谷氨酰胺对结直肠癌HT-29细胞放射敏感性的影响及机制探讨

目的观察不同浓度谷氨酰胺(glutamine,Gln)对结直肠癌HT-29细胞放射敏感性的影响,并探讨其可能机制。方法体外培养HT-29细胞,将对数生长期的HT-29细胞按照Gln不同浓度设置对照组(2 mmol/L,培养基基础浓度)、实验组Ⅰ(4 mmol/L)、实验组Ⅱ(6 mmol/L)、实验组Ⅲ(8 mmol/L),预处理2 h后给予Co 60源放射。通过CCK-8法检测未放射与放射后不同浓度Gln对细胞活力的影响;克隆形成实验检测放射后不同浓度Gln对细胞放射敏感性的影响;活性氧(ROS)试剂盒检测放射后24 h细胞ROS水平;流式细胞仪检测放射后48 h细胞凋亡率;蛋白印迹法测定放射后各组细胞Nrf2、HO-1、cleaved-Caspase3蛋白的表达水平。结果未放射的HT-29细胞在Gln干预24 h后实验组Ⅱ、实验组Ⅲ细胞活力明显高于对照组、实验组Ⅰ(P<0.05)。HT-29细胞放射24 h后,各实验组细胞活力明显高于对照组(P<0.05);放射后14 d,各实验组细胞克隆形成数均高于对照组(P<0.05);放射后24 h,各实验组ROS水平均低于对照组(P<0.05);放射后48 h,各实验组细胞凋亡率均低于对照组(P<0.05)。实验组ⅠNrf2表达高于对照组(P<0.05);实验组Ⅱ、ⅢNrf2、HO-1表达均高于对照组和实验组Ⅰ(P<0.05),cleaved-Caspase3表达均低于对照组和实验组Ⅰ(P<0.05);实验组Ⅲcleaved-Caspase3表达低于实验组Ⅱ(P<0.05)。结论谷氨酰胺能显著降低HT-29细胞的放射敏感性,其机制与减轻氧化应激损伤和减少细胞凋亡有关,这可能不利于结直肠癌患者放疗。

甘草次酸对大肠癌HT-29细胞化疗增敏作用机制研究

目的:研究甘草次酸增强奥沙利铂对大肠癌HT-29细胞化疗敏感性的作用机制。方法:将大肠癌HT-29细胞分为对照组、甘草次酸组(甘草次酸浓度为100μmol/L)、联合组(100μmol/L甘草次酸+25 mg/L奥沙利铂)和阳性对照组(奥沙利铂25 mg/L)。采用四氮唑蓝法检测各组HT-29细胞增殖率;通过Annexin V/PI双标流式细胞术检测各组HT-29细胞凋亡比例;通过蛋白质印迹法检测各组HT-29细胞中核转录因子κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)、B淋巴细胞瘤2(B-cell lymphoma 2,Bcl-2)、激活型胱天蛋白酶3(caspase-3,CASP-3)蛋白表达。结果:与对照组相比,联合组和阳性对照组HT-29细胞增殖率降低(P<0.05),联合组和阳性对照组凋亡细胞比例均升高(P<0.05);甘草次酸组、联合组和阳性对照组NF-κB、Bcl-2蛋白相对表达量均降低(P<0.05),而激活型CASP-3蛋白表达升高(P<0.05)。结论:甘草次酸可能通过调控NF-κB信号通路增强奥沙利铂对大肠癌HT-29细胞的化疗敏感性。

基于JAK-STAT信号通路的溃结宁膏对HT-29细胞炎症模型的影响

目的观察溃结宁膏穴位敷贴大鼠血清对人结肠癌HT-29细胞炎症反应和凋亡的影响,基于JAKSTAT信号通路探讨其作用机制。方法将HT-29细胞分为空白组、模型组、空白血清组、溃结宁膏血清组和柳氮磺吡啶(SASP)血清组。采用脂多糖诱导炎症细胞模型,CCK8法检测细胞存活率,TUNEL检测细胞凋亡情况,ELISA检测细胞上清液白细胞介素(IL)-6、IL-10、IL-13含量,RT-PCR检测细胞Janus激酶(JAK)1、JAK2、信号传导及转录激活因子(STAT)3、STAT6基因表达,Western blot检测JAK1、JAK2、STAT3、p-STAT3蛋白表达。结果与空白组比较,模型组和空白血清组细胞存活率明显降低(P<0.05),细胞凋亡率明显升高(P<0.05),细胞上清液IL-6和IL-13含量增加、IL-10含量减少(P<0.05),细胞JAK1、JAK2、STAT3、STAT6基因及JAK1、JAK2、STAT3、p-STAT3蛋白表达明显升高(P<0.05);与模型组及空白血清组比较,溃结宁膏血清组和SASP血清组细胞存活率明显增加(P<0.05),细胞凋亡率明显降低(P<0.05),细胞上清液IL-6和IL-13含量减少、IL-10含量增加(P<0.05),细胞JAK1、JAK2、STAT3、STAT6基因及JAK1、JAK2、STAT3、p-STAT3蛋白表达明显降低(P<0.05)。结论溃结宁膏穴位敷贴大鼠血清可能通过调控JAK-STAT信号通路调节HT-29细胞炎症反应及凋亡。

