大鼠弥散性脑损伤hsp70mRNA表达的研究

目的 寻找脑损伤早期诊断指标。方法 复制大鼠弥漫性脑损伤模型 ,用原位杂交和图象分析技术检测不同损伤时间的大鼠脑干、丘脑、大脑皮层等部位神经元和神经胶质细胞中 hsp70 m RNA表达情况。结果 发现不同损伤时间 ,hsp70 m RNA表达的强弱不同 ;在损伤 5 m in后即可在脑干、丘脑、皮质等部位检测到 hsp70 m R-NA,6 h达高峰 ,12 h后减弱。结论 hsp70 m RNA可以作为早期脑弥散性损伤的指标 ,并可用于生前伤与死后伤的判定。

高温预处理对力竭运动后人血液白细胞HSP70mRNA及自由基代谢的影响

目的:探讨一次及多次高温预处理对递增负荷至力竭运动后人血液白细胞HSP70mRNA及自由基代谢的影响。方法:受试者随机分为运动对照组(C),一次高温预处理组(P1),多次高温预处理组(P2)。P1组进行一次性高温预处理1h(桑拿,温度46±1℃,湿度85%-90%,体重下降2%)。P2组每隔三天进行一次(共八次)高温预处理。C组采用Bruce方案在跑台上进行递增负荷运动至力竭。P1和P2组高温预处理结束,在室温下恢复24h后,在跑台上进行递增负荷运动至力竭。运动结束后记录最大心率、最大运动通气量、最大摄氧量、呼吸商等,同时记录通气阈时的通气量、最大摄氧量利用率等。C组、P1组及P2组于运动前、运动后即刻、运动后1h分别采肘静脉血。采用RT-PCR法检测受试者血液白细胞HSP70mRNA表达,用硫代巴比妥(TBA)法测定血清丙二醛(MDA)含量,用黄嘌呤氧化酶法测定血清超氧化物歧化酶(SOD)活性,采用全血乳酸分析仪测定血乳酸值。结果:C组力竭运动后即刻,人血液白细胞HSP70mRNA表达和血清MDA含量较安静时显著增加(P<0.01,P<0.05)。C组运动后1h,HSP70mRNA表达及MDA含量较运动后即刻显著减少(均P<0.05),而血清SOD活性较运动后即刻显著下降(P<0.05)。P1组在安静时、运动后即刻及运动后1h,均较C组相同时间点的HSP70mRNA显著升高(均P<0.05)。而P1组在运动后1h较C组同时间点的SOD活性显著升高(P<0.05)。P2组血液在运动后即刻和运动后1h,均较C组相同时间点的HSP70mRNA表达及血清SOD活性显著升高(均P<0.05)。而P2组在安静、运动后即刻及运动后1h较C组同时间点的MDA含量均显著减少(均P<0.05)。P2组在安静时、运动后即刻及运动后1h,均较P1组相同时间点的HSP70mRNA显著下降(均P<0.05)。P1组、P2组力竭运动中通气阈时通气量VE较C组均显著增加(P<0.05),且受试者血液白细胞HSP70mRNA表达与血清SOD/MDA比例呈显著正相关(R=0.48,P<0.05)。结论:一次及多次高温预处理可上调运动后人血液白细胞HSP70mRNA表达,抑制力竭运动所造成的氧化应激损伤。且多次高温预处理后HSP70mRNA表达降低,可能是对高温重复应激的适应性反应。

HSP70mRNA对大鼠肾脏缺血再灌注损伤保护性的研究

目的 探讨热休克蛋白70(HSP70)在缺血预处理对大鼠肾脏缺血再灌注损伤保护中的作用。 方法 根据病理组织学变化以及原位杂交法检测各组中不同灌注时间的热休克蛋白70mRNA(HSP70mRNA)的表达。 结果病理组织学肾小管评分IPC组均低于IR组(P<0.05),而IPC组和CON组之间差异无显著性(P>0.05);HSP70mRNA的表达IPC组明显高于IR组(P<0.01),并且在再灌注2h和6h时,该三者在IPC组中的表达明显高于CON组(P<0.01)。 结论 缺血预处理对大鼠肾脏缺血再灌注损伤有保护作用,其保护机制与HSP70的诱导合成增多有关。

