贵阳市MSM人群中HIV、TP、HSV-2感染的实验结果分析

目的分析贵阳市男男性行为者(MSM)人群中HIV、TP及HSV-2感染的实验检测结果,为该人群的艾滋病防控工作提供参考依据。方法通过同伴推动抽样法招募MSM人员为调查对象,对其血液样本进行HIV、TP及HSV-2检测,并分析实验检测结果。结果577例研究对象中,共发现HIV抗体阳性者、TP特异性抗体阳性者及HSV-2抗体阳性者116例(20.1%)、107例(18.5%)、74例(12.8%);HIV^(+)TP、HIV^(+)HSV-2、TP^(+)HSV-2以及HIV^(+)TP^(+)HSV-2合并感染者24例(4.2%)、8例(1.4%)、11例(1.9%)、20例(3.5%)。实验检测结果分析表明,新发现HIV感染者的WB试验各个反应带型频率不一,带型组合多样化;CD4^(+)T淋巴细胞绝对值计数最小为10个/μL,最大为914个/μL,平均值为(316.2±160.6)个/μL。病毒载量最高值>7 log_(10)/mL,最低值为1.5 log_(10)/mL,平均值为(4.3±0.9)log_(10)/mL。结论贵阳市MSM人群HIV、TP及HSV-2的感染率较高,合并感染情况较为严重,防治形势严峻,应加强本地区MSM人群的HIV、TP及HSV-2防治工作;同时应结合检测结果制定相关的治疗及防治措施,提高感染者的健康水平。

HPV-16、HSV-2、EBV感染及PCNA表达与宫颈癌关系研究

[目的 ]探讨HPV - 16、HSV - 2、EBV感染及增殖细胞核抗原表达与宫颈癌的关系。[方法 ]采用免疫组化SP法分别检测 5 4例宫颈癌和 2 0例正常宫颈的HPV - 16、HSV - 2、EBV蛋白及PCNA表达情况。 [结果 ]HPV - 16、HSV - 2、EBV蛋白在宫颈癌组织和正常宫颈表达率分别为 5 7.4 %、38.9%、5 5 .6 %和 5 %、5 %、10 % (P <0 .0 5 ) ;PCNA在宫颈癌和正常宫颈表达率为81.5 %和 15 % (P <0 .0 5 ) ,而且随着宫颈癌病理分级的增高 ,其表达的阳性率也增高 ,强度增强 ;HPV - 16阳性组的PCNA表达高于阴性组 (P <0 .0 5 ) ,HSV - 2、EBV阳性组和阴性组的PCNA表达无显著差异 (P >0 .0 5 ) ;3种病毒混合感染者的PCNA表达均为阳性。 [结论 ]HPV - 16、HSV - 2。

细胞MEK1/2蛋白及其相关通路在单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)复制中的作用

基于细胞Raf/MEK/ERK信号通路与病毒复制的关系,应用Western印迹检测p-ERK1/2蛋白的表达、用终点滴定法测定病毒增殖量(TCID50),以及观察感染细胞的细胞病变效应(CPE)等,揭示单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)复制与ERK通路的关系.结果表明,HSV-2的复制可引起细胞ERK通路的活化;用U0126预先抑制ERK通路的活化,或用特异性siRNA敲减MEK1/2基因的表达可显著地抑制病毒复制.提示ERK信号通路以及MEK1/2蛋白对HSV-2的复制具有重要的作用.该研究对进一步阐明细胞ERK通路各激酶蛋白在病毒复制中的作用机制、寻找抗病毒作用靶标等奠定了良好的基础.

大玉竹低聚糖硫酸酯抗HSV-2病毒活性的研究

从传统中药大玉竹中提取低聚糖Poos ,用吡啶 氯磺酸法制备了它的硫酸酯衍生物S Poos.产物经红外鉴定 ,证实Poos硫酸酯化后羟基连上了硫酸基 ,硫含量为 8.47% ,取代度 (Ds)为 0 .6 .体外实验研究了Poos、S Poos对非洲绿猴肾细胞 (Vero)的细胞毒性和抗单纯疱疹病毒 2型 (HSV 2 )的活性 .结果表明 ,Poos和S Poos都无细胞毒性 .Poos本身无抗病毒活性 ,对HSV 2引起的细胞病变和空斑形成都无抑制作用 ;经硫酸酯衍生后的S Poos获得抗病毒活性 ,12 5～ 2 0 0 0 μg/mL的S Poos能很好地抑制HSV 2引起的细胞病变 ,2 0 0 μg/mL的S Poos能完全抑制病毒空斑形成 .图 4表 2参

