20(S)-原人参二醇衍生物对HT1080细胞侵袭转移的影响

检测了所合成的20(S)-原人参二醇衍生物GY1和GY2的抗肿瘤活性.GY1对HT1080、SMMC7721、A549的增殖有显著的抑制作用,呈明显的剂量依赖关系,IC50分别为:35.2±0.9 mg/L,29.6±1.1 mg/L,24.1±1.5 mg/L;而GY2并没有表现出的明显的细胞毒作用,其IC50大于100 mg/L.5 mg/L GY1作用48 h可显著降低HT1080细胞对基底膜成分的粘附和侵袭能力,并对细胞的运动能力有一定影响;而相同浓度的GY2虽然对细胞的粘附性和侵袭性有一定影响,但对细胞的运动性却无明显的影响.

基于超高效液相色谱-质谱联用的代谢组学技术对人纤维肉瘤HT1080细胞铁死亡代谢特征的分析

目的:利用代谢组学筛选铁死亡生物标志物,为铁死亡机制探究提供新思路。方法:以HT1080细胞为研究对象,采用细胞活性实验筛选RSL3的染毒条件。利用基于超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱的代谢组学技术对RSL3处理的铁死亡诱导组、RSL3和Fer-1共同处理的铁死亡抑制组以及溶剂对照组进行非靶向代谢组学检测,结合主成分分析、偏最小二乘法判别分析、正交偏最小二乘判别分析比较各组间代谢谱的差异,筛选差异代谢物,并对得到的差异代谢物进行代谢通路分析。结果:选择1.000μmol/L的RSL3作用6 h用于实验。共筛选出7-酮基胆固醇、维生素D3、植烷酸等60个铁死亡相关差异代谢物,并发现甘油磷脂代谢、鞘脂类代谢、谷胱甘肽代谢等通路与HT1080细胞铁死亡密切相关。结论:筛选出的差异代谢物有望作为铁死亡的潜在生物标志物,为进一步探讨铁死亡机制提供线索。

异红藻糖苷对HT1080肿瘤细胞侵袭转移作用的影响

【目的】分析异红藻糖苷(D-Isofloridoside,DIF)对HT1080肿瘤细胞侵袭转移作用的影响。【方法】用MTT法检测细胞存活率,细胞划痕实验检测细胞迁移能力,明胶酶谱实验检测细胞中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的活性,Western blot法检测低氧诱导因子-1α(HIF-1α)蛋白的表达情况,ELISA法检测血管内皮生长因子(VEGF)的释放量,分子对接预测DIF与MMP-2、MMP-9和HIF-1α蛋白的相互作用。【结果】MTT和划痕实验表明DIF对HT1080细胞无明显毒性作用(P>0.05),且能极显著降低肿瘤细胞的体外迁移能力(P<0.01);与对照组相比,随着实验组DIF浓度增加,MMP-2和MMP-9的活性以及HIF-1α和VEGF蛋白的表达极显著减少(P<0.01)。分子对接预测结果表明,DIF与MMP-2、MMP-9和HIF-1α均能形成稳定的氢键,具有相互作用的可能性。【结论】DIF可明显抑制HT1080肿瘤细胞的MMP-2、MMP-9、HIF-1α和VEGF蛋白的表达,表现出很好的抑制肿瘤细胞迁移的活性。

隐丹参酮对人纤维肉瘤HT-1080细胞增殖和凋亡影响

目的隐丹参酮(cryptotanshinone,CTS)是从丹参中分离出的二萜醌类化合物,具有抗炎、抗菌、抗动脉粥样硬化和抗阿尔茨海默病等药理作用。本研究旨在探讨CTS对人纤维肉瘤HT-1080细胞增殖和凋亡的影响及其可能的分子机制。方法以终浓度分别为5、10、20、40和80μmol/L CTS处理HT-1080细胞48h后,CCK-8法检测其对HT-1080细胞活性的影响,流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期,蛋白质印迹法分析Bcl-2、Bax、cleaved Caspase-3、cleaved多腺苷二磷酸核糖聚合酶(poly ADP-ribose polymerase,PARP)、Cyclin D1、Cyclin E、p21^(waf1/cip1)和p27^(kip1)的表达。结果 CCK-8实验结果显示,10～80μmol/L CTS可抑制HT-1080细胞活性,且呈剂量依赖性。流式结果显示,0、10、20和40μmol/L CTS作用HT-1080细胞48h,G_0/G_1期细胞比例分别为(48.2±2.5)%、(53.5±2.2)%、(59.7±2.8)%和(66.3±2.4)%,F=29.705,P<0.001;细胞凋亡率分别为(3.2±1.6)%、(15.7±2.4)%、(26.5±2.8)%和(38.4±2.5)%,F=122.591,P<0.001。蛋白质印迹结果显示,凋亡相关蛋白Bax、cleaved Caspase-3和cleaved PARP表达上调,抗凋亡蛋白Bcl-2表达下调;细胞周期素Cyclin D1和Cyclin E表达下调,细胞周期素依赖性激酶抑制蛋白p21^(waf1/cip1)和p27^(kip1)表达下降。结论 CTS可阻滞HT-1080细胞于G_0/G_1期并诱导其凋亡,从而抑制HT-1080细胞增殖。

雷公藤内酯醇对纤维肉瘤HT-1080细胞表达基质金属蛋白酶的影响

目的研究雷公藤内酯醇(TL)对人纤维肉瘤HT-1080细胞表达基质金属蛋白酶(MMP)-2和-9的影响。方法以终浓度分别为6、12和18nM的TL处理HT-1080细胞72h,未加药物处理细胞为对照组,RT-PCR检测MMP-2和-9mRNA表达,明胶酶谱实验检测MMP-2和-9的活性。结果与对照组比较,18nMTL处理HT-1080细胞72h后,MMP-9的mRNA表达及活性明显下调,但MMP-2的表达及活性无明显变化。结论TL抑制纤维肉瘤HT-1080细胞表达MMP-9。