不同强度和时程应激对大鼠海马HSP70mRNA习惯化表达的影响

目的:观察重复低强度强迫游泳应激后大鼠海马HSP70mRNA表达及习惯化表达;应激强度改变对HSP70mRNA表达的影响。方法:采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法,观察重复强迫温水游泳应激导致大鼠海马HSP70mRNA表达的变化和不同应激强度对HSP70mRNA表达的影响。结果:重复强迫温水游泳可导致HSP70mRNA表达习惯化,当再给予4℃冰水游泳应激时,可引起HSP70mRNA表达增加。结论:重复应激可以导致HSP70mRNA表达习惯化,高强度应激可以逆转低强度应激引起的习惯化效应。

固肾培元方对肾阳虚大鼠耳蜗组织HSP70mRNA表达的影响

目的观察固肾培元方对肾阳虚大鼠耳蜗组织HSP70mRNA蛋白表达的影响。方法采用肌注氢化可的松注射液的方法造成SD大鼠肾阳虚模型,用RT-PCR的方法检测耳蜗组织HSP70mRNA表达。结果固肾培元方可使肾阳虚大鼠耳蜗HSP70mRNA表达增强,与空白组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论固肾培元方可能通过调节HSP70mRNA的表达而达到改善听力、保护耳蜗结构与功能的目的。

海马不同区域缺血时损伤和hsp70mRNA表达差异

目的 :探讨缺血再灌注后鼠脑海马CA1 区选择性易损伤和迟发神经元死亡现象,以及hsp70mRNA差异表达的可能机制。方法 :观察鼠前脑缺血再灌注时 ,海马CA1 区、CA3 区及齿状回锥体细胞在组织学变化 ;以及原位杂交技术检测各区hsp70mRNA的诱导表达。结果:缺血再灌注7d后海马CA1 区锥体细胞缺失明显,而CA3 区及齿状回未见明显形态学变化。CA1 区hsp70mRNA的诱导较其余两区迟,而持续时间较长。结论:在缺血早期加强或在缺血后期抑制hsp70mRNA的诱导,有可能保护CA1 区锥体细胞。

不同+Gz暴露后大鼠脑皮层HSP70mRNA表达水平的变化

目的观察不同大小的+Gz暴露对大鼠脑皮层HSP70mRNA表达水平的影响,探讨+Gz暴露致脑损伤的机理。方法80只SD大鼠随机分为对照组,+2Gz暴露组,+6Gz暴露组,+10Gz暴露组,各组在+Gz暴露后的5 h、10 h、1 d、2d、4d处死,采用原位分子杂交方法观察大鼠脑皮层HSP70mRNA表达情况,并对实验结果进行统计分析。结果三个+Gz暴露组,HSP70mRNA表达水平表现出相同的变化趋势:在+Gz暴露后5h,HSP70mRNA表达水平开始增加,10 h达峰值,4 d时基本恢复正常,而对照组没有这一变化趋势,不同+Gz值之间的比较表明,+6Gz组HSP70mRNA表达水平最高,且分布较广泛,+10Gz组最低,且分布较局限,主要位于靠近颅底部的皮层中。结论 +Gz暴露对大鼠脑皮层HSP70mRNA表达水平有着显著的影响。

高温、CO及其联合作用对大鼠HSP70mRNA，HSP70合成影响研究

当组织细胞对热或其它刺激反应时，均被诱导增加ＨＳＰｓ合成。本研究将８只雄性大鼠随机分为四组，分别为对照组、高温组、ＣＯ组、高温＋ＣＯ组。在送氧式高温与毒物联合作用装置中染毒１ｈ，在室温下恢复１ｈ后，测定其肛温、ＨｂＣＯ。断头处死，取其肝脏分析ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ和ＨＳＰ７０。结果如下：（１）与对照组相比，高温组、高温＋ＣＯ组大鼠肛温均升高３．０℃以上，ＣＯ组及高温＋ＣＯ组大鼠ＨｂＣＯ含量均达３０％以上，这说明受热及染毒后动物的体温及ＨｂＣＯ含量均符合本实验要求。（２）结果显示，对照组仅有少量ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ，与之相比，ＣＯ组有所增加，高温组增加明显，而高温＋ＣＯ组增加更为明显，表现为协同作用。ＨＳＰ７０合成也与ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ结果一致。

