千金藤素抗单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)初探

目的 :体外测定千金藤素抗单纯疱疹病毒Ⅰ型的作用 ,为筛选新型抗病毒药物提供参考依据。方法 :用不同稀释度的千金藤素抑制单纯疱疹病毒Ⅰ型对Vero细胞的感染作用 ,4 8h后观察细胞病变 (CPE)效应。结果 :千金藤素能明显抑制HSV 1对Vero细胞的致病变作用 ,使细胞存活率升高。结论 :千金藤素有较显著的抗HSV 1的作用 ,且抗病毒作用是多方面的 ,是一种具有潜在开发前景的药物。

表达降钙素基因相关肽的单纯疱疹病毒Ⅰ型扩增子载体免疫效果观察

目的探讨重组pUPO-Δγ134.5-CGRP扩增子对免疫系统的作用。方法用重组扩增子感染BALB/C小鼠,分离血清及淋巴细胞,流式细胞仪法、免疫组化法、LDH法、分别检测外周血CD4、CD8分类、TCR、NK细胞、CTL细胞以及LAK细胞活性杀伤活性。结果重组扩增子明显增强了机体的免疫力。结论该重组扩增子具有增强机体免疫力的作用。

广谱抗病毒抗生素17997对HSV-1形态学的影响

目的探讨新一类抗病毒抗生素17997的抗病毒的作用机制。方法比较不同浓度的17997和ACV对HSV_Ⅰ形态学的影响。结果在Vero细胞核内和胞浆中发现许多HSV_Ⅰ空心衣壳。当17997的浓度达到几乎完全抑制HSV_Ⅰ复制时 ,仍没有看到明显的细胞损害。结论17997主要抑制病毒DNA合成 ,而且没有明显的细胞毒性。

治咳川贝枇杷滴丸体外抗单纯疱疹病毒Ⅰ型的作用

目的:研究治咳川贝枇杷滴丸体外抗单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-Ⅰ)的作用。方法:采用CPE法和MTT法在细胞水平上检测治咳川贝枇杷滴丸抗HSV-Ⅰ的作用;观察不同时间段的含药血清抑制HSV-Ⅰ的情况,在血清水平上进一步验证治咳川贝枇杷滴丸抗HSV-Ⅰ的作用。结果:细胞水平上,治咳川贝枇杷滴丸对HSV-Ⅰ有直接灭活作用、侵入阻断作用、生物合成抑制作用,最高抑制率分别为75.41%、60.76%和56.71%(P<0.05)。在TC0范围以下,随着药物浓度的增加,病毒抑制率明显升高,呈量效关系。血清水平上,含药血清具有明显的抗HSV-Ⅰ作用,抑制作用呈一定的浓度、时间依赖性。结论:治咳川贝枇杷滴丸具有一定的体外抗单纯疱疹病毒Ⅰ型作用。

人中性粒细胞多肽HNP_(1,3)体外抗单纯疱疹病毒Ⅰ型的作用

体外观察人中性粒细胞多肽1,3(Humanneutrophilpeptide,HNP1,3)及阿昔洛韦(Acyclovir,ACV)对单纯疱疹病毒-Ⅰ型(Herpessimplexvirus1,HSV-1)的抑制作用。以Vero细胞为靶细胞,用各种浓度HNP1,3与游离病毒颗粒(直接失活组)及感染病毒后的靶细胞(复制抑制组)进行相互作用,镜下观察各药物对HSV-1致细胞病变效应的抑制作用,并采用ELISA法测定感染48h后药物对HSV-1囊膜糖蛋白分泌的抑制作用。MTT法检测各药物对细胞的毒性作用。结果显示直接失活组中,HNP1,3可使HSV-1的致细胞病变效应减轻,对HSV-1直接失活的50%有效浓度(EC50)为8.1μg/mL、10.03μg/mL;复制抑制组中,ACV使HSV-1的致细胞病变效应减轻,EC50为0.68μg/mL。MTT检测结果表明HNP1,3在治疗浓度范围内无明显细胞毒性。以上结果表明HNP1,3除具有较强的抗菌作用和抗人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(Humanimmunodeficiencyvirus1,HIV-1)活性外,还能失活HSV-1病毒颗粒,从而逆转病毒及其蛋白的病毒效应(致细胞病变)和抑制病毒蛋白质的合成。

