苦瓜茎叶总皂甙的提取及抗HSV-Ⅱ型疱疹病毒作用研究

从苦瓜茎叶提取总皂甙并经体外细胞试验表明:总皂甙在浓度为0.005×10-6～500×10-6g/mL时无细胞毒性;在浓度达62.5×10-6g/mL水平时就表现有一定的抗HSV Ⅱ病毒活性.

汕头市孕妇HSV-Ⅱ感染血清学流行病学调查

目的 调查汕头市孕妇单纯疱疹病毒-Ⅱ（HSV-Ⅱ）感染情况，了解年龄、妊娠时期、妊娠史和文化程度等因素与HSV-Ⅱ感染的关系。方法 任选来本市各大医院妇产科就诊的孕妇1740例，采用ELISA法检测血清中HSV-Ⅱ抗体。结果 ①在1740例孕妇中，HSV-Ⅱ感染率为23.6％；②不同妊娠时期HSV-Ⅱ感染率差异无显著性（P〉0.05）；③26～35岁年龄组孕妇、有异常妊娠史、文化程度低的孕妇HSV-Ⅱ感染率高（P〈0.05）。结论 对孕妇进行HSV-Ⅱ感染的血清学监测，有利于识别有生殖器疱疹（GH）危险因素的孕妇和亚临床型孕妇，对预防新生儿HSV感染、降低流产、早产和死产的发生具有十分重要的意义。

10株分泌HSV-Ⅱ型单克隆抗体的杂交瘤细胞系的建立

用HSV-ⅡUW268株免疫BALB/c鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合,经筛选、克隆化后获得10株分泌抗HSV-ⅡUW268株单克隆抗体的细胞系。其中1株仅与HSV-ⅡUW268株发生特异免疫反应,9株与HSV-Ⅱ和HSV-IF_(17)均发生免疫反应。用免疫沉淀试验检测单克隆抗体的Ig类型为IgG_1。保存的杂交瘤细胞仍能稳定地分泌抗HSV-ⅡUW268株的单克隆抗体。

IL-18与HSV-2gD模拟抗原表位DNA疫苗的免疫效果观察

目的:研究串联重组核酸疫苗pcDNA3.1-IL-18-HSVP6和pcDNA3.1-IL-18-HSVNP6对机体的免疫效果。NP6为与HSV-2gD模拟抗原P6最相似的天然抗原表位序列(Accession Number:E00394)。方法:将构建的真核表达质粒pcDNA3.1-IL-18、pcDNA3.1-IL-18-HSVP6和pcDNA3.1-IL-18-HSVNP6肌内注射免疫接种BALB/c小鼠3次,每次间隔1周。末次免疫后1周眼眶静脉采血,ELISA法检测小鼠血清特异性抗体滴度、IFN-γ及IL-18含量;末次免疫后一月,处死小鼠,无菌分离脾脏,MTT法测定脾淋巴细胞增殖率。结果:重组核酸疫苗pcDNA3.1-IL-18-HSVP6免疫小鼠后可刺激血清特异性抗体的产生,诱导分泌较高水平的IFN-γ和IL-18。可促进小鼠脾淋巴细胞的增殖。结论:重组核酸疫苗pcDNA3.1-IL-18-HSVP6能诱导较强的细胞免疫和体液免疫,从而为构建更加有效的HSV-2DNA疫苗奠定了良好的基础。

青羊参多糖硫酸酯体外抗单纯疱疹病毒Ⅱ型活性研究

目的体外测定青羊参多糖硫酸酯抗单纯疱疹病毒Ⅱ型的活性。方法采用MTT法检测化合物对疱疹病毒感染Vero细胞的保护作用。结果青羊参多糖硫酸酯体外抗HSV-Ⅱ的EC50为69.9μg/m l,治疗指数为103。结论在体外,青羊参多糖硫酸酯有较显著的抗HSV-Ⅱ的作用。

应用ELISA方法检测单纯疱疹病毒-Ⅱ型抗体的研究

目的了解广东省汕头市人群单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-Ⅱ)的感染状况。方法采用ELISA方法检测HSV-ⅡIgM和IgG抗体。结果性传播疾病(性病)患者的抗体阳性检出率:HSV-ⅡIgM为16.2%(88/544),HSV-ⅡIgG为62.9%(324/544);正常对照组的抗体阳性检出率:HSV-ⅡIgM为3.3%(2/60)、HSV-ⅡIgG为41.7%(25/60)。两组的阳性检出率,患者组明显高于对照组(P<0.01)。结论不同人群HSV的感染状况不同;正常人群中存在HSV-Ⅱ感染,HSV-Ⅱ是性病的重要病原体之一。