热休克对不同细胞RNA和HSP70mRNA合成功能的影响

45℃加热10分钟可以杀死50％的中国白鼠卵巢（CHO）细胞和57％的Hela细胞。热休克也强烈地抑制RNA的合成，使细胞内RNA水平急剧降低。hathernBlot对HSP70mRNA的分析表明热休克并不影响细胞内已有的少量HSP70mRNA。但热休克后HSP70mRNA的合成会迅速增加。这将改变细胞的生长调控和促进受损细胞的快速增长。

砷对大鼠胚胎神经系统发育和HSP70mRNA表达的影响

应用显微解剖、原位杂交组织化学、扫描电镜等技术深入研究了三氧化二砷对大鼠胚胎的发育毒性和神经毒性及ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ表达与胚胎神经系统发育的关系。结果表明反映胚胎神经系统发育的头长，神经管未闭、体位异常和脑部形态异常发生率均与染砷剂量和作用时间呈正比关系（Ｐ＜００５）。扫描电镜观察发现大鼠胚胎脑部表皮细胞的微绒毛数量减少，回缩变短，细胞膜表面出现许多小的空洞性病理改变。原位杂交结果表明砷能激发大鼠胚胎产生应激反应，１０ｍｇ／ｋｇ砷诱导的神经管未闭发生率（３５７％）和ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ原位表达强度均明显高于４ｍｇ／ｋｇ砷的作用，证明热休克反应具有双重作用，揭示了砷的发育毒性与其剂量和作用时间是否大于细胞内ＨＳＰ７０合成量的自我调控水平有关，同时亦与损害时间发生于胚胎器官形成期的那一时段密切关联。

丁基苯酞对局灶型脑缺血再灌大鼠脑hsp70mRNA和c-fos时相表达的影响

用原位杂交法和Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹法，研究ＮＢＰ对暂时性大脑中动脉阻断大鼠不同再灌期脑内ｈｓｐ７０ｍＲＮＡ和ｃｆｏｓ的时相表达的影响。发现缺血后再灌１ｈ，在缺血侧有较明显的ｈｓｐ７０ｍＲＮＡ表达。再灌３ｈ，６ｈ和１２ｈ，表达逐渐加强。在缺血前１０ｍｉｎ和再灌即刻ｉｐＮＢＰ１０ｍｇ·ｋｇ－１和２０ｍｇ·ｋｇ－１均能明显降低再灌６ｈ和１２ｈｈｓｐ７０ｍＲＮＡ的表达。ｃｆｏｓ基因在再灌０５ｈ在缺血侧有清晰表达，再灌３ｈ达峰值，再灌６ｈ表达降低。ｉｐＮＢＰ１０ｍｇ·ｋｇ－１（缺血前１０ｍｉｎ）可明显降低再灌１ｈ和３ｈ时ｃｆｏｓ的表达。Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹法显示了同样的结果。提示ＮＢＰ降低基因表达的作用可能是通过减轻缺血再灌引起的组织损伤来实现的。

刺血疗法对实验性脑缺血大鼠相关脑区HSP70mRNA的影响

目的探讨刺血疗法对实验性脑缺血再灌流大鼠相关脑区(大脑皮层和海马区)HSP70 mRNA的影响。方法复制大鼠脑缺血再灌注模型,并取相应穴位刺血,检测HSP70 mRNA含量。结果大鼠缺血后刺血组大脑皮层和海马区HSP70 mRNA表达明显增加。结论刺血可促进脑内HSP70 mRNA表达,通过HSP70调节细胞膜钙离子通道而达到神经保护作用。

