的主要原因之一。

不同浓度白藜芦醇对脑缺血-再灌注大鼠HSP20表达的影响

目的探讨不同浓度白藜芦醇对缺血-再灌注脑损伤大鼠神经功能损伤及热休克蛋白20（HSP20）表达的影响。方法将150只健康的成年雄性SD大鼠随机分成五组：假手术组，模型组（I／R组），小剂量白藜芦醇（2．5mS／kg）组，中剂量白藜芦醇（5mS／kg）组，大剂量白藜芦醇（10mS／kg）组，每组30只，制作脑缺血一再灌注大鼠模型，灌注前20min给予生理盐水或不同浓度白藜芦醇腹腔注射，术后6h、24h、48h、72h、7d时间节点分别评定神经功能缺损评分。应用四氮唑红染色（TFC）脑组织后计算脑梗死病灶体积并比较五组的差异；分别应用免疫组织化学染色和Western blot检测缺血脑组织周边区组织的HSP20表达量并比较五组的差异。结果①各组神经功能缺损评分比较：各模型组大鼠在缺血-再灌注后各时间节点均有神经功能缺损，同时白藜芦醇剂量越大，大鼠的神经功能缺损改善越明显；②各组脑梗死病灶体积比较：不同浓度白藜芦醇干预各组大鼠的脑梗死体积显著减少（P〈0．05），且白藜芦醇剂量越大，大鼠的脑梗死体积减少程度越大，呈显著剂量依赖性；③在各个时间点，各组大鼠缺血周边区脑组织的HSP20阳性细胞数为：大剂量白藜芦醇组〉中剂量白藜芦醇组〉小剂量白藜芦醇组〉模型组〉假手术组（P〈0．05），并且白藜芦醇剂量越大，大鼠的HSP20蛋白表达量越多。结论①缺血一再灌注脑损伤过程中，白藜芦醇能有效地保护大鼠脑神经细胞，减少脑梗死体积，改善神经功能缺损评分，这一作用可能是通过促进HSP20表达来完成的；②白藜芦醇对脑缺血一再灌注损伤的保护作用与剂量相关，并且呈现显著剂量依赖性。

拟南芥Hsp20基因家族的特征及其在干旱和盐胁迫下的表达分析

热激蛋白20(heat shock protein 20,Hsp20)是植物响应非生物胁迫时广泛合成的一类功能蛋白质,参与植物的抗逆过程。借助拟南芥基因组数据库,利用生物信息学方法分析Hsp20基因家族。HMMER搜索和蛋白质的理化性质分析表明,拟南芥至少含有30个Hsp20基因,其编码蛋白的分子质量为14.6~41.4 kD,且均含有α-晶状体蛋白结构域。系统发育分析表明,在30个拟南芥Hsp20成员中,22个归属于12个不同的亚家族,其余8个归于未知分类,可能为Hsp20类蛋白质(Hsp20-like)。共线性分析表明,片段复制与串联复制是Hsp20成员的主要扩增事件,大部分Hsp20不含或只含1个内含子。MEME分析结果表明,基序1、2、9是Hsp20共有的保守基序。转录组分析提示,15个Hsp20的表达水平在干旱和(或)盐胁迫后出现了上调,该结果得到了qRT-PCR实验的验证。以上结果为人们进一步探究Hsp20基因的生物学功能提供了理论依据。

圆齿野鸦椿Hsp20基因家族鉴定及功能分析

为了探究圆齿野鸦椿Hsp20基因在强光、高温胁迫中的作用,利用生物信息学的方法对圆齿野鸦椿Hsp20基因家族进行全基因组鉴定,并从理化性质、系统进化、保守基序及基因结构、染色体定位及物种间共线性、顺式作用元件预测、蛋白网络互作和表达模式等方面进行分析.结果表明:圆齿野鸦椿含有32个Hsp20基因,分布在9条染色体中,分为5个大家族和12个亚家族,多数基因有1个内含子.EkHsp20家族的主要扩增方式为片段复制.圆齿野鸦椿含有多个非生物胁迫响应元件和激素类响应元件,如光响应元件、脱落酸响应元件等.表达量分析结果表明,圆齿野鸦椿Hsp20基因与Hsp101基因有蛋白网络互作关系.ER家族是一类提高植株的抗冷性的基因,圆齿野鸦椿基因组中缺失ER基因家族,这可能与其不耐寒相关.根据高温、持续强光导致叶片蜷缩的现象,结合EkHsp20-04、EkHsp20-20、EkHsp20-25在系统发育树中与拟南芥Hsp17.6b聚合在一起、与拟南芥Hsp101呈现蛋白互作关系,且均为CⅠ家族成员,推测EkHsp20-20、EkHsp20-04、EkHsp20-25可能是促使圆齿野鸦椿在高温条件下产生自我防御行为的主要基因.

