海豚链球菌感染对不同品系罗非鱼血液生化指标和肝脏HSP70 mRNA表达的影响

以吉富罗非鱼、新吉富罗非鱼、埃及尼罗罗非鱼和红罗非鱼为研究对象,饲养100d后,进行海豚链球菌(2.95×108CFU/mL)感染试验,分析攻毒前后各品系罗非鱼的血液生化指标和肝脏HSP70 mRNA表达量的变化规律。另从各桶中取20尾鱼进行同样的攻毒试验,统计攻毒后各时间点的累积死亡率。结果表明,感染海豚链球菌96h后,吉富罗非鱼和新吉富罗非鱼对病原较为敏感,累积死亡率分别达到36.67%和38.33%;埃及尼罗罗非鱼对病原敏感性较差,试验期间未见死亡。吉富罗非鱼、新吉富罗非鱼和红罗非鱼血清皮质醇和葡萄糖水平以及肝脏HSP70 mRNA的表达量在攻毒后明显提高,血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶与溶菌酶活力也呈上升趋势,碱性磷酸酶活力与甘油三酯和胆固醇水平低于攻毒前。埃及尼罗罗非鱼可以利用糖原和脂类产生的能量,提高了HSPS与一些特定免疫蛋白(溶菌酶、球蛋白等)的合成,增强了鱼体的非特异性免疫力。罗非鱼选育过程中,需要将抗病力与生长性能进行有效的结合,在注重生长速度的同时也要增强其抗应激能力,从而为罗非鱼产业的可持续发展提供保证。

急性热应激对西伯利亚鲟HSP70 mRNA表达、血清皮质醇和非特异性免疫的影响

为研究西伯利亚鲟(Acipenser baerii)对急性热应激的抗逆机理,将体质量为(155.47±19.50)g的鱼从17.5℃迅速转至27.5℃水中,在1h和3h取样测定HSP70 mRNA表达变化、血清皮质醇和非特异性免疫指标。结果显示:急性热应激时鳃、脾和脑的HSP70 mRNA表达量升高,具有组织特异性,热应激1h时鳃的表达量升高最快(P<0.05),3h时保持1h时的表达水平;脾和脑热应激1h时表达量变化不显著,在1h至3h时升高较快,并且脑组织的表达量升高最快(P<0.05)。热应激1h时血清皮质醇(Cortisol)含量迅速升高(P<0.05),之后快速回落。脾脏巨噬细胞呼吸暴发在热应激1h时显著升高(P<0.05),3h时降低。血清补体C3在1h时略有升高,3h时显著性降低(P<0.05)。血清溶菌酶活性(LZM activity)先升高后降低差异不显著。血清超氧化物歧化酶(SOD)活力随热应激时间延长逐渐降低,3h时显著降低(P<0.05)。血清丙二醛(MDA)含量随热应激时间延长逐渐降低,差异不显著。以上结果表明:1h的短暂急性应激增强了西伯利亚鲟的非特异性免疫,3h的应激使免疫力和抗氧化能力显著下降;在热应激过程中,HSP70表达升高,其中鳃组织最快,起到应激保护作用,提高了机体热耐受力。

不同强度冷应激下仔猪淋巴细胞HSP70 mRNA的转录规律

采用实时荧光定量PCR技术检测仔猪血液淋巴细胞HSP70 mRNA的转录量,探讨不同冷应激强度对淋巴细胞HSP70 mRNA转录量的影响.结果表明,仔猪在-10^-4℃冷暴露0.5h,淋巴细胞HSP70 mRNA的转录量迅速升高(P<0.05),并一直保持高水平至6h(P<0.05),随后下降,冷暴露结束后24h恢复正常.在4~10℃冷暴露前后,淋巴细胞HSP70 mRNA转录量无明显变化(P>0.05).结果提示,冷暴露温度越低,淋巴细胞中HSP70 mRNA转录越迅速,但冷暴露结束进入常温后HSP70 mRNA转录水平再次升高的时间延后;HSP70 mRNA转录呈现规律性变化,可以考虑把HSP70 mRNA优先作为评估不同冷应激的客观指标.

