叔丁醇暴露对HSPA1L敲除型雄性小鼠甲状腺的影响

以HSPA1L基因敲除(HSPA1L^(-/-))雄性小鼠为研究对象,观察甲状腺组织形态和细胞凋亡情况,分析Caspase-3蛋白表达,探讨叔丁醇(TBA)的毒性以及HSPA1L在此过程中的作用机制.结果表明,HSPA1L^(-/-)小鼠甲状腺的重量随TBA剂量增加而显著降低(P<0.05);甲状腺上皮滤泡细胞随TBA剂量增加而增大,高剂量组甲状腺滤泡甚至发生融合现象;甲状腺细胞凋亡增强,甲状腺组织Caspase-3表达量极显著增加(P<0.01).HSPA1L^(-/-)小鼠对TBA暴露更为敏感,TBA造成的伤害显著增强,提示HSPA1L可能通过负调控Caspase-3表达,抑制细胞凋亡,维持细胞稳态.

HSPA5通过抑制铁死亡调控宫颈癌细胞的增殖和凋亡

目的:探讨热休克蛋白70蛋白5(heat shock 70 kDa protein 5,HSPA5)通过铁死亡对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白质印迹法(Western Blot,WB)检测HSPA5和谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)在宫颈癌和癌旁组织中的表达情况,通过TCGA数据库分析所有宫颈鳞状细胞癌和宫颈内膜腺癌(CESC)中HSPA5与患者总生存率间的相关性。体外培养人宫颈癌HeLa和SiHa细胞系,分别感染shHSPA5和shCtrl慢病毒,构建稳定的宫颈癌HSPA5敲低株,用qRT-PCR和WB检测HSPA5敲低之后铁死亡相关蛋白GPX4的表达情况。使用铁死亡抑制剂Ferrostatin-1(Fer-1)或激活剂Erastin处理细胞后,采用CCK-8和EdU检测细胞增殖情况;乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测LDH含量;还原型谷胱甘肽(GSH)试剂盒和丙二醛(MDA)试剂盒分别测定GSH和MDA含量;流式细胞术检测细胞凋亡及活性氧(ROS)的情况。结果:与癌旁组织相比,宫颈癌组织中HSPA5与GPX4的表达显著升高,HSPA5高表达与患者预后不良有关;在HeLa和SiHa细胞中敲低HSPA5能够抑制细胞的增殖和促进细胞凋亡;同时细胞内ROS、MDA和LDH的水平上调;HSPA5敲低后GPX4的mRNA和蛋白表达水平同时降低,此外细胞内GSH的含量降低;铁死亡抑制剂Fer-1逆转了HSPA5敲低导致的ROS和LDH的含量升高并抑制细胞凋亡;铁死亡激活剂Erastin和HSPA5敲低联合增加了细胞凋亡并抑制细胞增殖。结论:HSPA5在宫颈癌组织中表达上调,通过敲低HSPA5可激活铁死亡从而抑制宫颈癌细胞的增殖和促进细胞凋亡。