花生HSP 20基因家族鉴定及其表达特性分析

HSP20是一类小分子热激蛋白,在植物抵御逆境胁迫中发挥重要作用.本研究借助花生基因组数据库,通过隐马尔可夫(Hiddne Markov Model,HMM)搜索野生种花生(Arachis duranensis)和(Arachis ipaensis)蛋白质数据库,鉴定出AdHSP 20和AiHSP 20基因各27个,基因长度为946~1 103 bp,不均匀分布在花生9条染色体上.进化树分析显示,这些基因分为11个亚家族.通过对基因结构和保守序列分析表明该基因家族高度保守.表达分析发现,2个野生种花生中各有5个基因在各组织中高表达,大部分基因在果针入土期开始大量表达,具有组织表达特异性,存在多个激素及逆境胁迫相关的顺式作用元件,预示着该基因家族参与花生逆境胁迫响应.

坛紫菜HSP20基因家族成员的全基因组鉴定及生物信息学分析

【目的】鉴定坛紫菜(Pyropia haitanensis)HSP20基因家族成员(PhHSP20s),并进行生物信息学及表达谱分析,为揭示PhHSP20s基因在坛紫菜生长发育和非生物胁迫下的调控机理提供理论依据。【方法】对坛紫菜基因组序列进行基因结构预测,利用隐马尔可夫模型在坛紫菜蛋白序列中搜索含有ACD结构域且分子量为12~43 kD的HSP20家族蛋白,并对其理化性质、系统进化及编码基因启动子顺式作用元件和表达特性进行分析。【结果】从坛紫菜全基因组鉴定出8个PhHSP20s基因,其不均匀地分布在5条Scaffolds上,均只含有1个外显子,无内含子,开放阅读框(ORF)长度为402~930 bp,其编码蛋白的氨基酸残基数量为133~309个,分子量为13.7~31.9 kD,理论等电点(pI)为5.50~10.49,多数蛋白呈酸性。系统发育进化树分析结果显示,陆生植物(拟南芥)、红藻(脐形紫菜和坛紫菜)和细菌(大肠杆菌)HSP20分别聚类为独立的一支,但绿藻(莱茵衣藻)HSP20聚类为2个分支,分别与陆生植物和红藻HSP20聚类在一起;红藻(脐形紫菜和坛紫菜)HSP20蛋白高度相似,亲缘关系近,可分为2个小分支,均与陆生植物HSP20的亲缘关系较远,不属于陆生植物中已报道过的任何HSP20亚族。PhHSP20s基因启动子上除了含有保守的通用元件外,还含有非生物胁迫响应元件。在PhHSP20s基因中,除PhHSP32基因几乎不在任何条件下表达外,其余PhHSP20s基因至少在1种条件下高表达,且部分PhHSP20s基因表现出相似的表达模式;部分PhHSP20s基因在不同生长阶段、光质培养条件、失水胁迫和盐胁迫下具有表达特异性,即在生殖细胞发育阶段和单性生殖孢子发育期高表达,在低盐胁迫下高表达。【结论】坛紫菜HSP20家族基因在基因数目、基因结构及系统进化上明显不同于陆生植物HSP20家族基因,推测HSP20基因复制事件在红藻和陆生植物分化之后独立发生,且在坛紫菜生长发育和非生物胁迫应答中发挥作用。

EGFR外显子20插入突变:研究现状与治疗新策略

作为非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中重要的致癌驱动基因,表皮生长因子受体外显子20插入突变(epidermal growth factor receptor exon 20 insertion,EGFR ex20ins)具有独特蛋白构象,并且对传统EGFR酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-tyrosine kinase inhibitors,EGFR-TKIs)原发耐药。近年来,靶向EGFR ex20ins的药物探索从未停止。莫博赛替尼与埃万妥单抗率先被美国食品药品监督管理局(Food and Drug Administration,FDA)获批用于EGFR ex20ins突变NSCLC患者,随后舒沃替尼等药物取得突破,联合治疗方案的探索也有所收获。多管齐下有望克服EGFR ex20ins耐药。因此,深入了解EGFR ex20ins的分子机制并评估新型药物的有效性与差异性至关重要。本文将对相关最新研究成果进行全面总结,以期为EGFR ex20ins突变患者精准治疗提供有价值的参考。