木犀草素对糖尿病脑梗死大鼠神经细胞凋亡及HSP70 mRNA、Fasm RNA表达的影响

目的探讨木犀草素对糖尿病脑梗死大鼠神经细胞凋亡及HSP70 mRNA、Fas mRNA表达的影响。方法 Wistar大鼠60例,随机分为对照组、模型组及木犀草素高、中、低剂量组。对照组给予常规饲料喂养;模型组及木犀草素高、中、低剂量组采用高脂高糖饮食加腹腔注射小剂量链脲霉素建立糖尿病大鼠模型,造模后,木犀草素高剂量、中剂量、低剂量组每日分别给予木犀草素200、100、50 mg/kg灌胃,模型组每日给予生理盐水2 mL灌胃,连续8周。再以线栓法建立大鼠大脑中动脉永久性缺血模型,术后24 h断头取脑,用TUNEL法和原位杂交法观察大鼠脑细胞凋亡与脑组织HSP70 mRNA及Fas mRNA的表达。结果木犀草素低、中、高剂量组糖尿病脑梗死神经细胞凋亡数分别为(16.42±1.39)、(11.08±2.15)、(9.25±1.98)个/高倍视野低于模型组[(29.75±2.36)个/高倍视野],组间差异有统计学意义(均P<0.01);HSP70 mRNA在模型组表达[(9.75±2.766)个/高倍视野]显著高于对照组[(0个/高倍视野)](P<0.01);低、中、高三个剂量的木犀草素组HSP70 mRNA表达分别为(11.33±2.15)、(13.92±2.15)、(14.92±1.95)个/高倍视野,均高于模型组[(9.75±2.76)个/高倍视野](均P<0.01);Fas mRNA在模型组大鼠脑组织阳性细胞数[(25.33±3.17)个/高倍视野]显著高于对照组[(2.67±0.95)个/高倍视野](P<0.01);高、中、低剂量木犀草素组大鼠脑组织Fas mRNA阳性细胞数分别为(11.92±2.41)、(12.00±2.50)、(19.75±2.54)个/高倍视野,显著低于模型组[(25.33±3.17)个/高倍视野](均P<0.01)。结论木犀草素可以抑制糖尿病脑梗死大鼠神经细胞凋亡,其机制与木犀草素升高大鼠脑组织HSP70 mRNA表达,同时使Fas mRNA的表达降低有关。

柴黄胃溃宁对肝郁脾虚证胃溃疡模型大鼠脑组织HSP70 mRNA和Caspase-3 mRNA表达的影响

目的:探讨柴黄胃溃宁对肝郁脾虚证胃溃疡大鼠脑组织中HSP70 mRNA和Caspase-3 mRNA基因表达的影响和可能的疗效机制。方法:采用多因素复合模拟中医病因结合乙酸法建立肝郁脾虚证胃溃疡大鼠模型,用HE染色法观察大鼠胃窦部溃疡组织的病理学改变,采用RT-PCR技术检测脑组织中HSP70mRNA、Caspase-3mRNA表达水平。结果:模型组大鼠脑组织中HSP70mRNA、Caspase-3mRNA表达明显升高,柴黄胃溃宁中剂量组和法莫替丁组HSP70mRNA的表达水平升高,Caspase-3mRNA的表达水平降低,而柴黄胃溃宁高剂量组结果相反。结论:柴黄胃溃宁对肝郁脾虚证胃溃疡模型大鼠神经系统有显著的调节作用,以中剂量效果最佳。

