HSPA12A mRNA在难治性癫痫患者脑组织中高表达

目的利用cDNA芯片和荧光定量PCR(Fluorescence Quantitive Polymerase Chain Reaction,FQ- PCR)技术检测难治性癫痫患者脑组织中HSPA12A(heat shock 70kDa protein 12A,HSPA12A)mRNA的表达,并探讨其在难治性癫痫发病机制中的作用。方法收集36例难治性癫痫患者术后脑组织和8例正常对照组,用含有4096条人类靶基因的cDNA芯片进行扫描,筛选出候选基因后,用FQ-PCR,以3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)为内参对芯片扫描结果进行验证。结果发现候选基因HSPA12A mRNA在难治性癫痫患者脑组织中表达上调,FQ- PCR与cDNA芯片结果一致。结论虽然HSPA12A具体生物功能尚不明确,但我们认为HSPA12A可能作为重要的调节因子参与了神经元凋亡等分子事件。HSPA12A mRNA表达上调可能在难治性癫痫发病机制中起一定作用。

HSPA12A高表达于神经组织

目的研究热休克蛋白70(HSP70)家族新成员HSPA12A的组织分布和细胞定位。方法采用免疫印迹和免疫荧光组织化学方法,分析成年小鼠7种不同组织中HSPA12A的表达,并探讨其是否在成年、胚胎鼠神经元中具有表达。结果 (1)在成年小鼠心、肝、脾、肺、肾、脑、骨骼肌这7种组织中,脑组织的表达量是其他组织的至少10倍以上(P<0.01);(2)HSPA12A在胚胎时期的鼠皮层神经元中表达;(3)HSPA12A在成年鼠的皮层神经元中持续表达。结论 HSPA12A被首次证实在神经组织中表达最高,且从胚胎时期到成年鼠皮层神经元中均持续表达,提示HSPA12A可能在神经细胞的内稳态维持中具有重要作用。

特异性下调热休克蛋白A12B加重脂多糖诱导细胞炎症大鼠腹主动脉内皮细胞损伤

目的通过特异性下调脂多糖(LPS)诱导细胞炎症大鼠腹主动脉内皮细胞(RAAEC)热休克蛋白A12B(HSPA12B)的表达,观察不同表达水平HSPA12B对RAAEC生物学特性的影响,探讨HSPA12B对脓毒症内皮功能调控的潜在机制。方法使用针对HSPA12B mRNA序列设计的siRNA转染RAAEC,构建LPS诱导细胞炎症模型。分三组,即空白对照组(RAAEC+20%DMEM培养基)、LPS模型组(RAAEC+20%DMEM培养基+1mL PBS将1 mg LPS溶解后的溶液)、LPS+siRNA转染组(基因转染后RAAEC+1mL PBS将1mg LPS溶解后的溶液)。观察各组RAAEC中HSPA12B mRNA及蛋白表达水平的变化,使用透射电子显微镜观察内皮细胞形态及内部超微结构形态改变,采用酶联免疫吸附法测定内皮细胞内皮素-1(ET-1)、内皮型一氧化氮合酶(e NOS)含量变化。结果LPS+siRNA转染组HSPA12B mRNA及蛋白水平与LPS模型组比较均明显下调(P<0.05),透射电子显微镜下观测到LPS+siRNA转染组细胞膜呈虫蚀样变,胞质内空泡明显增多,线粒体肿胀变性。与空白对照组比较,LPS模型组、LPS+siRNA转染组ET-1含量增高(pg/m L:405.28±37.95 vs.1141.18±115.27 vs.1487.09±108.18,P<0.05),且LPS+siRNA转染组高于LPS模型组(P<0.05);与空白对照组比较,LPS+siRNA转染组e NOS含量降低(μU/g:1687.98±81.38 vs.940.16±50.79 vs.658.37±55.06,P<0.05),且LPS+siRNA转染组低于LPS模型组(P<0.05)。结论特异性下调LPS诱导RAAEC细胞炎症大鼠HSPA12B的表达,能降低RAAEC对炎症反应的耐受能力,加重RAAEC损伤程度。