美洲大蠊提取物CII-3体内外抗HSV-2实验研究

目的:研究美洲大蠊提取物CII-3抗HSV-2作用。方法:通过MTT法和CPE法测定美洲大蠊提取物CII-3抗HSV-2活性,计算其TC50、IC50及TI。以雌性小鼠生殖器疱疹为动物模型,在小鼠阴道内注射50μL HSV-2病毒原液,1次/d,连续7 d造模。以ACV为阳性对照,采用灌胃给药治疗10 d。应用ELISA试剂盒检测小鼠血清中TNF-α、IFN-γ、IL-2的水平变化;称量小鼠免疫器官重量,计算脏器指数。结果:美洲大蠊提取物CII-3有抑制HSV-2致细胞病变的作用,其TC50值为190.55μg/m L,IC50值为28.71μg/m L,TI值为6.64μg/m L;美洲大蠊提取物CII-3能够提高小鼠血清中TNF-α、IFN-γ、IL-2的水平,同时能够使小鼠的免疫器官重量增加。结论:美洲大蠊提取物CII-3有抗HSV-2作用,其抗病毒作用可能是通过提高机体免疫功能来实现。

皱瘤海鞘水提物体外抗HSV-2活性实验研究

目的:了解皱瘤海鞘水提物体外抗单纯疱疹病毒2型的活性。方法:采用HSV-2在Vero细胞上的增殖为模型,用细胞病变法和MTT法对皱瘤海鞘水提物体外抗HSV-2的药效活性进行评价。结果:皱瘤海鞘水提物CC_(50)值大于10 mg·ml^(-1),毒性低;对HSV-2具有很好抑制和杀伤作用,2 mg·ml^(-1)时对病毒的生物合成抑制蟀达到82.98%,对HSV-2的直接杀伤率为74.29%。对HSV-2的吸附阻断作用较小。结论:皱瘤海鞘水提物具有良好的抗HSV-2活性。

江苏省HIV阳性的MSM人群梅毒和HSV-2感染及影响因素分析

目的:了解江苏省男男性行为人群(men who have sex with men,MSM)中人类免疫缺陷病毒(human immunoddficiency virus,HIV)感染者的梅毒及单纯疱疹病毒Ⅱ型(herpes simplex virus 2,HSV-2)的感染情况及影响因素。方法:2012年3～6月在南京、镇江市整群抽取HIV阳性的MSM 264例,对其进行随访问卷调查,并回顾其病例报告时的问卷信息。静脉血采集进行梅毒和HSV-2检测。结果:264例MSM中梅毒感染率为29.55%(78/264),其中现症梅毒感染率为13.64%(36/264),HSV-2型特异性IgG抗体阳性率为28.03%(74/264)。多因素Logistic回归分析结果显示与现症梅毒感染有统计学意义的因素为感染前6个月内同性性伴数>3人、HSV-2阳性;与HSV-2感染有统计学意义的因素为年龄>35岁、本县区户籍、现症梅毒感染和接受安全套发放服务。结论:应探索新的干预模式和检测策略,以应对梅毒和HSV-2在MSM人群中的传播和流行。

宫颈病灶HSV-2感染及其与宫颈癌的关联性

目的观察宫颈病灶中单纯疱疹病毒-2(HSV-2)感染状况,探讨宫颈HSV-2感染与宫颈癌的关联性。方法 101例宫颈病变患者中宫颈癌患者46例(癌变组),宫颈良性疾病55例(对照组),分别对其宫颈病灶组织和宫颈分泌物进行HSV-2 DNA(实时荧光PCR法)和人乳头瘤病毒(HPV)基因分型(快速导流杂交法)检测。结果宫颈病灶HSV-2 DNA阳性率为10.89%;其中癌变组HSV-2的阳性率为17.39%,对照组为5.45%,两组间差异无统计学意义(P>0.05)。宫颈病灶HPV总阳性率为67.33%,共检测出13种HPV亚型,以16型最多见(45.45%);癌变组(97.83%)与对照组(41.82%)间比较差异有统计学意义(χ2=34.087,P<0.001)。HSV-2与HPV合并阳性率为9.90%,HSV-2感染的癌变组中HPV阳性率达100%,混合感染的亚型主要为HPV16占75%。结论 HSV-2多与HPV16亚型合并感染宫颈癌患者,其在宫颈癌演变过程中的潜在影响不能忽视。

