长期大负荷训练大鼠不同类型骨骼肌HSP72表达

目的:训练和修复失衡导致了过度训练,近来研究表明,热休克蛋白72(HSP72)可能是较适合的过度训练监测指标,鉴此,本研究利用过度训练动物模型对其可行性进行初步探讨。方法:36只雄性2月龄SD大鼠被随机分成4组:对照组(n=4)和3个力竭性游泳训练组(n=8)。训练组大鼠在第1、2周适应性游泳30min至2h,在第3周至第8周进行力竭性游泳训练。分别取第6、7、8周血样,测定血红蛋白、血清睾酮、血清皮质醇和血清肌酸激酶的浓度;取同侧比目鱼肌、腓肠肌红肌和腓肠肌白肌测定HSP72蛋白含量。结果:(1)过度训练常规指标的变化:4至6周力竭性游泳训练导致大鼠运动能力下降,安静时血红蛋白、血清睾酮和皮质醇浓度下降,肌酸激酶浓度增加,表明过度训练动物模型建立。(2)HSP72表达变化:与对照组HSP72表达(100%)相比,训练组第6、7、8周比目鱼肌HSP72表达分别减少2.6%、6.6%、33%;腓肠肌红肌HSP72表达显著增加(P<0.05),分别较对照组增加133%、214%、157%;腓肠肌白肌HSP72表达显著增加(P<0.001),分别较对照组增加410%、790%、1030%。三种类型骨骼肌HSP72表达的净增量均在第6周最高,随后逐周下降。HSP72表达变化早于激素浓度的变化。结论:长期超负荷训练导致的骨骼肌HSP72表达变化早于过度训练综合征。应激激素变化滞后于HSP72表达变化,提示骨骼肌HSP72表达变化可能关联着过度训练的外周机制,可以考虑骨骼肌HSP72作为过度训练的监测指标。

冷暴露仔猪PBMC中Hsp72与血浆TNF-α、IL-6的变化规律

为探讨急性冷应激对仔猪免疫系统的影响及机制,本试验将18头仔猪随机分成常温对照组、冷暴露组和冷暴露并糖皮质激素受体(GRs)阻断组。常温组在18℃～20℃下而冷暴露各组在4℃～8℃环境下分栏饲养。试验期持续12h,在冷暴露开始后六个时间点对18头仔猪采血并分离血浆和外周血单个核细胞(PBMC),检测Hsp72和TNF-α、IL-6的水平。实验结果显示:冷暴露组IL-6水平在冷暴露6h时比开始前有显著升高(P<0.01),TNF-α水平在冷暴露1h时显著下降(P<0.01),3h和6h又显著升高(P<0.01),且IL-6与TNF-α呈中等相关(r=0.4198);GRs阻断组IL-6水平在冷暴露6h时显著升高,TNF-α水平在各时间点差异不显著;冷暴露各组Hsp72在冷暴露1h,3h,6h,9h,12h时均显著升高(P<0.01),且受体阻断组TNF-α与Hsp72呈中等强度负相关(r=-0.6444)。这些结果表明:急性冷暴露能使血浆IL-6水平升高和PBMC中Hsp72的表达增强,而使TNF-α的水平降低,且阻断糖皮质激素对它们之间的相关性有一定影响。

运动诱导的大鼠心肌细胞HSP72 mRNA表达与血清心肌酶活性和心肌力学指标的变化

目的 :探讨运动诱导表达的热休克蛋白 72 (HSP72 )mRNA与大鼠血清心肌酶活性和心肌力学指标之间的关系。方法 :将 36只SD大鼠随机平均分为安静对照组 (C)、1周运动组 (T1 )、2周运动组 (T2 )和 3周运动组 (T3)。安静对照组不运动 ,T1组、T2组和T3组分别以 75 %VO2 max强度进行 1周、2周、3周跑台运动 ,每周训练 6天 ,每天 1小时。在末次运动结束后 2 4小时分别以RT-PCR法检测大鼠心肌细胞HSP72mRNA的表达 ,以MPA -IV型多道生物信号分析系统同步记录心肌力学参数 ,以酶法检测血清心肌酶活性。结果 :(1 )T1和T2组心肌细胞HSP72mRNA表达明显高于C组和T3组。 (2 )T1组大鼠血清CK、CK -MB和AST活性较C组明显升高 ;且随运动周期的延长 ,其均值逐渐降低。 (3)运动 1周后LVSP、dp/dtmax和dp/dtmin较C组均有下降 ,而LVEDP也稍减少 ,但无统计学意义 (P >0 .0 5 ) ;随运动周期的延长 ,其均值逐渐恢复至对照组水平。结果提示运动后心肌细胞的保护作用可能与心肌细胞HSP72mRNA表达有内在关系。