小鼠MIP-1α真核表达质粒的构建及在HSV-II核酸疫苗中的应用

目的构建小鼠巨噬细胞炎性蛋白-1α(MIP-1α)的真核表达质粒,观察其作为分子佐剂对单纯疱疹病毒II型(HSV-II)DNA疫苗免疫效果的影响。方法以LPS刺激RAW264.7细胞提取总RNA。采用RT-PCR扩增出MIP-1α基因的全部编码序列,利用克隆载体pUCm-T,将其亚克隆入pcDNA3中,构建出小鼠MIP-1α的真核表达质粒Pm;将其转染COS-7细胞,并用Boyden趋化小室法检测MIP-1α的生物学活性。然后用其与HSV-IIgD的DNA疫苗一起免疫BALB/c小鼠,检测免疫小鼠的特异性抗体、脾T细胞增殖反应及病毒攻击小鼠后对小鼠的保护率,观察MIP-1α对HSV-IIDNA疫苗免疫效果的影响。结果成功构建了小鼠MIP-1α的重组真核表达质粒;免疫BALB/c小鼠发现,其作为分子佐剂可加强HSV-IIgDDNA疫苗的免疫效果。结论小鼠MIP-1α可作为HSV-IIgDDNA疫苗的分子佐剂,为研制新型有效的HSV-IIDNA疫苗提供一定的依据。

大黄提取液体外抗单纯疱疹病毒Ⅱ型作用的实验研究

目的:研究大黄提取液在体外抗单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-Ⅱ)的作用。方法:用hela细胞做体外培养实验,以不同剂量的大黄提取液作用于病毒复制周期的各个阶段,以病毒半数感染量(TCID50)、细胞病变(CPE)、MTT染色细胞保护率(MTT法)作为评价指标,判断药效,对大黄提取液抗HSV-Ⅱ作用进行评价。结果:大黄提取液对hela细胞的增殖无明显作用,且对hela细胞毒性极低,对病毒有直接灭活作用;可干扰病毒向宿主细胞吸附,还可有效抑制病毒复制。结论:大黄提取液在体外对HSV-Ⅱ有显著的抑制和杀伤作用,并且有效抑制病毒复制。

HSV-2gD模拟抗原表位、HBsAg与IL-18融合蛋白DNA疫苗的免疫效果观察

目的:研究串联重组核酸疫苗pc(pcDNA3.1)-S(HBsAg)-P6-IL18和pc(pcDNA3.1)-S(HBsAg)-NP6-IL18对机体的免疫效果,P6是我们前期采用噬菌体展示技术筛选出的HSV-2gD的模拟抗原表位,NP6为与HSV-2gD模拟抗原表位P6最相似的天然抗原表位序列。方法:分别将空质粒pcDNA3.1(阴性对照组)和构建的真核表达质粒pc-S-P6-IL18和pc-S-NP6-IL18肌内注射免疫接种BALB/c小鼠3次,每次间隔2周。末次免疫后2周眼眶静脉采血,ELISA法检测小鼠血清特异性抗体滴度、IFN-γ及IL-18含量;末次免疫后一月,处死小鼠,无菌分离脾脏,用刀豆蛋白A刺激淋巴细胞,采用MTT法测定脾淋巴细胞增殖率。结果:重组核酸疫苗pc-S-P6-IL18和pc-S-NP6-IL18免疫小鼠后可刺激血清特异性抗体(抗HBsAg抗体和抗HSV-2gD模拟表位抗体)的产生,与阴性对照组相比可诱导分泌较高水平的IFN-γ和IL-18,可促进小鼠脾淋巴细胞的增殖。结论:重组核酸疫苗pc-S-P6-IL18和pc-S-NP6-IL18能诱导较强的细胞免疫和体液免疫,可用于今后预防HBV和HSV-2感染的研究。

孕妇单纯疱疹病毒Ⅱ型感染的分子流行病学调查

采用ＤＮＡ聚合酶链反应即ＰＣＲ法调查了大连市８００名孕妇和２００名已婚非妊娠期妇女（作对照组）宫颈ＨＳＶ－Ⅱ型感染情况。结果表明孕妇组感染率为１８．０％，对照组感染率为６．０％，总感染率为１５．６％，两组比较有差别（Ｐ＜０．０５），即孕妇的感染率高于对照组。孕妇感染阳性者的异常妊娠结局占１２．５％，感染阴性的异常妊娠结局占０．７６％，两组比较有非常显著差别（Ｐ＜０．０１）。