编码糖蛋白B的裸基因疫苗诱导单纯疱疹病毒Ⅰ型感染小鼠的体液和细胞免疫

[目的]用编码单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)糖蛋白B的pDNA转染小鼠,研究基因疫苗治疗感染性疾病的有效性,并分析免疫反应.[方法]采用血管内注射方法,将含有不同剂量、不同pDNAs的生理盐水注入Balb/c小鼠体内,1周后行再次免疫,观察以不同组合pDNA进行免疫的实验组和对照组小鼠被致死剂量HSV-1感染后生存率间的差异.通过潜伏感染的检测、血清中细胞因子水平的测定、细胞毒性反应的测定及中和实验评价免疫效果.[结果]接种pG.gB或接种pGEG.gB的小鼠,与相应对照组比较,生存率和诱导产生中和抗体的效价与剂量呈正相关,pGEG.gB免疫组对P815.gB细胞有显著的细胞毒性作用,pGEG.gB免疫小鼠的脾细胞增殖反应显著强于pG.gB免疫的小鼠;pG.gB和pGEG.gB免疫后的小鼠血清中IL-12和IFN-γ水平均显著升高.[结论]裸pDNA的经小鼠尾静脉免疫可诱导HSV-1感染小鼠的体液和细胞免疫应答,对小鼠HSV-1急性感染有明显的预防和治疗作用,且含有EBNA1和oriP的EBV质粒载体明显增强CTL活性和增殖反应.

表达降钙素基因相关肽的单纯疱疹病毒Ⅰ型扩增子载体的构建、包装和扩增

目的对单纯疱疹病毒Ⅰ型扩增子质料装载降钙素基因相关肽,并进行包装和扩增。方法分别钓取pac基因和γ134.5基因,克隆入pMD18-T载体中。pSV载体经HindⅢ和BamHⅠ双酶切,获得lacZ片段,自身环化形成pUPO-γ134.5-lacZ。合成CGRP基因序列,将此基因替换pUPO-γ134.5-lacZ质粒中的lacZ基因,插入γ134.5基因位点中,即pUPO-Δγ134.5-CGRP。再用单纯疱疹病毒温敏株辅助在BHK细胞中包装、扩增,通过检测lacZ的表达反映扩增子病毒滴度。结果酶切鉴定证实重组子构建成功。重组扩增子质粒的包装、扩增由BHK细胞的形态变化和X-gal原位检测载体lacZ的表达证实。扩增子假型病毒滴度达3.5×105TU/ml。结论本研究构建、包装、扩增的携带降钙素基因相关肽的假型病毒有较高感染性,这种扩增子病毒可作为实验研究的有力工具。

单纯疱疹病毒Ⅰ型在正常人眼视网膜潜伏的初步研究

目的研究正常人视网膜是否有单纯疱疹病毒Ⅰ型潜伏。方法采用正常健康志愿者捐献的新鲜眼球15个。1／3眼球组织进行免疫组化染色，排除HSV-1急性感染。取出剩余的视网膜，每个眼球1／3视网膜组织进行离心，取上清液与Vero细胞共培养，另外2／3视网膜组织提取DNA作PCR和凝胶电泳检测HSV-1的DNA和LAT。结果15个标本免疫组化染色皆阴性，Vero细胞与视网膜组织上清液共培养结果为阴性，未观察到细胞病理学改变，PCR检测15个标本中10、11号标本的HSV-1DNA阳性，HSV-1LAT阴性，其他13个标本PCR枪测HSV-1DNA阴性．HSV-1LAT阴性．结论正常人视网膜存左HSV-1DNA．

单纯疱疹病毒Ⅰ型基因治疗载体的快速构建

背景:单纯疱疹病毒Ⅰ型载体因具有独特的优点目前被广泛应用,但其构建尚缺乏一种快速有效的方法。目的:利用Cre/Loxp高效重组系统构建单纯疱疹病毒Ⅰ型载体。方法:分离单纯疱疹病毒HSV-1,将含Cre重组酶的c66-SV40-cre质粒转染Vero细胞,构建一株带有Loxp位点的重组HSV-1框架载体HSVLoxp。构建穿梭载体pShuttle-SV40-Cre-Loxp-IRES及重组单纯疱疹病毒Ⅰ型载体HSV-GDNF,用HAT培养基筛选出阳性毒株后用GDNF引物做PCR鉴定,扩增培养后测定滴度。结果与结论:成功构建pHV-TK-GFP质粒,并在Vero细胞内发生重组,分离出缺失了Us3基因的重组病毒HSVtk-Loxp-GFP01。成功构建HSV-1框架载体HSVLoxp及穿梭载体pShuttle-SV40-Cre-Loxp-IRES,成功获得GDNF基因,并将其转移到了HSV-1基因组上,成功构建了表达GDNF的单纯疱疹病毒HSV-1载体,测定其滴度约为2.25×106IU/mL。