燕麦sHSP基因家族的鉴定及其响应高温及老化的表达分析

小热激蛋白(sHSPs)是植物体中普遍存在的由核基因编码的一类蛋白,具有保守的ACD结构域,能够在高温、干旱以及老化等胁迫刺激中发挥重要作用。本研究利用生物信息学方法在燕麦基因组中鉴定得到24个HSP20(AsHSP20.1~AsHSP20.24)基因,并对AsHSP20家族成员的理化性质、蛋白结构、亚细胞定位、系统进化、保守基序和保守结构域、基因染色体位置以及响应高温及老化基因的表达等进行系统分析。研究发现AsHSP20基因分布在17条染色体上。编码氨基酸数目136~529 aa,分子量大小14.9~58.1 kDa,理论等电点5.30~8.79。HSP20成员多定位在核、胞质和叶绿体上,部分定位在质膜、线粒体、过氧化物酶体以及胞外。蛋白质二级结构和三级结构分析表明AsHSP20成员确定有β-折叠结构。根据保守基序组成与系统发育关系分析,AsHSP20基因家族被分为11个亚组,同一亚组成员之间具有相似或相同的保守基序,表明这些蛋白之间具有功能的相似性。进一步分析自然老化和人工老化处理下AsHSP20基因的表达情况,结果表明AsHSP20.20、AsHSP20.24基因在自然老化处理与人工老化处理下共同下调表达,推测AsHSP20.20和AsHSP20.24在两种老化方法下共同参与调控燕麦种子活力降低的过程,可作为燕麦种子寿命及抗老化种质育种研究的候选基因。研究为AsHSP20基因家族在燕麦种质老化过程中的调控机制提供了有价值的信息,也为进一步探究燕麦HSP20基因的功能及种子抗衰老分子机制提供了理论支撑。

EGFR 20外显子插入突变非小细胞肺癌的诊疗现状及进展

表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)基因突变是非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中最常见的突变类型,该类突变可因变异位点的不同而产生结构和功能的异质性。其中,EGFR 20外显子插入突变(exon 20 insertion,ex20ins)发生率约占所有EGFR突变NSCLC患者中的4%~12%,是仅次于EGFR 19外显子缺失突变及EGFR 21外显子L858R突变的类型。EGFR ex20ins突变由于插入位点的不同,也存在异质性,对现有针对EGFR的靶向药物敏感度不同,且大多数并不敏感,因此其治疗仍以化疗为主。随着对此类突变的深入研究,多种药物已进入临床阶段。该文对EGFR ex20ins突变的结构和功能、治疗进展等方面进行综述,以期为临床治疗提供新的思路。

大豆Hsp20基因家族生物信息学分析及高温高湿胁迫响应的分析

热激蛋白(Hsps)家族中的小热激蛋白(Hsp20)在保护植物免受非生物胁迫方面发挥至关重要的作用,为探究大豆Hsp20家族基因的特性及其对高温高湿胁迫的响应,对大豆进行了全基因组分析,本研究采用生物信息学方法对进化关系、保守结构域、染色体位置、启动子顺式调控元件和组织特异性表达情况进行预测分析,并采用同位素标记相对和绝对定量(iTRAQ)技术对湘豆3号和宁镇1号两个大豆品种在高温高湿胁迫下不同时间的蛋白表达量进行了分析。结果表明:在大豆基因组中共查找出33个GmHsp20基因,不均匀分布在16条染色体上并根据系统发育分析和亚细胞定位结果分为11个亚族。序列分析表明GmHsp20蛋白表现出较高的结构保守性,含有典型的ACD结构域,32个GmHsp20基因(96.96%)没有内含子,或只有1个内含子。启动子分析表明,GmHsp20基因含有大量与胁迫相关的顺式作用元件,其中MYB数目最多(110)个。基因组织特异性表达预测分析结果显示,除GmHSP22.6外,其余基因在各种组织和器官中均有表达。其中GmHSP18.5、GmHSP23.7、GmHSP15.2基因在所有组织中均高度表达。蛋白定量分析结果表明,与对照相比,宁镇1号和湘豆3号两个品种中,经高温高湿胁迫处理后,GmHSP18.5、GmHSP23.7、GmHSP26.0B、GmHSP17.8、GmHSP25.95个蛋白均上调表达,并且在两个品种间表达趋势基本一致,表明这些小热激蛋白家族成员可能参与了大豆对高温高湿胁迫的应答反应过程。本研究结果为进一步研究大豆小热激蛋白GmHsp20家族成员的功能提供有价值的信息。