荧光定量聚合酶链反应检测性病患者感染单纯疱疹病毒Ⅱ的实验研究

[目的]了解泸州地区门诊性传播疾病(STD)患者感染单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-Ⅱ)情况。[方法]采用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)方法检测428例门诊STD患者泌尿生殖道HSV-Ⅱ。[结果]STD患者中HSV-Ⅱ,阳性率为22.43%;316例男性患者中,阳性率22.47%;女性患者中,阳性率16.96%。定量测定显示:STD患者HSV-Ⅱ病毒载量最高9.65×107 copies/ml,最低1.56×102 copies/ml。[结论]FQ-PCR检测技术具有简便、快捷、准确、特异性强的特点,有较高的临床实用价值,可作为临床诊断感染HSV-Ⅱ病毒的依据。

单纯疱疹病毒Ⅱ型对HaCaT细胞表达KGF和TGF-α的影响

目的:探讨HaCaT细胞在HSV-II刺激前后角质细胞生长因子(keratinocyte growth factor,KGF)和转化生长因子α(Transforming growth factor-α,TGF-α)的分泌变化及意义。方法:以VERO细胞进行HSV-II扩增;采用RT-PCR和荧光实时定量PCR检测HSV-II感染HaCaT细胞前及感染后24h、48h、72hKGF和TGF-α的分泌量。结果:HaCaT细胞可自分泌KGF和TGF-α;感染HSV-II后,KGF明显升高,而TGF-α的分泌与对照组相比差异无统计学意义。结论:HaCaT细胞可以自发分泌KGF和TGF-α;KGF可能参与HSV-II感染角质形成细胞(keratinocyte,KC)后皮肤的修复过程;而TGF-α在此过程中不起主要作用。

α27基因特异性siRNA对单纯疱疹病毒Ⅱ型感染宿主细胞的影响

目的探讨在RNA干扰技术条件上,干扰α27基因表达对单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-Ⅱ)宿主细胞的影响。方法体外合成四对α27基因特异性si RNA(R1、R2、R3、R4组)和阳性、阴性对照si RNA,用Lipofectamine2000转染Vero细胞后接种HSV-Ⅱ,感染后用MTT比色法分别于12、24、36、48、60、72 h测定细胞的存活情况。结果转染了特异性si RNA的细胞OD值较空白组高,细胞存活情况较好,其中R2和R4组存活情况更好。结论α27基因特异性si RNA对宿主细胞具有保护作用。按照同样设计原则合成的不同序列si RNA,其抑制效果存在明显差异。

单纯性疱疹病毒Ⅱ型母婴垂直传播初步研究

目的 :研究孕妇及胎儿单纯疱疹病毒 型 (HSV- )的感染及其母婴传播。方法 :采用聚合酶链反应法 (PCR)对 5 74例妊娠晚期孕妇的宫颈分泌物测 HSV- 型 DNA;用酶联免疫吸附法 (ELISA)对其中的 5 3 1例孕妇分娩时抽取母血及新生儿脐血测 HSV- 型Ig G、Ig M抗体。结果 :孕妇血 HSV- 型的 Ig G阳性检出率为 3 7.48%、Ig M阳性检出率为 1 0 .92 % ;胎儿脐血 HSV- 型的 Ig G阳性检出率为 2 9.3 8%、Ig M阳性检出率为2 .6 4 % ;孕妇宫颈分泌物 HSV- 型阳性检出率为 0。新生儿畸形 1例 ,为先天性耳聋。结论 :妊娠晚期孕妇存在 HSV- 的活动感染 。

复方空心莲子草的抗单纯疱疹病毒作用

目的:研究复方空心莲子草的抗HSV-Ⅱ病毒作用。方法:采用HeLa细胞对复方空心莲子草进行细胞毒性实验,并观察其对病毒所致细胞病变(CPE)的抑制作用。结果:药物浓度为588μg/ml时对细胞的抑制率为50%,药物浓度≤84μg/ml时对细胞无毒性作用;药物浓度≥42μg/ml时对不同滴度病毒所致细胞病变(CPE)均有抑制作用。结论:复方空心莲子草在体外有明显的抗HSV-Ⅱ作用,剂量越大抗病毒作用越明显。