维生素C对高脂饲养小鼠肝脏Hsp70mRNA表达的影响

目的:探讨高脂喂养时小鼠肝脏组织的HSP70 mRNA表达量及维生素C对应激反应过程中HSP70 mRNA表达的影响,探索维生素C在高脂喂养条件下对肝脏生理性应激反应的保护作用。方法:将30只雄性C57BL/6小鼠随机分为三组,A组普通喂养组、B组高脂喂养组、C组高脂喂养+维生素C,观察三组小鼠的肝脏组织形态学差异,实时定量检测小鼠肝脏HSP70m RNA的表达量。结果:小鼠体重及肝脏指数在高脂喂养组显著增高,由的4.42%上升至8.76%,而维生素C的加入可以明显削弱这一影响,肝脏指数为5.5%,同时高脂喂养小鼠肝脏的HSP70mRNA的相对表达量为正常小鼠的3倍左右,而维生素C的加入可将这一比例降至2倍,组间两两比较有统计学差异(P<0.05)。结论:维生素C可以有效降低高脂喂养小鼠肝脏HSP70mRNA表达,并可降低高脂喂养对肝脏造成的应激损伤,提示我们维生素C减缓高脂饮食对小鼠肝脏的损伤与机体本身的应激反应有关,但其作用机制还有待进一步研究。

针刺对急性高血压脑出血大鼠HSP_(70)mRNA表达的调整作用

目的 :探索针刺对急性高血压脑出血治疗作用的分子机制。方法 :采用分子生物学手段 ,动态观察针刺对急性高血压脑出血大鼠脑组织HSP70 mRNA表达的影响。结果 :针刺能促进HSP70 mRNA在高血压脑出血大鼠脑组织中表达。结论 :针刺促进高血压脑出血大鼠脑组织HSP70 mRNA表达是针刺治疗急性高血压脑出血的重要机制。

流行性出血热尸检组织中热休克蛋白70mRNA的定位及分布

应用核酸原位分子杂交技术研究了国内不同地区３０例流行性出血热患者尸检组织中病毒ＲＮＡ及ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ细胞内定位，同时观察了汉坦病毒感染的ＶｅｒｏＥ６细胞中ＨＳＰ７０的表达情况。结果表明，热休克蛋白７０ｍＲＮＡ在多数组织中均可检测到，分布与病毒ＲＮＡ一致，并且与组织的病理损害有关；体外实验的结果也表明在出血热病毒感染的细胞中有ＨＳＰ７０的高表达。提示热休克蛋白与汉坦病毒的致病以及流行性出血热的发病机理有关。

中药复方应激康对热应激肉鸡HSP70m RNA表达影响的研究

为了研究复方中药对热应激肉鸡肝脏HSP70mRNA表达的调控效果;试验选取120只18日龄AA+肉仔鸡,随机分为4组,即复方中药组、维生素组、纯中药组和高温对照组进行试验,试验后每组迅速宰杀3只试验鸡,取肝脏组织进行HSP70mRNA表达的检测。结果表明:高温应激后,复方中药冲剂组和纯中药冲剂组鸡肝脏中HSP70 mRNA表达显著增加,分别比高温对照组、维生素组高2.98倍、3.28倍和4.66倍、5.13倍,说明本试验复方中药可通过上调HSP70 mRNA表达,提高机体热耐受水平,达到保护细胞作用。

丙泊酚诱导缺氧鼠脑神经元HSP70的表达

目的:探讨丙泊酚的脑保护机制。方法:培养12d的胎鼠大脑神经元,随机分为正常对照组、缺氧组和丙泊酚组。丙泊酚组于缺氧前1h换入含有14μmol/L和56μmol/L丙泊酚的培养液,随后缺氧30min。于缺氧后1,3,6,8,24,48h分别用原位杂交法和免疫组化法观察3组Hsp70mRNA、Hsc70mRNA及Hsp70的表达。结果:(1)缺氧30min可诱导神经元Hsp70mRNA、Hsc70mRNA和Hsp70表达,且表达高峰分别为24,24和48h;(2)14μmol/L和56μmol/L丙泊酚可诱导缺氧鼠脑神经元Hsp70mRNA和Hsc70mRNA表达高峰提前至8h和6h,56μmol/L丙泊酚可使缺氧鼠脑神经元Hsp70表达高峰提前至24h。结论:丙泊酚可从转录和翻译两个水平促进缺氧鼠脑神经元HSP70的表达,产生延迟神经保护作用。