甲磺酸伏美替尼一线治疗1例EGFR 20号外显子插入突变肺腺癌患者

随着基因组学、蛋白组学和分子生物检测技术的不断创新,晚期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)的治疗模式逐渐多样化,已经从传统的化疗逐渐过渡到免疫治疗及靶向治疗。其中,以靶向酪氨酸激酶通路为靶点的分子肿瘤标志物在临床中发挥着越来越重要的作用。针对NSCLC患者表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)突变阳性,现阶段市面上已经有众多一线治疗药物上市,且均有较为明显的治疗效果。在中国患者中EGFR常见的变异位点位于19、20和21号外显子上,其中19和21号外显子突变是较为常见的突变类型,除此以外,EGFR突变还有一种亚型,被称为EGFR 20号外显子插入(EGFR exon 20 insertion,EGFR20ins)突变。我们针对1例EGFR20ins突变肺腺癌患者接受甲磺酸伏美替尼治疗进行总结,以期为临床诊疗提供有效借鉴。

大豆HSP20基因的鉴定及表达分析

HSP20是一种小分子热激蛋白,在植物生长发育和抗胁迫过程中发挥重要作用。研究利用生物信息学方法对大豆中56个GmHSP20家族基因进行了鉴定,并对其理化性质、基因结构、进化关系、启动子原件以及表达模式进行了分析。56个家族基因分为11个亚族,分布在18条染色体上;氨基酸长度不一、分子量和等电点变化范围比较大;启动子原件分析发现含有植物胁迫相关的元件。基因表达模式显示:GmHSP20家族基因在种子发育第42天表达水平较高。此外,研究还发现GmHSP18.5A和GmHSP18.5B在大豆不同部位和各生长发育阶段都有表达且表达水平较高,具有相似的表达模式。

EGFR外显子20插入突变阳性NSCLC治疗的临床研究进展

表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)外显子20插入突变是EGFR突变的第三大常见类别,约占所有EGFR突变阳性非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)的5%-12%。携带EGFR外显子20插入突变的NSCLC患者临床特征与"经典"EGFR激活突变人群相似,但预后很差。EGFR外显子20插入突变异质性高,可导致EGFR不同构象变化。大多数(几乎90%的病例)发生在α-C-螺旋后的Loop环结构区,最常报告的插入突变亚型为D770_N771>ASVDN(A767_V769dupASV),突变频率为21%-28%。目前已知EGFR外显子20插入突变的NSCLC对既往已批准的EGFR酪氨酸激酶抑制剂原发性耐药,而且对传统化疗和免疫治疗也不敏感。近期Amivantamab与Mobocertinib在美国的获批改变了EGFR外显子20插入突变的NSCLC患者的治疗模式。此外,针对NSCLC EGFR外显子20插入突变的其他新型靶向药物正在研发中,期待为该类患者带来更多生存获益。本文就近年来伴有EGFR外显子20插入突变的NSCLC的临床研究进展进行归纳总结,旨在为该类患者的临床治疗提供参考。

人肝癌细胞氧化应激模型中热休克蛋白90α对20S蛋白酶体功能的影响

目的观察人肝癌细胞氧化应激模型中细胞内Hsp90α和20S蛋白酶体的表达的变化以及Hsp90α表达下调后对20S蛋白酶体功能的影响;明确热休克蛋白90α对20s蛋白酶体功能的影响。方法以500μMH2O2建立氧化应激HepG2细胞模型;通过ROS探针法观察细胞在不同氧化应激条件下ROS的分布和含量,通过MTT比色法观察氧化应激对细胞存活的影响;以免疫印迹方法检测氧化应激对细胞内Hsp90α及20S蛋白酶体的合成的影响;以pSilencer2.1-U6neo载体,用电穿孔法建立稳定的Hsp90α抑制表达细胞株,通过检测糜蛋白酶活性观察氧化应激和降低Hsp90α表达对蛋白酶体活性的影响。结果氧化应激后细胞内ROS的含量增多,且分布从胞浆向胞核转移;随着作用时间延长,H2O2对HepG2细胞增殖的抑制程度增强;氧化应激导致胞内Hsp90α表达量先增加后降低,20S蛋白酶体表达量明显降低;siRNA干扰组蛋白酶体活性显著下降。结论氧化应激可影响细胞内Hsp90α和20S蛋白酶体的表达并改变其细胞内分布;氧化应激及降低Hsp90α的表达均可影响蛋白酶体的活性;Hsp90α对蛋白酶体功能维持起保护性的作用。