人参皂苷Rg1介导HSPA8自噬途径改善帕金森小鼠黑质神经元损伤

目的探讨人参皂苷Rg1对帕金森病(PD)小鼠的神经保护作用及对热休克蛋白A8(HSPA8)的影响。方法48只C57BL/6J小鼠随机分为对照组(NC组)、PD组、Rg1-1组(1 mg/kg Rg1)、Rg1-5组(5 mg/kg Rg1)、Rg1-10组(10 mg/kg Rg1)、Rg1-20组(20 mg/kg Rg1)、Rg1-40组(40 mg/kg Rg1)、Rg1-40+VER-155008组(40 mg/kg Rg1+HSPA8抑制剂),每组各6只。除NC组外,其他小鼠腹腔注射1-甲基-4苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)制备PD模型,随后药物干预10 d,干预同时Rg1-40+VER-155008组小鼠腹腔VER-155008。行为学实验评价小鼠行为运动能力,Nissl染色和Tunel染色检测黑质神经元细胞的尼氏小体数量生成和凋亡情况,免疫组化检测小鼠黑质内α-突触核蛋白(α-Synuclein)、HSPA8表达,免疫荧光测定小鼠黑质内络氨酸氢化酶(TH)、自噬蛋白LC3、p62表达,Western blot检测小鼠黑质内α-Synuclein、HSPA8、TH、LC3-I/II、p62、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、半胱氨酸肽酶3(Caspase 3)、BCL2关联X蛋白(BAX)表达量。结果Rg1干预后,PD小鼠行为运动能力提高,神经细胞的尼氏小体数量增加、凋亡减少,黑质内HSPA8、TH、LC3-II/LC3-I、Bcl-2蛋白表达增加,α-Synuclein、p62、caspase-3、Bax蛋白表达降低,以Rg1-40组效果最为显著(P<0.05)。而与Rg1-40组比较,Rg1-40+VER-155008组小鼠的行为运动改善程度降低,神经元细胞尼氏小图数量减少、凋亡增加,TH、LC3-II/LC3-I、Bcl-2蛋白表达减少,而α-Synuclein、p62、caspase-3、Bax蛋白表达增加(P<0.05)。结论Rg1可介导HSPA8增强神经元细胞自噬活性从而对PD小鼠具有神经保护作用。

HSPA5 CD44v6在子宫内膜癌的表达及临床价值

目的探讨热休克蛋白5(HSPA5)和CD44v6在子宫内膜癌中的表达及临床价值。方法选取2018年1月至2020年12月上海市长宁区妇幼保健院手术切除的93例子宫内膜癌标本,用免疫组织化学方法作HSPA5和CD44v6的表达检测,结合其临床病理指标,进行统计学分析。结果在93例子宫内膜癌中,HSPA5、CD44v6表达的阳性率分别为71.0%(66/93)和65.6%(61/93)。HSPA5在子宫内膜癌的不同病理分期、是否绝经及肿瘤浸润子宫壁深度不同(浸润子宫壁深度<1/2组;浸润子宫壁深度≥1/2组)的表达结果差异无统计学意义(均为P>0.05);而HSPA5在子宫内膜癌的不同组织学类型、淋巴结有无转移组的表达结果差异均有统计学意义(P<0.01,P<0.005)。CD44v6在子宫内膜癌的不同临床分期、是否绝经及不同组织学类型的表达结果差异无统计学意义(均为P>0.05);而CD44v6在肿瘤浸润子宫壁不同深度(浸润子宫壁深度<1/2组;浸润子宫壁深度≥1/2组)、淋巴结有无转移组的表达结果差异均有统计学意义(P<0.001,P<0.005)。结论HSPA5、CD44v6在子宫内膜癌中存在高表达,二者与子宫内膜癌的生物学行为有关,在子宫内膜癌的发生、发展中有着重要的调控作用。同步进行HSPA5、CD44v6在子宫内膜癌的表达检测,在判断其预后和指导其临床治疗上有重要价值。

Mortalin/Hspa9 involvement and therapeutic perspective in Parkinson's disease

By controlling the proper folding of proteins imported into mitochondria and ensuring crosstalk between the reticulum and mitochondria to modulate intra cellular calcium fluxes.Mortalin is a chaperone protein that plays crucial roles in neuronal homeostasis and activity.Howeve r,its expression and stability are strongly modified in response to cellular stresses,in particular upon alte red oxidative conditions during neurodegeneration.Here,we report and discuss the abundant literature that has highlighted its contribution to the pathophysiology of Parkinson's disease,as well as its therapeutic and prognostic potential in this still incurable pathology.