异丙酚对缺氧复氧鼠脑神经元NOS活性和HSP70家族表达的影响

目的：通过观察不同浓度异丙酚对原代培养胎鼠大脑神经元缺氧复氧过程的影响，探讨异丙酚的部分脑保护机制。方法：培养12天的胎鼠大脑神经元，随机分为四组：Ⅰ组正常对照组；Ⅱ组缺氧复氧组；Ⅲ组14μmol／L异丙酚组；Ⅳ组56μmol／L异丙酚组。Ⅲ组和Ⅳ组于缺氧前分别换入含有14μmol/L和56μmol／L异丙酚的培养液，随后缺氧30min。四组于缺氧后1h、2h、4h、6h和24h用分光光度法分别比较各组神经元NOS(一氧化氮合成酶)活性，同时四组于缺氧后1h、3h、6h、8h、24h、48h和72h分别用原位杂交法和免疫组化法观察Hsp70(热休克蛋白70)mRNA、Hsc70(热休克同源蛋白70)mRNA及Hsp70的表达。结果：①本研究的缺氧复氧过程可使神经元NOS活性增强，并可诱导Hsp70 mRNA、Hsc70mRNA和Hsp70表达，且表达高峰分别为24h、24h和48h；②在14μmol／L和56μmol／L异丙酚组，缺氧复氧鼠脑神经元NOS活性在复氧后4h内降低；③14μmol／L和56μmol／L异丙酚组的缺氧复氧鼠脑神经元Hsp70mRNA和Hsc70mRNA的表达高峰分别提前至8h和6h，而只有56μmol／L异丙酚组的缺氧复氧鼠脑神经元Hsp70的表达高峰才提前至24h。结论：异丙酚可抑制缺氧复氧引发的神经元NOS活性增强，同时异丙酚可从转录和翻译两个水平上促进鼠脑神经元热休克蛋白70家族的表达。

热应激奶牛外周血淋巴细胞凋亡相关基因表达及血液学分析

用半定量RT- PCR分析日平均气温分别为37 .5°C (高温)、26. 5°C (临界高温) 和5 5°C (对照) 条件下奶牛外周血中HSP70mRNA、HSF1mRNA、Bcl 2mRNA和Bax αmRNA 基因丰度变化规律; 用流式细胞仪分析上述条件下外周血淋巴细胞所处的分裂时期(G0/G1 期, S期及G2/M期) 及淋巴细胞的凋亡率; 用全血自动分析仪分析外周血的血常规。研究发现: (1) 在37. 5°C高温条件下, HSP70mRNA 基因表达水平极显著高于26 .5°C和5 5°C条件下的表达量, 表达水平随温度降低呈下降趋势; HSF1mRNA 表达水平与HSP70mRNA 相反, 随温度降低升高, 5 5°C最高, 相对于其它两个温度条件差异显著; Bcl 2mRNA/Bax αmRNA 在26 5°C时最低, 相对于其它两个温度条件该基因的丰度差异显著; (2) 淋巴细胞凋亡率在26 5°C达到最高峰(10 60%),5 5°C下降至最低(2 7%), 差异显著; (3) 白细胞计数(White blood cell, WBC) (14 75×109/L) 和红细胞计数(Red blood cell, RBC) ( 3 .85×1012/L) 在高温37. 5°C时最低, 随温度下降而逐步上升。RBC 和血红蛋白(Hemoglobin, HGB) 在37. 5°C最低, 随温度降低逐步升高, 相对于其它两个温度差异显著; 红细胞平均血红蛋白含量(Mean corpuscular hemoglobin, MCH) 在26. 5°C最高(18 .

人急性白血病淋巴细胞HSP70及HSP70 mRNA的表达研究

目的 检测急性白血病病人血淋巴细胞热休克蛋白 70 (HSP70 )及其mRNA的表达。方法 ELISA法检测HSP70 ,RT -PCR法检测HSP70mRNA。结果 化疗前急性白血病病人淋巴细胞HSP70及mRNA明显低于正常人。化疗后 ,急性白血病病人淋巴细胞HSP70及mRNA明显高于正常人。结论 HSP70与急性白血病癌细胞关系密切 。