基于JAK2/STAT3信号通路探讨对叶百部总生物碱对人结肠癌HT-29细胞增殖、凋亡的影响

目的基于Janus激酶2(JAK2)/信号转导及转录激活因子3(STAT3)信号通路,探讨对叶百部总生物碱对人结肠癌HT-29细胞增殖、凋亡的影响。方法将人结肠癌HT-29细胞分为55μg/mL组、150μg/mL组和250μg/mL组进行实验,另设仅添加培养基的空白组(含细胞)。除空白组外,其他组给予相应浓度的对叶百部总生物碱进行干预。干预24 h、48 h、72 h后,采用四甲基偶氮唑蓝法检测各组细胞增殖抑制率;干预48 h后,采用Hoechst 33258染色法观察各组细胞凋亡情况,采用流式细胞术检测各组细胞凋亡率,采用Western blot检测各组细胞JAK2、磷酸化JAK2(p-JAK2)、STAT3和磷酸化STAT3(p-STAT3)的蛋白表达水平。结果与空白组比较,各浓度组细胞增殖抑制率增加;经Hoechst 33258染色后在各浓度组中可观察到典型的细胞凋亡形态改变,凋亡细胞数及细胞凋亡率均增加(均P<0.05);流式细胞术检测结果显示150μg/mL组和250μg/mL组细胞凋亡率增加(均P<0.05)。与空白组比较,各浓度组的p-JAK2蛋白和p-STAT3蛋白表达水平均下调(均P<0.05)。55μg/mL组、150μg/mL组和250μg/mL组的细胞增殖抑制率、凋亡细胞数及细胞凋亡率依次增加,p-JAK2蛋白和p-STAT3蛋白表达水平依次降低(均P<0.05)。结论对叶百部总生物碱可能通过抑制JAK2/STAT3信号通路相关蛋白的活化,来抑制人结肠癌HT-29细胞增殖并促进其凋亡。

姜黄素类似物对人结肠癌HT-29细胞增殖与自噬的影响

目的初步探究姜黄素类似物——WH-8对人结肠癌HT-29细胞增殖和自噬的影响。方法选用不同浓度WH-8作用于人结肠癌HT-29细胞,应用四甲基偶氮唑盐还原法观察药物对细胞的生长抑制作用;通过荧光染色技术和细胞成像技术观察WH-8作用下细胞自噬囊泡的变化;四甲基偶氮唑盐还原法检测经自噬特异性抑制剂3-MA预处理后WH-8对细胞生长抑制率的影响;蛋白质印迹法观察WH-8作用下细胞自噬特征性蛋白酵母自噬相关基因1(Beclin 1)和微管相关蛋白1轻链3(LC3)的表达情况。结果WH-8呈时间-剂量依赖性抑制人结肠癌HT-29细胞增殖,48 h平均半数抑制浓度为(12.5±1.3)μmol/L;一定浓度下WH-8可诱导细胞的自噬囊泡增多;3-MA可逆转WH-8对人结肠癌HT-29细胞的生长抑制作用,差异有统计学意义(P<0.05);WH-8可诱导Beclin-1表达上调,且在一定时间内促进LC3Ⅰ向LC3Ⅱ转化。结论WH-8可抑制人结肠癌HT-29细胞增殖并诱导细胞自噬。

