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人毛乳头细胞HSPC016基因在大肠杆菌中的表达和鉴定
1
作者
邹锋
郝飞
+4 位作者
宋志强
易勇
郝进
钟华
叶庆佾
《免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第3期212-215,共4页
目的构建人毛乳头细胞HSPC016基因的原核表达载体,诱导其表达并对目的蛋白基本生物学特性进行鉴定。方法采用PCR技术从pcDNA3.1(+)/HSPC016中扩增出195bp目的基因,克隆至pMD18-T载体,双酶切回收纯化目的片段后连接至同样酶切回收的表达...
目的构建人毛乳头细胞HSPC016基因的原核表达载体,诱导其表达并对目的蛋白基本生物学特性进行鉴定。方法采用PCR技术从pcDNA3.1(+)/HSPC016中扩增出195bp目的基因,克隆至pMD18-T载体,双酶切回收纯化目的片段后连接至同样酶切回收的表达载体pET-28a(+)质粒中。重组质粒经酶切及测序鉴定后转化工程菌E.coliBL21,IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测,UVP图像扫描分析并对目的蛋白进行N-端氨基酸测序鉴定。结果采用PCR技术成功地从pcDNA3.1(+)/HSPC016中扩增出195bp目的基因,序列分析显示HSPC016基因ORF由195bp组成并与GenBank公布序列完全一致。原核表达载体pET-28a(+)/HSPC016转化工程菌E.coliBL21并经诱导后,SDS-PAGE电泳鉴定:目的蛋白Mr约为7200,与理论预测值相吻合;UVP扫描表明目的蛋白表达率约20%。N-端氨基酸测序结果与预期序列完全一致。结论HSPC016基因能通过原核载体pET-28a(+)及工程菌E.coliBL21进行高效、正确地表达,为研究HSPC016基因表达的生物学意义奠定了基础。
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关键词
毛乳头细胞
hspc
016
基因
原核表达
下载PDF
职称材料
抗人毛乳头细胞造血干细胞016基因多克隆抗体的制备
2
作者
邹锋
郝飞
+4 位作者
宋志强
易勇
翟志芳
邹全明
叶庆佾
《临床皮肤科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第9期563-565,共3页
目的:在大肠杆菌中重组表达人毛乳头细胞造血干细胞(HSPC)016基因功能序列,制备特异性多克隆抗体。方法:采用PCR技术从pcDNA3.1(+)/HSPC016中扩增出目的基因克隆至pMD18-T载体,酶切回收目的片段连接至表达载体pET-28a(+)。重组质粒经酶...
目的:在大肠杆菌中重组表达人毛乳头细胞造血干细胞(HSPC)016基因功能序列,制备特异性多克隆抗体。方法:采用PCR技术从pcDNA3.1(+)/HSPC016中扩增出目的基因克隆至pMD18-T载体,酶切回收目的片段连接至表达载体pET-28a(+)。重组质粒经酶切及测序鉴定后转化工程菌E.coliBL21,异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,对目的蛋白N-端氨基酸测序鉴定后免疫日本大耳白兔,制备兔抗HSPC016多抗血清,以双向免疫扩散、ELISA、Westernblotting检测抗体效价及特异性。结果:在大肠杆菌中高效表达了相对分子质量约7200的HSPC016蛋白,目的蛋白N-端氨基酸测序结果与预期序列完全一致。双向免疫扩散显示兔抗HSPC016多克隆抗体效价为1∶16;ELISA分析兔抗HSPC016血清的滴度可达320000EU;Westernblotting显示抗血清可与原核表达的HSPC016蛋白特异结合。结论:成功制备了兔抗HSPC016多抗血清,为进一步研究HSPC016蛋白的结构与生物学意义奠定了基础。
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关键词
人毛乳头细胞
造血干细胞
016
基因
原核表达
抗体
兔
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职称材料
题名
人毛乳头细胞HSPC016基因在大肠杆菌中的表达和鉴定
1
作者
邹锋
郝飞
宋志强
易勇
郝进
钟华
叶庆佾
机构
第三军医大学西南医院皮肤科
第三军医大学检验系临床微生物及免疫学教研室
出处
《免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第3期212-215,共4页