HSV-2阴道感染并诱导小鼠阴道粘膜上皮细胞凋亡

最近的报道指出，某些病毒有诱导体外细胞凋亡的作用，借以限制病毒的扩散。为探讨ＨＳＶ－２在体内诱导细胞凋亡的效果及其形态学特点，用 ＨＳＶ－２ ３３３株感染小鼠阴道，于感染后不同天数处死动物，取其阴道，固定于１０％中性福尔马林，ＴＵＮＥＬ末端标记染色显示凋亡的细胞，光镜下进行原位观察。结果显示：感染后的第１天粘膜上皮内即出现大量的凋亡细胞，第２天至１１天凋亡细胞的数量及在上皮内的分布范围达最高水平。早期的凋亡细胞见于感染后所有标本，其核染色质形态及分布似正常细胞，但它被ＴＵＮＥＬ标记染成棕黄色；晚期的凋亡细胞亦见于所有标本，其胞核缩小，染色质浓缩并在核周边集聚，核中心空化。载有凋亡细胞的上皮在阴道粘膜上分布很广，最广的可占全阴道上皮的２／３。同时可见ＨＳＶ．２引起的上皮细胞坏死及疱疹形成，二者均由凋亡细胞包围。凋亡细胞不断地由上皮表面脱落至阴道，未见凋亡小体及吞噬现象。结果提示，ＨＳＶ－２ ３３３株阴道感染可同时诱导细胞坏死及凋亡，细胞凋亡可能在限制病毒产生子代及限制感染区域扩展起重要作用。

上海市静安区性病门诊50岁以上男性就诊者HSV-2感染率及其影响因素研究

目的调查研究上海市静安区50岁及以上男性性病门诊患者2型单纯疱疹病毒(HSV-2)感染率及其影响因素。方法连续入选2011年3—9月首次到华山医院及其分院静安区中心医院性病门诊50岁及以上男性就诊者作为研究对象,在其知情同意的情况下进行问卷调查,并采集血液标本进行HSV-2 IgG抗体和人类免疫缺陷病毒(HIV)抗体检测。结果共157人首次前来就诊并知情同意接受本调查,平均年龄(60.1±7.7)岁。HIV阳性1人(0.6%),HSV-2阳性52人(33.1%)。多因素Logistic回归分析显示:婚姻状况(OR=0.27,95%CI:0.10～0.73)、文化程度(小学及以下OR=0.23,95%CI:0.07～0.77;初中OR=0.47,95%CI:0.21～1.04)、是否退休(OR=2.68,95%CI:1.23～5.85)以及有无子女(OR=0.08,95%CI:0.01～0.88)是50岁及以上男性HSV-2感染的影响因素。结论上海市静安区50岁及以上性病门诊男性就诊者中HSV-2感染率高,有必要加强该人群HSV-2防治工作。

HSV-2的生物信息学分析及其Oligo探针设计

目的设计单纯疱疹病毒2型(HSV-2)诊断芯片的O ligo探针。方法利用BLA ST软件对HSV-2的DNA序列进行序列比对,得到有意义的特异序列;用生物学软件O ligo6.0设计特异性高、Tm值相近、长度均一的O ligo探针。结果获得13条60-m er O ligo探针。结论利用BLA ST系统和生物学软件O ligo6.0设计HSV-2诊断芯片的探针,可为后期打印成DNA芯片,用于HSV-2的检测打下基础。

HSV-2潜伏感染激活人神经母细胞瘤细胞中siRNA对LAT ORF的抑制作用

目的探讨单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)潜伏感染复发中LAT基因ORF的siRNA对LAT表达的抑制作用。方法设计3对siRNA,激活诱导后转染SH-SY5Y细胞,相差显微镜观察细胞形态变化,RT-PCR半定量检测转染前后LAT ORF表达改变。结果LAT ORF-siRNA转染细胞后,LATORF mRNA的表达水平转染后24,48和72h分别减少了39%,51%和60%。结论LAT ORF-siRNA能够抑制HSV-2 LAT ORF的表达。