肝缺血再灌注后HSP70 mRNA的表达及其与凋亡关系的临床研究

目的通过检测肝组织在缺血再灌注后HSP70 mRNA的表达及细胞凋亡情况,探讨肝组织对缺血再灌注的反应及HSP70mRNA与肝细胞凋亡之间的关系。为选用有效的预处理方法、抑制细胞凋亡、减轻肝脏缺血再灌注损伤提供理论基础。方法术中在肝门阻断前、肝门阻断后开放时和手术结束关腹前各取切缘旁肝组织10g。原位杂交法检测肝组织中HSP70 mRNA的表达;脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测肝细胞的凋亡情况。结果①肝门阻断前肝组织HSP70 mRNA在每高倍视野下阻性细胞数为1.90±0.84;肝门开放时为24.4±5.7;关腹前为35.7±5.7,3组阳性细胞数比较差异有统计学意义(P<0.05);两两比较差异有统计学意义(P<0.05)。②肝门阻断前肝细胞凋亡指数为(11.4±2.4)‰;肝门开放时为(9.8±1.7)‰;关腹前为(8.6±1.6)‰。肝门阻断前肝细胞的凋亡指数高于肝门开放时肝细胞的凋亡指数(P<0.05)、高于关腹前肝细胞的凋亡指数(P<0.05);肝门开放时肝细胞的凋亡指数高于关腹前肝细胞的凋亡指数(P<0.05)。③肝组织中HSP70 mRNA的表达与肝细胞凋亡指数呈负相关。结论①在正常肝组织中几乎无HSP70 mRNA的表达,术中肝缺血再灌注后的肝组织中HSP70 mRNA有较高的表达,且呈上升趋势,提示HSP70与HIRI的发生和发展有一定关系。②肝门阻断开放后肝组织HSP70 mRNA的表达增加,肝细胞凋亡指数减少,两者呈负相关。提示HSP70具有一定的抑制细胞凋亡作用,HSP70作为一种保护性因素对机体及肝功能的恢复起到一定作用。

金针菇菇脚对热应激蛋鸡生长性能、HSP70 mRNA表达和短链脂肪酸含量的影响

为研究金针菇菇脚(Flammulina velutipes stem base,FVS)对热应激蛋鸡生长性能、HSP70 mRNA表达量和短链脂肪酸(Short chain fatty acids,SCFAs)含量的影响,试验选用72只84日龄伊莎褐蛋鸡,随机分为6组:常温空白组(CON)、热应激空白组(HS)、热应激抗生素组(ANT)和热应激2%、4%、6%FVS组。试验期28 d。结果显示:整个热应激过程中,4%、6%FVS组平均日增重均显著高于HS组(P<0.05)。热应激第14天时,6%FVS组平均日采食量显著低于(P<0.05)其他各组;6%FVS组料重比显著低于HS组(P<0.05)。热应激第28天时,FVS组平均日增重均显著低于HS组(P<0.05)。整个热应激过程中,FVS组的HSP70 mRNA表达量均显著低于HS组(P<0.05),且与CON组和ANT组无显著性差异(P>0.05)。热应激第14天时,HS组SCFAs含量均显著高于其他各组(P<0.05);HS组总SCFAs含量显著高于其他各组(P<0.05);FVS组总SCFAs含量显著高于CON组(P<0.05)。热应激第28天时,2%、6%FVS乙酸含量均显著高于CON组(P<0.05);2%FVS组乙酸含量显著高于其他各组(P<0.05);FVS组丁酸含量显著高于CON组(P<0.05);2%FVS组和6%FVS组总SCFAs含量均显著高于CON组(P<0.05)。研究表明FVS可缓解热应激对蛋鸡生长性能、HSP70 mRNA表达和SCFAs含量的影响,有利于提高蛋鸡生长性能、增加SCFAs含量。

bFGF对脑缺血大鼠脑组织HSP70 mRNA表达影响

目的研究大鼠脑缺血再灌注后热休克蛋白70(HSP70)mRNA的表达,探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对脑组织缺血再灌注神经元HSP70 mRNA的调节作用及机制。方法应用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,大脑中动脉阻塞1h再灌注损伤24h,采用原位缺口末端标记法(TUNEL)、RT-PCR法检测海马及皮质内神经元凋亡和HSP70 mRNA的表达。结果大鼠缺血再灌注海马及顶叶皮质内神经元凋亡数增加而HSP70mRNA表达较正常组增加,注射bFGF后神经元凋亡数减少,HSP70mRNA表达明显高于缺血再灌注组。结论bFGF抑制缺血神经元凋亡,参与HSP70 mRNA的调节,对缺血神经元有保护作用。

