异种HSP_(70)及固相抗体法体外扩增人γδT细胞的比较

目的 :比较异种HSP70 及固相抗体法体外扩增人γδT细胞。方法 :分别用固相抗体法、HSP70BCG 及小鼠榄香烯复合瘤苗热休克蛋白 70 肽复合物 (HSP70m 肽复合物 )体外扩增人PBMCs的γδT细胞 ,流式细胞仪检测细胞表型及亚型分布 ,RT PCR检测各亚型基因的取用。MTT检测γδT细胞的细胞毒作用。结果 :培养 14天后 ,抗体法扩增的PMBCs总数增加 30～ 4 0倍 ,γδT细胞的比率由 3.2 %提高到 86 .7% ;HSP70BCG 组PBMCs总数增加 7～ 8倍 ,γδT细胞的比率由 3.2 %提高到 71.32 % ;HSP70m 肽复合物组PBMCs总数增加 4～ 5倍 ,γδT细胞的比率由 3.2 %提高到 2 7.2 6 %。抗体及HSP70BCG 扩增的γδT细胞以表达Vγ9 Vδ2亚型为主 ,且Vδ1、Vδ2、Vδ3三种基因均得到取用 ,对Daudi具较高的杀伤活性。结论 :抗体及HSP70BCG 均能扩增出高纯度的γδT细胞 ,且具有完整的受体库 ,扩增的γδT细胞具细胞毒活性。

TLR4介导HSP70_(BCG)诱导的小鼠骨髓树突状细胞分泌IL-12

目的观察TLR4(Toll-likereceptor4)在卡介苗来源的热休克蛋白70(heatshockprotein70,HSP70BCG)冲激的小鼠骨髓来源树突状细胞(dendriticcells,DCs)的IL-12分泌的作用。方法用rmGM-CSF和rmIL-4诱导小鼠骨髓来源的DCs,在HSP70BCG冲激前加入抗TLR4抗体,用流式细胞仪检测DCs的CD40和CD86表达;用ELISA法检测DCs上清液中的IL-12和脾T细胞上清液中的IL-2浓度。结果抗TLR4抗体对CD40和CD86的表达无明显影响,但明显抑制DCs分泌IL-12并进而抑制DCs致敏的脾细胞分泌IL-2。结论HSP70BCG可通过TLR4途径诱导DCs分泌IL-12。