十二烷基硫酸钠抗HSV-2效应的研究

目的:证实十二烷基硫酸钠(SDS)抗HSV-2的效应,初步确定其有效浓度与安全性。方法:用体外细胞培养法观察不同浓度SDS对HSV-2的抑制作用,同步进行阿昔洛韦(ACV)对照观察。结果:SDS对HSV-2的最低有效抑制浓度为0.015625mg/mL,抑制作用与0.1mg/mL阿昔洛韦组无明显差异(P>0.05);且最低有效抑制浓度的SDS对培养细胞的影响甚微,较此高8倍浓度的SDS仍然安全。结论:SDS在体外对HSV-2有明显抑制作用,对培养细胞的安全性好。

HSV-2 LAT ORF2在Vero细胞中的表达及对细胞的作用

旨在研究人单纯疱疹病毒2型(HSV-2)潜伏相关转录体(LAT)开放读码框2(ORF2)对体外培养的非洲绿猴肾细胞(Vero)形态和活性的作用。将构建好的带绿色荧光蛋白(EGFP)标签的HSV-2LAT ORF2真核表达载体pEGFP-ORF2,转染vero细胞,荧光显微镜观测细胞形态的改变和MTT法进行活性分析。结果:显示,HSV-2LATORF2诱导细胞形态发生明显变化,绿色荧光蛋白在细胞的定位也发生了改变,细胞活性降低。由此证实,HSV-2LAT ORF2对细胞有损伤作用,为阐明HSV-2LATORF2的功能提供了资料。

HSV-2miR-H4-5p负调节CDKL2基因表达并抑制ActD引起的Vero细胞凋亡

单纯疱疹病毒Ⅱ型(herpes simplex virusⅡ,HSV-2)编码的microRNA-H4-5p(miR-H4-5p)可与病毒神经毒力蛋白ICP34.5mRNA互补结合并抑制其表达,从而降低病毒感染对细胞的毒力作用,以减弱细胞对病毒的免疫作用.但miR-H4-5p是否可靶向作用于宿主细胞基因目前仍不十分清楚.本研究证明,miR-H4-5p可通过靶向细胞周期依赖性激酶(cyclin-dependent kinase-like 2,CDKL2)基因表达抗防线菌素D(actinomycin D,Act D)诱导的非洲绿猴肾上皮细胞(African green monkey kidney cells,Vero)细胞凋亡.生物信息学方法在线预测miR-H4-5p潜在靶基因CDKL2的结合位点,并构建双萤光素酶报告系统检测miR-H4-5p靶向作用.数据表明,miR-H4-5p可有效抑制萤光素酶的表达.q PCR和Western印迹数据表明,miR-H4-5p可在mRNA水平和蛋白水平抑制CDKL2表达.构建过表达载体pmR-mcherry/miR-H4-5p(cherry/H4-5p),将cherry/H4-5p与pmRmcherry空质粒转染至Vero细胞,转染24 h后加入终浓度为1μg/m L放线菌素D诱导细胞凋亡.MTT法、流式细胞术和Western印迹检测Bax、Bcl-2表达.数据表明,miR-H4-5p可抑制Act D诱导的Vero细胞活性降低.本实验提示,miR-H4-5p可通过靶向调节宿主细胞基因抑制细胞凋亡,可能以此方式共同参与HSV-2潜伏感染的建立.但是这种抑制凋亡作用的通路及其机制目前仍不清楚,miR-H4-5p是否可靶向更多的宿主基因仍需要进一步实验验证.

GDNF和HSV-GDNF对体外培养发育的大鼠骨骼肌卫星细胞Bcl-2表达的影响

为了进一步探索治疗神经系统损伤的新途径 ,本研究用传代培养的骨骼肌卫星细胞加入胶质细胞源性神经营养因子(GDNF )和单纯疱疹病毒介导的 GDNF(HSV-GDNF) ,取培养 2、4、8、16、2 4、48、72 h的细胞进行 Bcl-2单克隆抗体的免疫组织化学反应 ,观察了 GDNF和 HSV-GDNF对体外培养发育的大鼠骨骼肌卫星细胞 Bcl-2表达的影响。结果发现 :GDNF、HSV-GDNF组的肌卫星细胞 Bcl-2表达较对照组明显增强 ,细胞存活数量高于对照组 ,但 GDNF组、HSV-GDNF组两组之间无显著性差异。提示 :GDNF、HSV-GDNF可促进骨骼肌卫星细胞的增殖、分化 。