不同纬度螅状独缩虫耐热能力及Hsp70 mRNA表达水平的比较

本文以游泳体的形成作为虫体对热激响应的指征,比较了不同纬度(西安:东经108°98′,北纬34°25′;武汉:东经114°34′,北纬30°57′)两地螅状独缩虫(Carchesium polypinum)的耐热能力,发现武汉地区螅状独缩虫(WH株)形成游泳体的热激温度(36℃)高于西安地区(XA株)的33℃,说明前者的耐热能力较强;进一步利用实时PCR技术分析不同热激温度下两地螅状独缩虫热休克蛋白Hsp70mRNA的表达变化发现,XA株Hsp70mRNA热激后高表达水平的阈值温度为28℃,而WH株的为33℃,表明在螅状独缩虫中,Hsp70mRNA表达的阈值温度与它们的耐热能力之间存在正相关。从而在分子水平阐明了螅状独缩虫WH株较XA株具有更高耐热能力的原因,这为研究纤毛虫野生种群热休克蛋白Hsp70mRNA表达与栖息环境温度间的关系,进而了解原生动物温度适应的分子机理提供了线索。

异丙酚对大鼠局灶性脑缺血再灌注后HSP70 mRNA和HSP70蛋白表达的影响

目的研究异丙酚对大鼠局灶性脑缺血再灌注后HSP(热休克蛋白)70mRNA和HSP70蛋白的动态表达规律及其作用的影响。方法采用线栓法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,应用原位杂交原理检测HSP70 mRNA,应用组织化学染色法检测HSP70蛋白。结果异丙酚使HSP70 mRNA的表达增强,时间延长(P<0·05);HSP70蛋白表达量显著增多(P<0·05)。结论异丙酚能显著促进脑缺血再灌注时HSP70的表达。提示异丙酚一方面发挥自身的神经保护作用,另一方面也可以通过诱导HSP70的合成而发挥神经保护作用。

原位杂交检测hsp70 mRNA在黑腹果蝇胚胎中的表达

利用设计合成的地高辛标记的黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)hsp70 DNA探针,整体原位杂交检测热休克反应中,hsp70 mRNA在胚胎发育各阶段的表达情况.实验发现,在正常温度下黑腹果蝇的胚胎检测不到hsp70 mRNA存在.在热激的果蝇胚胎中,可检测到hsp70 mRNA的广泛存在.hsp70 mRNA在热激的胚胎中,除早期细胞化囊胚的极细胞外,其余细胞均可检测到hsp70 mRNA的均一分布.随着胚胎发育,hsp70 mRNA仍广泛分布在各细胞中,晚期胚胎中神经细胞hsp70 mRNA比其余细胞的表达水平高,说明神经细胞具有更高的热诱导活性,在热激反应中hsp70 mRNA的表达水平更高.

冷应激对雏鸡肠组织中HSP70 mRNA表达的影响

探讨冷应激对雏鸡肠道中热休克蛋白70(HSP70)mRNA表达量的影响。120只1日龄的伊莎公鸡,饲养至15日龄,随机平均分为12组,在(12±1)℃进行急性和慢性冷应激处理。急性冷应激时间为0,1,3,6,12和24h;慢性冷应激时间为5、10和20d,并各设对照组。各时间点随机剖杀5只,取十二指肠、空肠、回肠和盲肠用实时定量PCR法检测HSP70 mRNA的表达。结果表明,急性应激时,各组织中HSP70 mRNA的表达整体降低,但在初期显著升高(P<0.05)。慢性冷应激时,各组织中HSP70 mRNA整体显著升高(P<0.05)。结果显示,冷应激可以改变雏鸡肠组织中HSP70 mRNA的表达,表现为急性冷应激初期和慢性冷应激时,肠组织中HSP70 mRNA表达量增加,而急性冷应激后期下降。

基于hsp70 mRNA的RT-qPCR方法评估水中病源微生物的灭活效果

基于热诱导hsp70mRNA的表达,建立一种RT-qPCR方法来评估水中病源微生物的灭活效果。以大肠杆菌为实验对象,通过RT-qPCR方法定量hsp70mRNA表达,以氯胺消毒样本与空白对照样本的hsp70mRNA表达量之比,确定灭活效果。实验结果显示:该方法检测的灵敏度为900cfu·mL^(-1);对氯胺灭活效果的检测,该方法的灭活率明显低于平板培养检测结果。基于hsp70mRNA的RT-qPCR方法,具有准确、快速、特异性强的优点,可用于评价水中病源微生物的灭活效果。