应用PCR和免疫组化SP法对宫颈糜烂相关病毒感染的调查

目的测定宫颈糜烂患者中人乳头瘤病毒(HPV)、单纯疱疹病毒(HSV-Ⅱ)和人巨细胞病毒(HCMV),探讨其感染与宫颈糜烂发生的关系。方法运用聚合酶链反应(PCR)和免疫组化SP法测定北京,江苏,山东,西安四个地区同一宫颈糜烂患者病毒感染情况,正常宫颈设为对照组。结果1)PCR检测四个地区323例宫颈糜烂患者中HPV6.11、HPV16.18,HSV-Ⅱ及HCMV阳性率分别为17.6%、34.7%、26.6%、19.2%,50例对照组分别为2.0%、6.0%、4.0%、2.0%;免疫组化SP检测HPV,HSV-Ⅱ及HCMV阳性率分别为38.1%、18.6%、15.5%,50例对照组分别为6.0%、4.0%、2.0%。2)PCR检测中HPV6.11合并HSV-Ⅱ及HCMV的感染阳性率为4.9%、3.7%,HPV16.18合并HSV-Ⅱ及HCMV的感染阳性率为8.1%、6.8%;免疫组化SP检测HPV合并HSV-Ⅱ及HCMV的感染阳性率为6.2%、4.0%。各对照组中各病毒混合感染率为0%。结论1)宫颈糜烂患者中HPV、HSV-Ⅱ及HCMV阳性率高于对照组(P<0.05)。2)宫颈糜烂患者中的病毒感染以HPV为主(P<0.01)。3)宫颈糜烂患者中可出现几种病毒混合阳性,临床中有必要加强宫颈糜烂患者HSV-Ⅱ及HCMV的检测,避免HSV-Ⅱ及HCMV与HPV协同致癌的作用。4)PCR和免疫组化SP二种检测方法测得的阳性率经统计学处理差异无显著意义(P>0.05),故临床可根据具体情况选用任一方法对病变组织作出病毒病因诊断。

汕头市孕妇生殖器疱疹血清流行病学初步调查研究

目的:调查汕头市不同年龄段、不同孕期、不同妊娠史和不同职业孕妇血清中HSV-2特异性抗体IgG的存在情况.方法:随机选取汕头市520例无症状的正常孕妇进行研究,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测孕妇血清中HSV-2特异性抗体IgG.结果:共调查520例孕妇,阳性率为26.2%(136/520),不同孕期感染率无显著性差异;年龄在26～35岁孕妇、有异常妊娠史、文化程度低的孕妇HSV感染的危险性高.结论:孕妇HSV-2感染率高,对孕妇进行HSV-2感染的血清学监测,有利于识别有生殖器疱疹危险因素的孕妇和亚临床型孕妇,降低漏诊率,对预防新生儿HSV感染、降低流产、早产和死产的发生具有十分重要的意义.

单纯疱疹病毒感染患者抗原和抗体检测结果分析

目的探讨单纯疱疹病毒（HSV-Ⅱ）感染患者抗原、抗体的相互关系。方法对89例皮肤性病门诊的疑似女性病人的疱液或分泌物和血清用酶联免疫法（ELISA）进行抗原抗体检测。结果抗原阳性的患者，其抗体不一定阳性，抗原阴性的患者，其抗体检测也不一定阴性，对于性病门诊患者，最好同时检测抗原、抗体，以便临床确诊。结论ELISA法检测疱疹病毒抗原抗体具有简便、快速、特异的特点。

女性梅毒患者HSV-ⅡIgG抗体检测的临床分析

目的探讨女性梅毒患者HSV-Ⅱ感染的情况。方法对80例确诊为梅毒的女性患者进行HSV-ⅡIgG抗体检测。结果HSV-ⅡIgG抗体阳性者31例,占38.75%。结论梅毒患者常合并HSV-Ⅱ的感染。

乳头瘤病毒、单疱病毒感染及其与宫颈癌前病变的相关性分析

目的探讨人乳头瘤病毒（HR-HPV，HPV6、11）、单纯疱疹病毒II型（HSV—Ⅱ）感染及其-9宫颈癌前病变的关系。方法收集1876份宫颈细胞学样本，采用实时荧光PCR技术测定HR—HPV，HSV-Ⅱ和HPV6、11的核酸，并对其宫颈组织进行细胞学检测。结果18—25岁、26—35岁、36—55岁组HPV6、11感染率分别为7．68％、4．09％和2．94％，HR—HPV感染率分别为11．61％、11．78％和9．96％，HSV—Ⅱ感染率分别为3．53％、3．11％和3．19％。不同程度宫颈病变中HR—HPV感染率分别为：未出现异常细胞（NILM）4．19％（68／1621），不典型鳞状细胞（ASCUS）55．85％（64／115），鳞状上皮内低度病变（LSIL）83．99％（42／50），鳞状上皮内高度病变（HSIL）92．85％（39／42），鳞状细胞癌（SCC）100％（3／3）。宫颈细胞学异常组HR—HPV与HPV6、11合并感染率显著高于正常组（P〈0．05）。HPV6、11感染率随着年龄增高而下降，HR—HPV感染率-9宫颈病变严重程度呈正相关（P〈0．05）。结论HPV6、11感染率存在年龄差异性，HR—HPV和HPV6、11混合感染更易导致宫颈癌前病蛮．