皱瘤海鞘提取物对阴道感染HSV-2小鼠保护作用及机制

目的探讨皱瘤海鞘提取物体内抗HSV-2的作用及机制。方法应用阴道感染HSV-2的小鼠模型,采用形态学方法观察皱瘤海鞘提取物对小鼠生殖器疱疹的保护作用,分别用流式细胞术和ELISA方法分析小鼠外周血T细胞比率,IL-2,IFN-γ,IL-4和IL-10水平以探讨皱瘤海鞘提取物抗HSV-2感染机制。结果皱瘤海鞘提取物能减少阴道感染HSV-2小鼠生殖道的损伤,能增强小鼠CD4^+T细胞、CD8^+T细胞免疫功能,使CD4^+/CD8^+T细胞比值恢复平衡状态,能提高小鼠血清IL-2,IL-4,IL-10表达。结论皱瘤海鞘提取物在体内对HSV-2感染具有一定治疗作用,作用机制之一是通过调节小鼠的免疫功能。

4-苯乙烯磺酸马来酸酐共聚物抑制HSV-2感染研究

目的:探索4-苯乙烯磺酸马来酸酐共聚物(PSM)对单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)感染细胞或小鼠的抑制作用。方法:建立Vero-ICP10细胞系,通过Luciferase检测不同浓度PSM对感染细胞中HSV-2的抑制作用,并通过In cell western技术检测HSV-2 gD蛋白表达,确定不同PSM浓度对HSV-2 gD蛋白表达的抑制作用;建立HSV-2阴道感染小鼠模型,观察PSM对HSV-2经生殖道感染小鼠的抑制作用。结果:Luciferase实验和In cell western实验结果均表明PSM具有抗HSV-2感染细胞的作用;小鼠模型中,5%的PSM能有效防止小鼠感染HSV-2(P<0.001)。结论:PSM在体内和体外模型中均可以抑制HSV-2感染。

GDNF及HSV-GDNF对坐骨神经损伤大鼠脊髓运动神经元Bcl-2表达的影响

目的 观察胶质细胞源性神经营养因子 (GDNF)及单纯疱疹病毒 (HSV)载体介导的 GDNF(HSV-GDNF)对坐骨神经损伤大鼠脊髓运动神经元 Bcl- 2表达的影响。 方法 分别取坐骨神经损伤后 4d、7d和 14d大鼠(分成对照组、GDNF组和 HSV- GDNF组 )的腰段脊髓 (L4～ 6 ) ,行石蜡包埋、切片 ;用抗 Bcl- 2抗血清进行免疫组织化学染色 ,观察 Bcl- 2免疫反应 (Bcl- 2 - IR)神经元数目 ,并在图像分析仪上对 Bcl- 2 - IR阳性神经元作光密度的色谱分析。 结果 1.坐骨神经损伤后 4d、7d时 ,GDNF组和 HSV- GDNF组损伤侧脊髓运动神经元 Bcl- 2 - IR阳性神经元的数量和平均光密度均明显高于对照组损伤侧。2 .坐骨神经损伤后 14d时 ,对照组、GDNF组和 HSV- GDNF组损伤侧脊髓运动神经元对 Bcl- 2的表达已无明显差别。 结论 GDNF与 HSV- GDNF能够增强坐骨神经损伤大鼠脊髓运动神经元 Bcl- 2的表达 ,减少神经元的退化死亡。

综合医院皮肤性病门诊梅毒HSV-2及HIV感染流行状况分析

目的分析综合医院皮肤性病门诊就诊人群梅毒、HSV-2及HIV感染情况及相关高危因素,为性病综合防治提供依据。方法对2011年9月-2012年9月在我院皮肤性病门诊就诊人群进行梅毒、HSV-2、HIV检测,同时进行问卷调查。结果我院皮肤性病门诊就诊人群梅毒阳性率为19.0%,HSV-2阳性率为31.0%,HIV阳性率为3.7%,女性人群梅毒及HSV-2阳性率均显著高于男性,未使用安全套、多性伴、低学历者的梅毒、HSV-2、HIV阳性率显著增高。结论需加强性病防治知识的普及与教育,提倡安全性行为、重点关注女性人群及低文化人群。