Raf蛋白在HT-29结肠癌细胞中表达下调对NDRG1表达的影响

目的:研究Raf蛋白对HT-29结肠癌细胞体外侵袭、迁移能力的影响,同时分析其在N-myc下游调节基因1(NDRG1)表达调控中的作用。方法:将HT-29结肠癌细胞系与Raf蛋白特异性抑制剂(Gw5074)共同培养,HT-29细胞组(HT-29组)及HT-29细胞与DMSO共培养组(DMSO组)均为对照组,HT-29细胞与Gw5074共培养组(Gw5074组)为实验组,普通光学显微镜下观察HE染色后癌细胞形态学改变;通过透射电子显微镜观察肿瘤细胞超微结构变化;24-transwell法检测肿瘤细胞体外侵袭迁移能力的改变;免疫组化染色检测NDRG1基因的蛋白表达水平。结果:与Raf蛋白特异性抑制剂Gw5074共培养后,普通光镜下见HE染色的HT-29结肠癌细胞形态更加温和,细胞核大小较一致,呈圆形,染色质细腻,有极向的排列,部分区域略呈腺样结构;透射电镜下癌细胞内高尔基复合体、线粒体及粗面内质网增多,表面微绒毛丰富,常见胞质内微腺腔,同时出现凋亡细胞。与对照组相比,实验组在侵袭迁移实验中穿过小室的细胞数减少,差异有统计学意义(P<0.05)。免疫组化染色结果显示,NDRG1蛋白在对照组中表达较少,实验组中表达显著增多。结论:阻断Raf蛋白可明显上调HT-29结肠癌细胞中NDRG1蛋白的表达,从而促进细胞发生分化,同时抑制其侵袭迁移能力。

清肠化湿方对HT-29细胞IL-6/JAK2/STAT3的影响

溃疡性结肠炎（ulcerative colitis,UC）是一种反复发作的肠道慢性非特异性炎症性疾病,发病机制尚未明确,细胞因子IL-6及其介导的信号通路在非可控性肠道炎症过程中起关键作用[1]。导师沈洪教授所拟清肠化湿方（QHR）,治疗轻、中度UC,取得良好效果[2]。

NGX6基因对人结肠癌细胞HT-29细胞周期的影响

NGX6基因是新克隆的候选抑瘤基因,研究表明NGX6重表达可抑制结肠癌细胞的增殖.为进一步研究NGX6对细胞周期的影响,采用流式细胞仪检测NGX6重表达对结肠癌细胞HT-29细胞周期的影响,发现NGX6重表达可增加HT-29细胞在G0/G1期的分布比例,减少了S,G2,M期细胞数.利用蛋白质印迹和流式细胞术分析NGX6转染前后HT-29细胞周期素(cyclins)和细胞周期素依赖性蛋白激酶抑制物(cyclin-dependentkinaseinhibitor,CKI)的表达变化,发现NGX6可下调HT-29细胞中cyclinE、cyclinD1的表达及上调p27的表达,对cyclinA和cyclinB的表达无明显影响,p16在三组结肠癌细胞中均无表达.研究结果表明,NGX6在HT-29细胞中通过下调cyclinE、cyclinD1和上调p27的表达,阻滞细胞周期于G0/G1期,从而发挥其在结肠癌中的抑瘤作用.

苦参碱抑制大肠癌HT-29细胞环氧化酶-2表达的研究

目的从基因和蛋白水平探讨中药成分苦参碱 (matrine)对大肠癌HT-2 9细胞环氧化酶-2(COX-2 )表达的影响。方法分别采用RT-PCR、Western blot、ELISA等方法检测不同浓度苦参碱处理HT-2 9细胞前后COX-2mRNA、蛋白及其产物前列腺素E2 (PGE2 )水平的改变。结果苦参碱可抑制HT-2 9细胞COX-2mRNA、蛋白表达及PGE2 合成水平 ,但对COX 1无影响。当苦参碱 2 .0mg/ml处理时 ,COX 2mRNA表达在处理后 6h和 9h时抑制率均为 10 0 % ;细胞培养液PGE2 合成水平在 9h时抑制率为6 3.9% ;COX-2蛋白表达在 12h和 2 4h时抑制率分别为 4 8%和 10 0 %。结论苦参碱具有选择抑制HT-2 9细胞COX-2的基因转录、蛋白表达和功能活性等作用 ,在一定浓度和时间范围内 。

大黄素对HT-29细胞IL-8分泌及NF-κB活化的影响

目的研究大黄素对IFN-γ和LPS刺激的人结肠癌细胞株HT-29细胞的IL-8分泌及NF-κB活化的作用,为其临床应用提供实验依据。方法用IFN-γ和LPS刺激的人结肠癌细胞株HT-29细胞来建立体外细胞炎症模型,采用ELISA检测HT-29细胞的IL-8分泌;以免疫荧光技术结合激光共聚焦显微镜观察HT-29细胞NF-κB核转位。结果大黄素在10～80mol.L-1能降低IFN-γ+LPS所引起的HT-29细胞IL-8的大量产生,并且呈明显的剂量依赖关系;大黄素不同浓度组可抑制IFN-γ+LPS刺激造成的NF-κB激活,;有剂量依赖关系。结论大黄素能有效抑制IFN-γ+LPS诱导的IL-8分泌和NF-κB激活。