HSPA9基因在肿瘤中表达和功能的研究进展

HSPA9基因在多种肿瘤中高表达,被证实与肿瘤细胞的增殖和侵袭性高度相关。近年来,针对HSPA9基因在多种肿瘤中的表达及其涉及的下游通路的研究逐渐增多,并且相关联的临床特征分析均提示HSPA9的表达可作为独立的临床预测因子。本文对HSPA9基因在肿瘤中表达和功能的研究成果作简要综述,旨在为HSPA9基因未来作为靶向治疗靶点提供理论基础。

TD-SCDMA的长期演进与HSPA+增强技术

为了提高TD-SCDMA系统的传输速率,向国际电联IMT-Advanced所提技术指标迈进,TD-SCDMA的演进策略提上了研究议程。鉴于TD-SCDMA的短期演进HSPA(包括HSDPA和HSUPA)无法满足IMT-Advanced的要求,提出了HSPA+和LTE的概念。本文首先介绍了TD-SCDMA未来演进和发展的趋势,包括TD-SCDMA的增强、短期演进、中长期演进以及基于IMT-Advanced的4G等。然后重点分析了HSPA+的关键技术和协议架构等,最后对LTE的帧结构和多址方式进行了分析,提出了演进时的关键点和对策。

牦牛应激型HSPA1A和HSPA2基因的克隆及序列分析

为了解牦牛应激型HSPA1A和HSPA2基因的特点,根据GenBank已公布的牛应激型HSPA1A和HSPA2基因序列设计4对引物,每个基因分两段扩增,测序并拼接,首次克隆牦牛应激型HSPA1A和HSPA2基因。序列分析表明,扩增到的牦牛应激型HSPA1A基因全长2 134bp,开放阅读框全长1 926bp,编码641个氨基酸,分子质量为70.26ku;HSPA2基因全长1 911bp,开放阅读框全长1 911bp,编码636个氨基酸,分子质量为69.85ku。将HSPA1A和HSPA2基因开放阅读框编码的氨基酸序列进行ScanProsite分析,均得到3个HSP70蛋白家族标记。核苷酸序列同源性分析表明,HSPA1A和HSPA2基因具有较高的保守性,牦牛与牛的HSPA1A和HSPA2基因核苷酸序列同源性最高,分别为99.8%和99.1%。遗传进化关系分析表明,牦牛与牛的应激型HSPA1A和HSPA2基因亲缘关系最近。

3GPP HSPA+技术标准发展及未来演进

介绍了HSPA+的多载波、M2M、MDT、ANR等新技术和HSPA+的新业务需求,探讨了智能终端对网络带来的影响,并论述了I-HSPA扁平化架构。

牦牛HSPA1A和HSPA2基因组织分布的检测

旨在建立一种检测牦牛HSP70家族应激型HSPA1A和HSPA2基因的实时荧光定量PCR方法。采用普通PCR,结合实时荧光定量PCR方法,检测正常情况下应激型HSPA1A和HSPA2基因在牦牛各组织中的表达分布。结果显示,HSPA1A基因在公牦牛与母牦牛中的表达基本一致,所有组织中均少量表达,肺中最低,肌肉相对表达较高;HSPA2基因在公牦牛与母牦牛中的表达也基本一致,所有组织均少量表达,肺中最低,脑、睾丸和卵巢相对表达较高。该研究结果提示正常情况下HSPA2基因可能在牦牛生殖繁育上发挥一定作用,为进一步研究HSPA1A基因和HSPA2基因在牦牛对环境的适应性方面提供基础资料和研究方法。

WCDMA HSPA向LTE的演进方案探讨

在WCDMA建网以HSPA为起点的情况下,向LTE/LTE+的演进有两条路线。1)方案一:HSPA直接向LTE演进;该种方案演进过程过于激烈。2)方案二:通过HSPA+过渡向LTE演进;其优势是演进平滑。本文从技术能力和实现难易角度,对WCDMA/HSPA到LTE的过渡方案和时机掌握,进行了探讨。