5-氟尿嘧啶对人纤维肉瘤HT-1080细胞体外增殖的抑制作用

目的观察5-氟尿嘧啶（5-Fu）对人纤维肉瘤HT-1080细胞体外增殖的抑制作用。方法取处于对数生长期的人纤维肉瘤HT-1080细胞，分别加入不同浓度的阿霉素和5-Fu培养，于培养24、72和144h时，采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测定HT-1080细胞的吸光度（A）并计算细胞增殖抑制率，倒置相差显微镜下观察细胞形态的变化，流式细胞仪检测细胞周期。结果10μg/ml 5-Fu处理人纤维肉瘤HT-1080细胞24、72和144h时，HT-1080细胞的增殖抑制率分别为45．9％、64．7％和90．6％；100μg／ml 5-Fu处理人纤维肉瘤HT-1080细胞24、72和144h时，HT-1080细胞的增殖抑制率分别为53．1％、86．4％和93．0％，5-Fu显示出与阿霉素相似的细胞毒作用。经不同浓度的阿霉素和高浓度5-Fu处理后，HT-1080细胞可表现出明显的凋亡特征。流式细胞仪检测结果显示，未处理的HT-1080细胞中，G，期细胞占67．5％，S期细胞占21．2％，G2期细胞占11．3％。随着5-Fu浓度的增加，G1＋S期细胞的比例逐渐增加，当5-Fu的浓度≥1μg／ml时，未再探及G2期细胞。结论5-Fu在体外对人纤维肉瘤HT-1080细胞的增殖有明最的抑制作用，且呈时间和浓度依赖性；5-Fu在高浓度连续给药后表现出与阿霉素类似的抑瘤效果，能将HT-1080细胞阻滞于G1＋S期。

乌苯美司抑制肿瘤细胞侵袭与诱导凋亡的研究

探讨乌苯美司对肿瘤细胞侵袭及凋亡的影响及其剂量关系,探讨其作用机制。采用免疫荧光法检测CD13/APN在HT-1080细胞中的表达;MTT法检测乌苯美司对HT-1080细胞增殖的影响;Annexin V-EGFP/PI双染法检测乌苯美司对HT-1080细胞凋亡的影响;流式细胞术检测乌苯美司对HT-1080细胞周期的影响;运用Ala-pNA为底物,检测乌苯美司对细胞表面氨肽酶活性的抑制作用;Transwell法检测乌苯美司对HT-1080细胞侵袭及运动能力的影响;明胶酶谱法检测乌苯美司对基质金属蛋白酶活性的影响;Western blotting法检测CD13的表达变化。研究结果显示,高浓度的乌苯美司可抑制HT-1080细胞的增殖(IC50:3.8 mg.mL-1),诱导HT-1080细胞的凋亡,将细胞周期阻滞于G1期;在低浓度时乌苯美司即可显著抑制HT-1080细胞的氨肽酶活性(IC50:8.3μg.mL-1),抑制细胞的侵袭能力,但对细胞的运动能力及增殖无影响;乌苯美司对CD13的表达及基质金属蛋白酶的活性无明显影响。以上研究结果表明,乌苯美司在低浓度时可通过直接抑制细胞表面的氨肽酶活性而抑制肿瘤细胞的侵袭;在高浓度时可通过非CD13依赖的途径抑制肿瘤细胞的增殖,诱导细胞凋亡。

力达霉素抑制人纤维肉瘤肺转移的裸鼠活体成像观察

观察力达霉素(LDM)、LDM与甲氨蝶呤(MTX)联合用药对人纤维肉瘤HT-1080LUC实验性肺转移的抑制作用。构建稳定表达荧光素酶的HT-1080细胞株并扩增培养,检测HT-1080LUC细胞的荧光素酶的表达。建立裸鼠人纤维肉瘤HT-1080LUC实验性肺转移模型,并采用活体动物成像系统监测肿瘤的生长情况,观察LDM和MTX的体内抗肺转移瘤活性。结果表明,HT-1080LUC细胞荧光光子量与细胞数呈线性相关,最小可检测的细胞数量为100个/孔。活体成像结果显示,治疗组裸鼠的肺部荧光强度较对照组明显减弱。单独给予LDM 0.025 mg.kg-1、LDM 0.05 mg.kg-1或MTX 0.5 mg.kg-1的肺转移抑制率分别为53.9%、75.9%和70.2%;LDM 0.025 mg.kg-1与MTX 0.5 mg.kg-1联合应用的肺转移抑制率为88.7%,两药相互作用指数CDI=0.82。研究表明,LDM对人纤维肉瘤肺转移有明显抑制作用,与MTX联合用药对肺转移瘤的疗效明显优于单独给药。

可断裂PEG修饰紫杉醇脂质体的制备和体外性质的初步研究

目的制备可断裂PEG修饰的紫杉醇脂质体,探究其被细胞摄取及杀伤肿瘤细胞的能力。方法采用薄膜超声分散法制备可断裂PEG修饰的紫杉醇脂质体,测定其粒径和Zeta电位;用G-50凝胶过滤法进行纯化,并测定其包封率与载药量;以人纤维肉瘤细胞(HT-1080)为细胞模型,考察其摄取能力与杀伤性。结果成功制备了可断裂PEG修饰的紫杉醇脂质体,与不可断裂PEG修饰的紫杉醇脂质体相比,被HT-1080细胞摄取的能力和对细胞的杀伤性都有显著提高。结论可断裂PEG修饰紫杉醇脂质体的制备和纯化工艺简便,其在肿瘤治疗方面的应用具有广阔的前景。