防暑汤对士兵高温训练前后外周血中HSP72表达及血液生化的影响

目的研究防暑汤对高温训练前后士兵外周血中淋巴细胞热休克蛋白72(HSP72)的表达和血液生化的影响,为防暑药物增强士兵热耐力、预防中暑提供实验依据。方法选取某部普通士兵120人,随机分为两组,每组60人。未饮用防暑汤者为对照组,饮用防暑汤者为实验组。进行高温训练任务的1周内,实验组士兵每日饮用防暑汤300 mL,饮用前及1周后抽取各组外周静脉血,分别进行淋巴细胞HSP72含量、血液常规及生化指标测定。结果饮用前后两组血液常规及生化检测值均在成年男子的正常值范围之内。饮用前,实验组HSP72的表达与对照组比较无显著差异(P>0.05);饮用后,实验组HSP72表达显著高于训练前及对照组(P<0.05);HSP72表达的增长值,实验组显著高于对照组(P<0.05);部分血液常规及生化指标存在显著差异。结论防暑汤能提高士兵受热刺激后表达HSP72的能力,从而起到增强士兵热耐力、预防中暑的作用。

含人HSP72重组腺病毒制备及其在肠上皮细胞中的表达

目的:构建并鉴定含人全长热休克蛋白72(HSP72)基因的重组腺病毒,为严重创伤后缺血缺氧损伤的防治提供基因治疗措施.方法:用同源重组方法构建含人全长HSP72目的基因的复制缺陷型腺病毒载体(AdCMV-HSP72),并加以鉴定、扩增,以制取高滴度AdCMV-HSP72转染液,体外转染肠上皮细胞株IEC-6,检测目的基因表达.结果:将构建的重组腺病毒载体AdCMV-HSP72转染肠上皮细胞并表达48h后,RT-PCR检测转染组显示特异性扩增的532bpHSP72目的基因片段.对照组(转染空腺病毒载体组)扩增结果为阴性.蛋白印迹结果显示AdCMV-HSP72转染组HSP72蛋白的表达明显增高.结论:腺病毒载体可较高效率介导HSP72在肠上皮细胞的表达.所获AdCMV-HSP72重组腺病毒可进一步用于基因治疗研究.

运动诱导的大鼠心肌细胞HSP72 mRNA表达与超微结构改变

目的 :研究运动诱导的大鼠心肌细胞HSP72mRNA表达与大鼠心肌细胞超微结构改变的可能关系。方法 :将 36只SD大鼠随机分为安静对照组 (C)、1周运动组 (T1)、2周运动组 (T2 )和3周运动组 (T3)。安静对照组不运动 ,T1组、T2组和T3组以 75 %VO2 max强度进行跑台运动 ,分别运动 1周、2周、3周 ,每周运动 6天 ,每天 1小时。在末次运动结束后 2 4小时以RT -PCR法检测大鼠心肌细胞热休克蛋白 72mRNA的表达 ;以常规电镜检测观察大鼠心肌细胞超微结构的变化。结果 :①T1和T2组HSP72mRNA表达明显多于C组和T3组。②以C组心肌细胞电镜表现为正常 ,则各组大鼠电镜表现的心肌损伤程度为T1组 >T2组 >T3组。结果提示 :运动不同时期造成心肌损伤程度不同的原因可能与运动后心肌细胞HSP72mRNA表达量不同有关。HSP72mRNA表达可能为运动后心肌保护的分子机理。