幽门螺杆菌HspA亚基的表达与纯化

目的:利用原核表达载体高效表达幽门螺杆菌热休克蛋白A(HspA),并进行纯化. 方法:PCR扩增hspA基因,将其克隆至原核表达载体pET22b,pQE-60,pGEX-4T-2中,转化大肠杆菌,经IPTG诱导后,SDS—PAGE分析表达.利用镍离子亲和层析对表达产物进行纯化.免疫印迹检测蛋白的抗原性. 结果:PCR扩增得到hspA基因,在载体pQE-60中以HspA和HspA-His6两种形式得到表达,表达量高达菌体总蛋白的40%以上.经镍离子亲和层析后,纯化率分别为88.63%和86.32%,但HspA—His6在纯化过程中发生降解.免疫印迹实验表明,HspA和HspA-His6都有很好的抗原性. 结论:实现了HspA蛋白的高效表达和纯化,为幽门螺杆菌HspA亚单位疫苗的免疫实验奠定基础.

Internet-HSPA——3G网络无线宽带化的演进之路

文章介绍了从3GPP R6到R7、R8在无线网络架构上的扁平化趋势,指出Internet-HSPA在3G向LTE演进过程中具有承前启后的作用,分析了无线网络扁平化的关键技术及其给网络及运营带来的益处及可能的挑战,研究了Internet-HSPA的分组域和电路域组网方案。

HSPA2在牦牛不同组织器官中的表达差异

【目的】探索热休克蛋白70-2(heat shock 70kD protein-2,HSPA2)在牦牛不同组织器官中的表达差异。【方法】选取3头1岁龄的健康青海高原雄性牦牛为研究对象,在正常生理条件下,于2013年9月中旬采集不同组织器官(心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、脑和睾丸)样本。(1)从牦牛不同组织器官中提取RNA,将RNA反转录成第一链cDNA,参照牦牛HSPA2和β-actin基因序列(登录号为KC790105.1和DQ838049.1)设计特异性引物,首先采用RT-PCR来验证实时荧光定量PCR(RT-qPCR)是否能应用于牦牛不同组织器官中HSPA2表达差异的测定;然后采用RT-qPCR测定牦牛不同组织器官中HSPA2相对表达量的差异。(2)将牦牛不同组织器官样本4%多聚甲醛固定,制成石蜡切片,免疫组织化学法测定HSPA2在不同组织器官中的分布。采用Image-Pro Plus 6.0软件进行免疫组化图像分析,测定HSPA2阳性反应物的积分光密度,进行吸光度分析;通过SPSS 19.0统计软件,用单因素方差分析进行差异显著性测定。【结果】(1)RT-PCR结果表明RT-qPCR法可用于牦牛不同组织器官中HSPA2表达差异的测定。实时荧光定量PCR结果表明,HSPA2在睾丸中的相对表达量,分别是在脑、肾脏、心脏、脾脏、肺脏和肝脏中的83.33、97.09、111.11、133.33、222.22和285.71倍。(2)免疫组织化学结果显示,牦牛睾丸、肾脏、脑、心脏、肺脏、肝脏和脾脏中均有HSPA2的阳性表达。其中,在牦牛肾脏皮质肾小管、髓质肾小管,大脑皮质海马CA1区、小脑皮质,心肌细胞,肺泡上皮细胞,肝细胞,脾脏边缘区和红髓中有HSPA2阳性反应,着色深浅不等,大部分阳性反应位于细胞质,细胞核阳性反应极少;而在睾丸曲精小管中生精细胞细胞质和细胞核中均有HSPA2阳性反应,着色深浅不等;阴性对照组未观察到阳性反应。根据积分光密度值比较得出,HSPA2蛋白的阳性表达量在睾丸中最高,脑、肾脏、心脏、肺脏和肝脏次之,脾脏最少。【结论】通过基因水平和蛋白水平两个层面的研究,发现HSPA2在牦牛各组织器官中存在表达差异;睾丸中HSPA2基因和蛋白表达量均高于脑、肾脏、心脏、脾脏、肺脏和肝脏,提示HSPA2可能与睾丸的生殖功能密切相关。