基金
国家自然科学基金资助项目(30200249)
文摘
目的构建人毛乳头细胞HSPC016基因的原核表达载体,诱导其表达并对目的蛋白基本生物学特性进行鉴定。方法采用PCR技术从pcDNA3.1(+)/HSPC016中扩增出195bp目的基因,克隆至pMD18-T载体,双酶切回收纯化目的片段后连接至同样酶切回收的表达载体pET-28a(+)质粒中。重组质粒经酶切及测序鉴定后转化工程菌E.coliBL21,IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测,UVP图像扫描分析并对目的蛋白进行N-端氨基酸测序鉴定。结果采用PCR技术成功地从pcDNA3.1(+)/HSPC016中扩增出195bp目的基因,序列分析显示HSPC016基因ORF由195bp组成并与GenBank公布序列完全一致。原核表达载体pET-28a(+)/HSPC016转化工程菌E.coliBL21并经诱导后,SDS-PAGE电泳鉴定:目的蛋白Mr约为7200,与理论预测值相吻合;UVP扫描表明目的蛋白表达率约20%。N-端氨基酸测序结果与预期序列完全一致。结论HSPC016基因能通过原核载体pET-28a(+)及工程菌E.coliBL21进行高效、正确地表达,为研究HSPC016基因表达的生物学意义奠定了基础。
关键词
毛乳头细胞
hspc
016
基因
原核表达
Keywords
Human dermal papilla cell
hspc 016 gene
Prokaryotic expression
分类号
R346 [医药卫生—基础医学]
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职称材料
题名
抗人毛乳头细胞造血干细胞016基因多克隆抗体的制备
2
作者
邹锋
郝飞
宋志强
易勇
翟志芳
邹全明
叶庆佾
机构
第三军医大学西南医院皮肤科
第三军医大学检验系临床微生物学及免疫学教研室暨重庆市生物制药工程技术研究中心
出处
《临床皮肤科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第9期563-565,共3页
基金
国家自然科学基金资助项目(30200249)
文摘
目的:在大肠杆菌中重组表达人毛乳头细胞造血干细胞(HSPC)016基因功能序列,制备特异性多克隆抗体。方法:采用PCR技术从pcDNA3.1(+)/HSPC016中扩增出目的基因克隆至pMD18-T载体,酶切回收目的片段连接至表达载体pET-28a(+)。重组质粒经酶切及测序鉴定后转化工程菌E.coliBL21,异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,对目的蛋白N-端氨基酸测序鉴定后免疫日本大耳白兔,制备兔抗HSPC016多抗血清,以双向免疫扩散、ELISA、Westernblotting检测抗体效价及特异性。结果:在大肠杆菌中高效表达了相对分子质量约7200的HSPC016蛋白,目的蛋白N-端氨基酸测序结果与预期序列完全一致。双向免疫扩散显示兔抗HSPC016多克隆抗体效价为1∶16;ELISA分析兔抗HSPC016血清的滴度可达320000EU;Westernblotting显示抗血清可与原核表达的HSPC016蛋白特异结合。结论:成功制备了兔抗HSPC016多抗血清,为进一步研究HSPC016蛋白的结构与生物学意义奠定了基础。
关键词
人毛乳头细胞
造血干细胞
016
基因
原核表达
抗体
兔
Keywords
human dermal papilla cell
hspc 016 gene
prokaryotic expression
antibody
rabbit
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人毛乳头细胞HSPC016基因在大肠杆菌中的表达和鉴定
邹锋
郝飞
宋志强
易勇
郝进
钟华
叶庆佾
《免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2005
0
下载PDF
职称材料
2
抗人毛乳头细胞造血干细胞016基因多克隆抗体的制备
邹锋
郝飞
宋志强
易勇
翟志芳
邹全明
叶庆佾
《临床皮肤科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2006
0
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职称材料
已选择
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