人急性白血病淋巴细胞HSP70及HSP70 mRNA的表达研究

目的 检测急性白血病病人血淋巴细胞热休克蛋白 70 (HSP70 )及其mRNA的表达。方法 ELISA法检测HSP70 ,RT -PCR法检测HSP70mRNA。结果 化疗前急性白血病病人淋巴细胞HSP70及mRNA明显低于正常人。化疗后 ,急性白血病病人淋巴细胞HSP70及mRNA明显高于正常人。结论 HSP70与急性白血病癌细胞关系密切 。

急性温度应激对吉富品系尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)幼鱼生化指标和肝脏HSP70mRNA表达的影响

采用温度应激的方法,将尼罗罗非鱼在26℃下驯养3周后,直接放入16℃、21℃、26℃(对照)、31℃和35℃水环境中,在不同温度应激后(0—24h)对鱼体血液和肝脏生化指标及其肝脏HSP70mRNA表达量变化进行了研究。结果表明,各实验组(除对照组外)血清皮质醇水平显著上升(P<0.05)。16℃组血清葡萄糖水平在24h时显著高于其它各组(P<0.05)。血清总蛋白水平与谷丙转氨酶、谷草转氨酶、溶菌酶、碱性磷酸酶活力和肝脏HSP70mRNA表达量在0—24h内基本呈先上升后下降的变化。24h后,16℃组血清甘油三酯含量显著上升,而胆固醇含量显著下降(P<0.05)。16℃和35℃组肝脏丙二醛含量随着应激时间的延长而上升,超氧化物歧化酶和过氧化氢酶活力均呈先上升后下降的变化。温度应激可显著改变罗非鱼的非特异性免疫力、抗氧化能力以及肝脏HSP70mRNA的表达水平。在实际养殖生产中,应密切关注温度的变化,降低温度胁迫对鱼体免疫机能的影响。

大黄素、维生素C及其配伍对团头鲂生长、生理生化指标、抗病原感染以及两种HSP70s mRNA表达的影响

选取1200尾健康的团头鲂,体重为(133.44±2.11)g,随机分成4组,其中1组为对照组,投喂基础日粮(含50.3mg/kg维生素C,以L-抗坏血酸-2-多聚磷酸酯为Vc源),另外3组为试验组,投喂饲料是在基础日粮中分别添加60mg/kg大黄素、700mg/kgVc、60mg/kg大黄素+700mg/kgVc。连续投喂60d后,检测团头鲂生长、肌肉成分、血液和肝脏生化指标以及两种热休克蛋白70s(HSP70s)mRNA的表达水平,并统计团头鲂感染嗜水气单胞菌后的成活率,以综合评价大黄素、高剂量Vc及其配伍对团头鲂的作用效果。结果表明,与对照组相比,大黄素、Vc组显著提高了鱼体增重率和特定生长率,血清中总蛋白(TP)、溶菌酶(LSZ)和碱性磷酸酶(AKP)的水平,肝脏中超氧化物歧化酶(SOD)的活性和诱导型HSP70 mRNA的基础表达水平,降低了饵料系数、死亡率、血清中皮质醇(COR)、甘油三酯(TG)以及肝脏丙二醛(MDA)的含量(P<0.05);配伍组虽然血清中TP、LSZ的含量以及肝脏HSP70 mRNA水平显著升高,肝脏MDA的含量也显著降低(P<0.05),但均未表现出协同增效作用,其它指标与对照组相比差异均不显著(P>0.05)。此外,与对照组相比,大黄素组还显著提高了团头鲂肝脏过氧化氢酶(CAT)的活性(P<0.05),而Vc和配伍组的CAT活性与对照组的差异不显著(P>0.05);其它一些指标如血清中葡萄糖(GLU)、谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)、胆固醇(CHOL)、肝脏组成型HSC70mRNA的表达水平、鱼体形体指标以及肌肉组成成分等各组间差异均不显著(P>0.05)。攻毒试验也表明,大黄素和高剂量Vc组能显著提高攻毒后鱼的成活率(P<0.05),而二者配伍后效果反而下降,其相互作用的机理还有待于进一步研究。