幽门螺杆菌UreB和HspA DNA疫苗的构建及免疫评价

本研究选择幽门螺杆菌尿素酶B和热休克蛋白A为候选抗原,通过PCR扩增基因,克隆至真核表达质粒pCD-NA3.1(-)His-Myc上,构建成DNA疫苗。通过小鼠免疫效果的评价,获得两株具有免疫源性DNA疫苗。

益肾通络方对少弱精子症大鼠睾丸组织PI3K-AKT-mTOR通路、CatSper-1、HSPA2蛋白及mRNA表达的影响

目的:基于PI3K-AKT-mTOR通路研究益肾通络方对少弱精子症模型大鼠睾丸组织的影响及作用机制。方法:将SPF级雄性SD大鼠48只,随机分为正常对照组、模型组、左卡尼汀组、益肾通络方(YTP)组(高、低剂量组)、Omipalisib抑制剂(OI)组、Omipalisib抑制剂+益肾通络方高剂量组(OI+YTP高剂量组)、Omripalisib抑制剂+益肾通络方低剂量组(OI+YTP低剂量组),每组各6只。除正常对照组外其余大鼠均在雷公藤多苷灌胃建立少弱精子症模型大鼠基础上给予相对应药物,镜下观察各组大鼠精子参数,HE染色观察各组睾丸组织病理变化,Western印迹和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测PI3K-AKT-mTOR信号通路相关蛋白及mRNA表达情况。结果:与模型组相比,左卡尼汀组、YTP高剂量组、YTP低剂量组在精子浓度和精子活力(PR、PR+NP)方面均显著提高(P<0.001);HE染色结果显示模型组生精细胞排列不整齐,生精小管管腔缩小,间隙变宽等,左卡尼汀组、YTP高剂量组、YTP低剂量组也观察到了与模型组相似的病理改变,但同时也观察到了较为完好的精子细胞且在数量相对模型组较多,OI组、OI+YTP高剂量组、OI+YTP低剂量组的病理改变与模型组相近。Western印迹结果显示:与模型组相比,左卡尼汀组可上调p-AKT、CatSper-1、HSPA2蛋白表达量(P<0.05),YTP低剂量组可上调p-AKT、mTOR、CatSper-1、HSPA2蛋白表达量(P<0.05),YTP高剂量组除可上调上述蛋白表达外,还可上调PI3K蛋白表达量(P<0.05);OI组PI3K、mTOR、CatSper-1的蛋白表达量与模型组对比无差异(P>0.05);OI+YTP高剂量组及OI+YTP低剂量组PI3K、p-AKT、mTOR、CatSper-1、HSPA2的蛋白表达与模型组、OI组对比无差异(P>0.05)。qRT-PCR结果显示:与模型组相比,左卡尼汀组、YTP高、低剂量组均可上调PI3K mRNA、mTOR mRNA、CatSper-1 mRNA、HSPA2 mRNA表达(P<0.05);YTP高剂量组可显著上调CatSper-1 mRNA表达(P<0.001),且与YTP低剂量组对比时,YTP高剂量组可以更有效上调PI3K的mRNA表达(P<0.05)。OI组PI3K、mTOR、CatSper-1、HSPA2的mRNA表达与模型组对比无差异(P>0.05);OI+YTP高剂量组及OI+YTP低剂量组PI3K、mTOR、CatSper-1、HSPA2的mRNA表达与模型组、OI组对比无差异(P>0.05)。结论:益肾通络方可改善雷公藤多苷诱导的少弱精子症SD模型大鼠精子质量及睾丸组织病理形态变化,其机制可能与该方上调了睾丸组织PI3K-AKT-mTOR通路的相关蛋白及mRNA表达有关。