单纯疱疹病毒Ⅰ型最新研究进展——病原学、防控及应用

单纯疱疹病毒Ⅰ型(herpes simplex virus 1,HSV-1)感染可引起广泛的临床症状,包括口腔感染造成的组织损伤,以及严重的中枢神经系统感染造成的脑炎。HSV-1的研究每年都有突破性进展,其病原学、感染引致慢性炎症、抗病毒制剂,以及作为微生物工具用于治疗肿瘤的研究,引起了业界同行的广泛兴趣。本文对HSV-1近几年的研究进展进行综述,为进一步了解该病毒致病机理及应用价值提供参考。

用B病毒ELISA和人单纯疱疹病毒Ⅰ型酶免疫法检测食蟹猴血清中B病毒相关抗体的研究

采用B病毒 (BV)作为抗原的ELISA法和人单纯疱疹病毒I型 (HSV -1 )的酶免疫 (EIA)法分别检测食蟹猴血清中BV抗体和BV相关抗体 ,结果BVELISA法和HSV -1EIA法阳性检出率均为 1 0 9% (5 /46) ,两者符合率为 1 0 0 %。这一结果为食蟹猴的BV抗体监测和进出口检验提供参考。

鸭跖草不同提取方法提取物的体外抗病毒实验研究

目的:为建立鸭跖草抗病毒谱-效相关评价系统,对鸭跖草不同提取方法提取物体外抗病毒活性进行筛选,最后选择鸭跖草75%乙醇冷浸提取物抗呼吸道合包病毒(RSV)活性和鸭跖草蒸馏水回流提取物抗单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)活性进行下一步研究。方法:采用体外抗病毒实验CPE法结合MTT染色法,以半数治疗浓度(EC50)和半数细胞毒性浓度(TC50)并以治疗指数TI值作为评价指标,观察鸭跖草不同提取物对肠道病毒71型(EV71)、单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)和呼吸道合胞病毒(RSV)的抑制作用。结果:中药材鸭跖草对于肠道病毒71型(EV71)病毒未见明显效果;75%乙醇冷浸的鸭跖草浸取液对呼吸道合胞病毒(RSV)病毒有较好的抗病毒效果,并且测得鸭跖草75%乙醇冷浸浸取液抗呼吸道合胞病毒(RSV)的治疗指数为21.1,阳性对照药治疗指数为29.8;采用蒸馏水提取的鸭跖草提取液对单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)病毒有较好的抗病毒效果,且测得鸭跖草蒸馏水回流提取物抗单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)的治疗指数为19.6,阳性对照药治疗指数为36.7。结论:鸭跖草在抗呼吸道合胞病毒(RSV)和单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)有一定的效果,为进一步进行鸭跖草抗病毒研究和建立鸭跖草谱-效模型提供了科学依据和数据支持。

玉屏风散对单纯疱疹病毒性角膜炎模型小鼠细胞免疫功能的影响

目的观察中药玉屏风散对不同感染时期单纯疱疹病毒性角膜炎(herpes simplex keratitis,HSK)小鼠模型细胞免疫水平的影响,探讨其抗HSK复发的作用及其机制。方法采用流式细胞术分析不同感染时期模型小鼠脾脏+、+、+淋巴细胞表达水平,ELISA法检测血清γ-IFN、IL-2、IL-4及IL-10水平改变。观察并比较玉屏风散对不同感染时期HSK小鼠模型CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞和血清γ-IFN、IL-2、IL-4及IL-10水平改变的影响。结果与正常对照组比较,HSK潜伏期(PI28d)和复发期(UVB3d)模型小鼠CD3+、CD4+T淋巴细胞表达明显降低,CD8+T淋巴细胞表达明显升高;外周血Th1型细胞因子IL-2、γ-IFN水平显著降低,Th2型细胞因子IL-4、IL-10水平显著增高。CD4+T淋巴细胞表达的降低与IL-2、γ-IFN水平的降低呈显著正相关。在同一感染期内,玉屏风散治疗组、玉屏风散+阿昔洛韦治疗组治疗末期与治疗开始时比较,HSK模型小鼠体内CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞表达水平和外周血Th1型细胞因子IL-2、γ-IFN,Th2型细胞因子IL-4、IL-10表达水平均有明显改善,并显著优于单纯阿昔洛韦治疗组及空白对照组。结论玉屏风散具有提高HSK潜伏期和复发期模型小鼠体内CD3+、CD4+T淋巴细胞表达,降低CD8+T淋巴细胞表达,改善CD4+/CD8+比值水平,调节机体细胞免疫功能的作用。