稳定转染HSP72奶牛乳腺上皮细胞系建立与表达鉴定

为了构建HSP72慢病毒表达载体,建立稳定表达HSP72的牛乳腺上皮细胞系。以牛HSP72基因序列为模板,设计并合成引物,PCR扩增目的基因,连接到慢病毒表达质粒中,用包装获得的慢病毒感染牛乳腺上皮细胞,经一定浓度的嘌呤霉素筛选,Hochest33342法对细胞核定位,倒置荧光显微镜下观察转染效率,用免疫组化和Western Blot方法验证感染细胞是否稳定表达HSP72。结果显示,携带HSP72基因的慢病毒滴度约为1. 0×109TU/m L;确定嘌呤霉素的最佳筛选浓度为2μg/m L;牛HSP72慢病毒感染细胞表达HSP72,感染的奶牛乳腺上皮细胞在倒置荧光显微镜下可看到绿色荧光,转染效率可达90%以上;免疫组化结果表明,正常细胞和空载体感染细胞,HSP72呈现低表达,转染携带HSP72目的基因载体细胞,HSP72高表达,呈现颜色较深的棕色; Western Blot方法检测证实与正常转染细胞相比,慢病毒空载体转染的奶牛乳腺上皮细胞HSP72表达稍有降低,但无统计学差异,而携带HSP72基因的慢病毒载体转染的细胞HSP72呈现高表达,且差异极显著(P <0. 01),与慢病毒空载体转染的奶牛乳腺上皮细胞相比,携带HSP72基因的慢病毒载体转染的细胞HSP72呈现高表达,且差异极显著(P <0. 01)。成功建立稳定表达HSP72的牛乳腺上皮细胞系,可为研究奶牛乳腺炎分子调控机制以及抗性分子药物筛选提供新的理论依据和工作基础。

红景天苷对大鼠肾脏缺血再灌注损伤后HSP72表达水平及肾功能影响的实验研究

目的探讨不同浓度的红景天苷对大鼠肾脏缺血再灌注损伤的保护作用以及HSP72表达水平的关系。方法将48只健康sD大鼠随机分为6组，分别为红景天苷5mg／kg组、10mg／kg组、20mg／kg组、40mg／kg组、假手术组和空白对照组。通过切除有肾，夹闭左肾蒂45min，建立肾脏缺血再灌注模型。分别检测大鼠血清肌酐（Scr）、尿素氮（Bun）、肾组织常规病理及肾组织中HSP72的表达。结果与红景天苷5mg／kg组、10mg／kg组、40mg／kg组相比，红景天苷20mg／kg组Scr水平、Bun水平明显下降（P〈0．01），病理损伤明显减轻，组织中HSP72表达也明显减少。与空白对照组比较，红景天苷20mg／kg组Scr水平、Bun水平略有上升，病理损伤较轻。结论应用红景天苷后，大鼠肾脏缺血再灌注损伤明屁减少，其机制与增强肾脏抗氧化能力，减轻肾脏组织炎性细胞浸润和抑制肾组织HSP72表达有关，其中20mg／kg浓度的红景天苷保护效果最佳。

新辅助化疗对骨肉瘤患者外周血淋巴细胞HSP72表达的影响及意义

目的观察新辅助化疗对骨肉瘤患者外周血淋巴细胞热休克蛋白72(HSP72)表达的变化及临床意义。方法收集9例骨肉瘤患者化疗前后外周血为实验组,同时以11例健康献血者为对照组。应用RT-PCR和Western blot技术检测骨肉瘤患者化疗前后外周血淋巴细胞HSP72 mRNA和蛋白的表达,并同时检测对照组外周血淋巴细胞HSP72 mRNA和蛋白的表达。结果实验组外周血淋巴细胞HSP72 mRNA和蛋白的表达明显高于对照组(P<0.01)。实验组化疗前HSP72 mRNA和蛋白的表达显著高于化疗后(P<0.05)。结论 HSP72在骨肉瘤患者化疗中的变化可作为评价骨肉瘤对化疗药物敏感性的一个指标。

热应激对小鼠囊胚HSP72表达的影响

将体外培养的小鼠囊胚分别施以40℃和38℃热休克处理1 h,2 h和3 h,然后在37℃条件下分别恢复3 h,2 h和1 h后,利用Western blot技术检测小鼠囊胚HSP72的表达,以明确热应激对小鼠囊胚HSP72表达的影响。结果显示,38℃和40℃热应激组均有HSP72的表达,38℃组2 h达到最高水平,与对照组相比差异显著(P<0.05),然后表达量随热应激时间延长而降低;40℃组3 h达到最高水平,与对照组相比差异不显著(P>0.05)。结果表明,轻度、短时间热应激既可使小鼠囊胚HSP72表达。