幽门螺杆菌HspA与大肠杆菌LTB基因融合及表达

目的:构建和表达人幽门螺杆菌(Hpylori)热休克蛋白A亚单位(HspA)与E. coli不耐热肠毒素B亚单位(LTB)的重组融合蛋白,并对其基本的生物学及免疫学特性进行研究.方法:采用PCR技术从人H pylori染色体DNA中扩增出354 bp的HspA基因,并克隆至pPLtB载体中与1tB基因融合,形成含有1tB-H spA融合基因的原核表达载体pPLH,并在工程菌E.coli JM109中诱导表达.结果:经序列分析,1tB-HspA融合基因由684个碱基组成,为编码228个氨基酸残基的多肽.SDS-PAGE和Westernblotting检测发现,融合蛋白的Mr 25×103,并与Hpylori感染的阳性血清发生抗原抗体反应,ELISA检测显示融合蛋白中存在LTB组分,并保持与LT受体-神经节苷脂GM1结合的活性.结论:LTB-HspA融合蛋白有可能用于Hpylori基因工程疫苗的研究.

WCDMA HSPA技术演进思考

本文分别从核心技术、峰值速率、网络结构、演进方式等方面,对WCDMA HSPA后向演进的三种技术HSPA+、LTE、LTE Advanced进行对比分析,然后站在网络运营和网络平滑演进的角度,对WCDMA HSPA的未来演进思路进行展望。

共沉默Birc5和Hspa5的双干扰siRNA质粒载体构建及鉴定

目的构建共沉默Birc5和Hspa5的双干扰siRNA质粒,为进一步以Birc5和Hspa5作为肿瘤生物治疗靶点研究提供基础。方法使用Ambion Target Finder设计Birc5和Hspa5mRNA的干扰序列;挑取酶切鉴定正确的质粒转化菌液Birc5-siRNA和Hspa5-siRNA测序鉴定;采用分子克隆技术构建特异性沉默Birc5和Hspa5的双干扰siRNA质粒,命名为pgsiRNA-Birc5+Hspa5,酶切鉴定;将pgsiRNA-Birc5+Hspa5转染HepG2细胞48h后采用Real-time PCR检测Birc5和Hspa5的mRNA表达水平。结果经酶切鉴定正确的质粒转化菌液Birc5-siRNA和Hspa5-siRNA测序结果显示均为插入正确的克隆质粒;经酶切鉴定分析显示pgsiRNA-Birc5+Hspa5符合酶切鉴定结果;转染pgsiRNA-Birc5+Hspa5 48h后HepG2细胞Birc5和Hspa5mRNA表达均显著下降,未转染组Birc5和Hspa5mRNA的相对表达量均为1.0,pgsiRNA-Birc5+Hspa5组Birc5为0.15(P<0.05),Hspa5为0.37(P<0.05),表明双干扰载体构建成功。结论成功构建了Birc5和Hspa5双干扰siRNA质粒,为进一步同时靶向沉默肿瘤Birc5和Hspa5基因研究提供了工具和基础。

HSPA12A mRNA在难治性癫痫患者脑组织中高表达

目的利用cDNA芯片和荧光定量PCR(Fluorescence Quantitive Polymerase Chain Reaction,FQ- PCR)技术检测难治性癫痫患者脑组织中HSPA12A(heat shock 70kDa protein 12A,HSPA12A)mRNA的表达,并探讨其在难治性癫痫发病机制中的作用。方法收集36例难治性癫痫患者术后脑组织和8例正常对照组,用含有4096条人类靶基因的cDNA芯片进行扫描,筛选出候选基因后,用FQ-PCR,以3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)为内参对芯片扫描结果进行验证。结果发现候选基因HSPA12A mRNA在难治性癫痫患者脑组织中表达上调,FQ- PCR与cDNA芯片结果一致。结论虽然HSPA12A具体生物功能尚不明确,但我们认为HSPA12A可能作为重要的调节因子参与了神经元凋亡等分子事件。HSPA12A mRNA表达上调可能在难治性癫痫发病机制中起一定作用。