直杆桉果实提取物体外抗单纯疱疹病毒和乙型肝炎病毒的实验研究

目的:研究3种不同溶剂的直杆桉果实提取物体外抗单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)和乙型肝炎病毒(HBV)的活性。方法:采用MTT法检测药物毒性,CPE法与空斑减数实验检测药物抗HSV-1活性;采用ELISA法检测药物对HepG2.2.15细胞分泌的乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和乙型肝炎E抗原(HBeAg)的抑制作用。结果:直杆桉叶果实的醋酸乙酯提取物(P18-E1)和甲醇提取物(P18-E2)无明显抗HSV-1的活性,水提物(P18-E3)能明显抑制HSV-1的致病变作用,其TC50为69.20 mg/mLI,C50为126.77μg/mL,治疗指数为545.87;3种不同溶剂的提取物对HepG2.2.15细胞分泌的HBsAg和HBeAg均无明显抑制作用。结论:直杆桉果实的水提物(P18-E3)具有显著的抗HSV-1活性,主要是对病毒有直接灭活作用,也能影响病毒对细胞的吸附。初步推测其抗HSV-1活性的机理是影响病毒的囊膜结构从而使之失活。

阿昔洛韦联合羟基脲抗疱疹病毒的研究

目的研究抗肿瘤药物羟基脲(HU)与抗病毒药物阿昔洛韦(ACV)联用抗疱疹病毒的协同增效作用。方法体外实验应用VERO细胞培养法及MTT染色法进行实验,以Calcusyn软件计算、分析实验结果;体内实验采用单纯疱疹病毒I型感染的兔角膜炎实验模型,用临床裂隙灯观察不同用药情况下兔角膜病变,进行Trouzdale评分,并分离病毒、滴定度及病理检查。结果体外实验结果显示ACV∶HU为1∶312.5及1∶100时,两药为协同作用;ACV∶HU为1∶50、1∶25、1∶10时,两药为拮抗作用。配比为1∶300的阿昔洛韦和羟基脲联合治疗病毒性角膜炎,其疗效与0.1%的ACV相当。结论羟基脲对阿昔洛韦抗HSV-I活性在一定比例条件下,体内、外均有增效作用。

重组抗原在HSV-Ⅰ感染ELISA检测中的应用

目的 用单纯疱疹病毒(HSV)重组蛋白作为包被抗原建立一种特异性和灵敏性较高的ELISA方法。方法 将重组糖蛋白D(gD)和HSV Ⅰ分别作为包被抗原,检测5 7份临床标本,同时用国产和德国试剂盒进行检测;将德国试剂盒作为金标准,另外三者检测结果在特异性、灵敏性和符合率等方面与其进行比较。结果 与德国试剂盒相比,在特异度、敏感度、符合率方面,重组抗原分别为5 7 1%、82 0 %、78 9%。病毒抗原分别为5 7 1%、78 0 %、75 4 % ;国产试剂盒分别为10 0 0 %、4 8 0 %、5 4 4 %。重组蛋白重复性实验结果经统计学处理差异无统计学意义(P >0 0 5 )。结论 用酵母菌表达的HSV Ⅰ重组gD蛋白作为包被抗原进行ELISA检测是一种敏感、特异的方法,具有较大的应用价值。

复方大黄液对兔病毒性角膜炎眼房水免疫因子的影响

目的 :观察和分析中药复方大黄液对兔病毒性角膜炎模型眼房水免疫因子的影响。方法 :2 3只日本大耳朵种兔 (雄性 12只 ,雌性 11只 ) ,经戊巴比妥静脉麻醉后 ,用手术刀片刮去角膜上层组织 ,随机分成三组 ,按组滴入 0 .2mlHSV 1病毒 (7只 ,14眼 ) ,FSV病毒 (8只 ,16眼 ) ,对照组 (8只 ,16眼 )。一周后HSV组及FSV组见角膜点状、树枝状浸润灶 ,用荧光素染色确认后 ,按每天 5 .4ml/kg体重 ,以复方大黄液灌胃给药 10d ,对照组则用等量生理盐水灌胃。结果 :与对照组比较 ,HSV Ⅰ及FSV组的眼前房水中干扰素、白介素滴度显著升高 (P <0 .0 0 1) ,白细胞计数及分类值下降(P <0 .0 5 ) ,对照组未见到类似的变化。结论 :对兔HSV Ⅰ或FSV病毒性角膜炎模型眼灌胃复方大黄液 ,能刺激其眼前房干扰素。