军事训练致劳力性热射病对血清HSP72水平的影响

目的探讨军事训练致劳力性热射病(exertional heat stroke,EHS)对血清HSP72水平的影响。方法回顾性分析2012-01至2016-06共14例EHS患者HSP72水平,并与新兵、老兵和一般中暑患者比较。结果 EHS患者组血清HSP72水平(132.34±15.38)ng/ml,明显高于一般中暑患者组(62.14±9.18)ng/ml,老兵组(41.85±5.34)ng/ml和新兵组(35.52±5.16)ng/ml,差异有统计学意义,且EHS患者HSP72水平与其APACHEⅡ评分呈正相关(r=0.631,P=0.016)。结论 EHS患者血清HSP72水平检测有助于EHS诊断与病情监测。

缺血性脑损伤中HSP72对神经元保护作用的实验研究

目的探讨缺血性脑损伤中HSP72对大鼠神经元的保护作用及其分子机制。方法将SD大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注对照组、热休克处理组、HSP72反义寡核苷酸组及溶剂组。采用焦油紫染色、免疫印迹检测大鼠缺血再灌注后海马神经元损伤和脑组织AKT、Bad(Ser136)的磷酸化情况。结果热休克处理组与缺血再灌注对照组、HSP72反义寡核苷酸组和溶剂组相比海马神经元损伤减轻,脑组织AKT和Bad(Ser136)磷酸化升高(P<0.05)。结论HSP72可能通过升高脑组织中AKT和Bad(Ser136)的磷酸化程度起到海马神经元保护作用。

牦牛HSP72基因的结构及生物信息学分析

克隆测序了牦牛HSP72基因的全序列,并分析了该基因的结构,以及HSP72蛋白的氨基酸组成、等电点、亚细胞定位、跨膜区、疏水/亲水区、结构域、特征位点、密码子偏好性、二级结构等蛋白质性质。结果表明:牦牛的HSP72基因序列全长为1926bp,无内含子,共编码641个氨基酸;牦牛的HSP72基因和HSP72蛋白与普通牛、猪、人相比存在着一定差异,这可能是导致他们之间对温度适应性差异的主要原因之一。

热应激对小鼠囊胚中HSP72表达及对孵出率影响的研究

将体外培养的小鼠囊胚分别施以40℃和38℃热休克处理1h、2h和3h,然后在37℃条件下分别恢复3h、2h和1h后,利用Westernblot技术检测小鼠囊胚HSP72的表达,同时观察囊胚的热敏性,以明确热应激对小鼠囊胚中HSP72表达及对孵出率影响。结果显示,38℃及40℃热应激组均有HSP72的表达,38℃组2h达到最高水平,与对照组相比差异显著(P<0.05),然后表达量随热应激时间延长而降低;40℃组3h达到最高水平,与对照组相比差异不显著(P>0.05)。38℃及40℃热应激组囊胚孵出率均随着热应激时间的延长而降低。结果表明,轻度、短时间热应激既可使小鼠囊胚HSP72表达;热应激能够降低小鼠囊胚的孵出率。

热应激 脂多糖 谷氨酰胺 诱导牛睾丸支持细胞HSP72时效表达

为了探讨温和热应激、脂多糖(LPS)和谷氨酰胺(Gln)诱导牛睾丸支持细胞(b SCs)HSP72的时效表达规律,本试验将传至第3代b SCs分成热应激、LPS和Gln处理组,用CCK-8试剂盒检测细胞活性,用RT-PCR和Western-Blot方法分别检测处理后0、2、4、6、8、12、14h和16 h时细胞内HSP72 mRNA和蛋白表达。结果显示,3种方式均能诱导HSP72表达,且HSP72蛋白分别在热应激、Gln和LPS预处理后2、4h和12 h时表达量最高。结果表明,热应激或Gln均比LPS诱导牛睾丸支持细胞HSP72表达的时间早,提示可考虑用Gln减少由LPS诱导的细胞损伤。