高碳水化合物日粮对异育银鲫血浆皮质醇含量和HSP70基因mRNA表达的影响

为了探讨高碳水化合物饲料是否会引起异育银鲫(Carassius auratus gibelio)的应激反应,选用体质量为(35.60±1.11)g的异育银鲫168尾,随机分成2组,一组设为对照组(NS),投喂碳水化合物水平为35%的日粮;另一组设为高碳水化合物实验组(HS),投喂碳水化合物水平为50%的日粮,每组3个重复。在控温的循环水系统中饲养35 d和70 d后,测定异育银鲫血浆皮质醇激素含量及其肝、心脏、脾、肾中HSP70基因mRNA的表达量。结果显示,高碳水化合物实验组35 d时血浆皮质醇激素与对照组相比较显著升高(P<0.05),肝和心脏HSP70基因mRNA表达较对照组明显增强(P<0.05);70 d时血浆皮质醇激素含量升高,且70 d时高碳水化合物组肝、心脏、脾和肾HSP70基因mRNA表达与对照组相比全部增强。各组饲养70 d后,饥饿24 h后重新投喂的0 h、6 h、12 h、24 h、48 h,高碳水化合物实验组(HS)皮质醇含量在6 h、48 h显著高于对照组(P<0.05),在6 h、12 h、48 h肝HSP70基因mRNA表达与对照组相比均增强(P<0.05),说明异育银鲫对50%碳水化合物含量的饲料的耐受性比较差,鱼体产生了应激反应。结果说明,当异育银鲫血清皮质醇激素含量升高时,其肝中HSP70基因mRNA的表达量却降低,反之亦然。本研究旨在为水生动物营养应激及营养免疫的相关研究提供新的思路,为开辟鱼类应激的营养调节提供科学依据。

大鼠弥散性脑损伤hsp70mRNA表达的研究

目的 寻找脑损伤早期诊断指标。方法 复制大鼠弥漫性脑损伤模型 ,用原位杂交和图象分析技术检测不同损伤时间的大鼠脑干、丘脑、大脑皮层等部位神经元和神经胶质细胞中 hsp70 m RNA表达情况。结果 发现不同损伤时间 ,hsp70 m RNA表达的强弱不同 ;在损伤 5 m in后即可在脑干、丘脑、皮质等部位检测到 hsp70 m R-NA,6 h达高峰 ,12 h后减弱。结论 hsp70 m RNA可以作为早期脑弥散性损伤的指标 ,并可用于生前伤与死后伤的判定。

热休克对H22细胞膜HSP70蛋白及其mRNA水平的影响

研究不同热休克条件对H22小鼠肝癌细胞的HSP70mRNA及蛋白表达的影响,以期获得最佳诱导条件.分别用MTT、RT-PCR、免疫荧光和FCM检测等方法观察不同热休克条件对鼠H22细胞的生存率、胞内HSP70mRNA转录水平及胞膜HSP70蛋白表达水平的改变.结果表明,H22细胞经轻度热休克(42～43℃),细胞生存率无影响,而中重度热休克(44～45℃)则随休克时间的延长,细胞生存率明显下降;42℃热休克初期(0.5～4小时)胞内HSP70mRNA水平低于对照组,休克后期(8～12小时)mRNA水平有所恢复并逐渐增高;不同时间热休克组H22细胞胞膜HSP70表达均较对照组显著增高(P<O.005),其中非致死性热休克以12小时表达最高,42℃为59.5%,43℃为96.8%.因此适当热休克条件可引起H22细胞HSP7OmRNA的改变及膜上HSP70蛋白表达的增加,从而增加肿瘤细胞的免疫原性.

HSP70mRNA对大鼠肾脏缺血再灌注损伤保护性的研究

目的 探讨热休克蛋白70(HSP70)在缺血预处理对大鼠肾脏缺血再灌注损伤保护中的作用。 方法 根据病理组织学变化以及原位杂交法检测各组中不同灌注时间的热休克蛋白70mRNA(HSP70mRNA)的表达。 结果病理组织学肾小管评分IPC组均低于IR组(P<0.05),而IPC组和CON组之间差异无显著性(P>0.05);HSP70mRNA的表达IPC组明显高于IR组(P<0.01),并且在再灌注2h和6h时,该三者在IPC组中的表达明显高于CON组(P<0.01)。 结论 缺血预处理对大鼠肾脏缺血再灌注损伤有保护作用,其保护机制与HSP70的诱导合成增多有关。