热激蛋白Hsp72促进热休克下HuR对p21^(CIP1)的调控作用

RNA结合蛋白Hu R可以结合并调控靶标m RNA稳定性与翻译,但影响Hu R结合活性的因素有待探讨。本研究从蛋白质-蛋白质相互作用角度对影响Hu R与RNA结合活性的因素做了探讨。结果发现,热激蛋白Hsp72在细胞浆与Hu R相互作用并促进Hu R与p21(KIP1)3'UTR(3'非翻译区)的结合;热休克下Hsp72总蛋白质及细胞浆蛋白质水平上调、但Hu R总蛋白质及细胞浆蛋白质水平不变;热休克下Hu R与p21 3'UTR的相互作用加强、p21蛋白及m RNA水平上调。上述结果提示,Hsp72可通过与Hu R相互作用促进后者与p21 m RNA的结合,进而加强热休克下Hu R对p21的表达的促进作用。这些结果为进一步解析Hu R的生物学作用机制提供了实验依据。

大鼠实验性蛛网膜下腔出血后脑内HSP72表达增加

目的研究大鼠蛛网膜下腔出血后HSP72在大脑皮质和海马区的表达。方法 36只Wistar大鼠随机分为假手术组(SO)、枕大池1次注血组(SI)及2次注血组(DI)分别制作蛛网膜下腔出血模型。制备模型成功后取脑行免疫组化染色及Western blot检测海马和大脑皮质区HSP72的表达。结果海马及大脑皮质有HSP72的表达;与假手术组相比,注血组海马及大脑皮质区HSP72的表达显著增加(SI:0.63±0.17,0.62±0.25;DI:0.81±0.25,0.83±0.34;P<0.05)。结论蛛网膜下腔出血可造成大鼠早期脑损伤,并引起海马及脑皮质HSP72的过度表达。

牦牛HSP72蛋白的生物信息学分析

利用一系列的生物信息学软件分析了牦牛HSP72蛋白的氨基酸组成、等电点、亚细胞定位、跨膜区、疏水/亲水区、结构域、特征位点、二级结构等蛋白质性质,并同普通牛、猪和人的蛋白作了对比。结果表明:牦牛的HSP72蛋白共有641个氨基酸;在所分析的指标中,牦牛的HSP72蛋白与普通牛、猪、人相比存在着一定差异,这些差异是否与它们的分布和适应性有关,还有待于进一步研究。

肾脏缺血再灌注损伤标志Hsp72和NF-B的研究进展

急性肾功能损害（ARF）是一种常见的内科疾病,它的发病率在普通的住院患者中达5%,而在重症监护患者中可高达30%～50%。肾缺血再灌注损伤（RIRI）是ARF中一个主要原因[1];此外,其还是改变移植物存活和患者生存率的决定因素之一。热休克蛋白72（Hsp72）作为细胞内型的应激蛋白,被发现在RIRI中起着重要的调节作用[2]。

重症多发性创伤患者Mb、HSP72及PCT水平与预后的关系

目的 探讨重症多发性创伤患者肌红蛋白(Mb)、热休克蛋白72(HSP72)及降钙素远原(PCT)水平与预后的关系。方法 选取2019年9月至2020年9月商丘市第一人民医院收治的157例重症多发性创伤患者作为观察组,选取同期本院157例健康体检者作为对照组,比较两组Mb、HSP72及PCT。对观察组随访3个月,记录死亡率、生存率。分析不同预后状态的患者Mb、HSP72及PCT水平,绘制受试者工作特征曲线(ROC),评估联合Mb、HSP72及PCT检测对重症多发性创伤患者预后死亡的预测价值。结果 观察组Mb、PCT水平高于对照组,HSP72低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。146例患者中,生存108例(73.97%),死亡38例(26.03%)。生存组Mb、PCT低于死亡组,HSP72高于死亡组,差异均有统计学意义(P<0.05)。Mb及PCT异常升高、HSP72异常降低是影响重症多发性创伤患者预后死亡的危险因素(P<0.05)。联合Mb、HSP72及PCT检测预测重症多发性创伤患者预后死亡灵敏度(0.911)、特异度(0.927)、AUC(0.956)均高于单一指标检测(P<0.05)。结论 临床对重症多发性创伤患者行Mb+HSP72+PCT三指标联合检测有助于评估患者预后。