金钗石斛脂溶性生物碱提取物诱导人结肠癌 HT-29 细胞凋亡

目的:研究金钗石斛脂溶性生物碱提取物对人结肠癌HT-29细胞生长的抑制作用及其诱导细胞凋亡的分子机制。方法:MTT法检测金钗石斛脂溶性生物碱提取物对HT-29细胞存活率的影响,Hoechst33342染色法观察细胞形态学变化,流式细胞仪检测胞内活性氧水平、线粒体膜电位、细胞周期和细胞凋亡率变化;蛋白免疫印迹检法测蛋白Caspase-3,9和胞内细胞色素C的表达。结果:金钗石斛脂溶性生物碱提取物能降低HT-29结肠癌细胞存活率,呈剂量和时间效应,48 h半数抑制浓度(IC50)为0.72 mg/m L;金钗石斛脂溶性生物碱提取物能诱导HT-29细胞凋亡,并诱导细胞周期阻滞于G2期;金钗石斛脂溶性生物碱提取物诱使线粒体膜电位降低,胞内活性氧浓度升高;激活型Caspase-9,3与胞内细胞色素C表达水平增高。结论:金钗石斛脂溶性生物碱提取物对HT-29结肠癌细胞的生长具有抑制作用并诱导细胞凋亡,其可能通过线粒体凋亡途径诱导细胞凋亡。

辽东楤木叶总皂苷对结肠癌HT-29细胞的生长抑制作用及机制研究

目的研究辽东楤木叶总皂苷(ETS)对HT-29细胞生长的抑制作用及作用机制。方法采用MTT法检测ETS对HT-29细胞增殖的抑制作用;流式细胞仪检测ETS对HT-29细胞周期和凋亡的影响;Western blot法检测ETS对HT-29细胞PLK1蛋白表达的影响。结果 ETS对结肠癌HT-29细胞增殖有明显抑制作用,IC50值为39.62 mg·L-1。在10～40 mg·L-1剂量作用下,可剂量依赖性诱导HT-29细胞凋亡。ETS主要将细胞周期阻滞在G0/G1期,从而可剂量依赖性抑制肿瘤细胞增殖。ETS可明显抑制HT-29细胞PLK1蛋白的表达。结论 ETS体外可明显抑制HT-29细胞的生长,其抗肿瘤作用与细胞周期阻滞、细胞凋亡及抑制PLK1蛋白表达有关。

二烯丙基二硫对人结肠癌HT-29细胞G_1期的阻滞作用

目的探讨二烯丙基二硫(DADS)对人结肠癌HT-29细胞G1期的阻滞作用及分子机制。方法采用MTT、细胞计数法、流式细胞术和免疫细胞化学方法分析DADS对体外培养的HT-29细胞增殖抑制作用、细胞周期分布及细胞周期相关蛋白表达的影响。结果MTT法显示,60、120μmol.L-1DADS作用HT-29细胞24 h后,生长抑制率分别达23.1%、45.6%。细胞计数法表明,常规培养HT-29细胞群体倍增时间为22.58 h,60μmol.L-1DADS作用HT-29细胞后,其细胞群体倍增时间延长到31.20 h。流式细胞仪分析结果显示,60μmol.L-1DADS阻滞HT-29细胞在G1期,与对照组相比,可使G1期细胞增加约2倍,而120μmol.L-1DADS显著地将细胞阻滞在G2/M期。免疫细胞化学分析表明在G1期阻滞同时有p21W af1蛋白表达上调,Cyc lin E、C-myc蛋白表达下降。结论低剂量DADS对HT-29细胞的抑制增殖作用可能与G1期阻滞有关,DADS对HT-29细胞G1期阻滞的分子机制可能与调节p21W af1、Cyc lin E、C-myc表达相关。

Survivin shRNA和APC片段双基因的载体构建及其在HT-29细胞的表达

目的研究表明APC、Survivin 2种基因表达异常在结肠癌的发生发展中具有重要意义。构建Survivin shRNA、APC功能片段双基因共表达慢病毒载体并观察其能否于HT-29结肠癌细胞中成功表达,同时观察其是否能够对结肠癌细胞凋亡产生影响。方法构建3对互补Survivin shRNA片段,从其中筛选出一条最佳干扰shRNA片段,与APC功能片段(aa1020-1698)相连接构建双基因共表达质粒载体。将HT-29细胞分为实验组、空载组、空白组3组,慢病毒对HT-29进行侵染,观察是否有绿色荧光表达及对转染细胞进行realtime PCR、Western blot检测Survivin、APC基因表达水平。通过检测Caspase-3活性来检测细胞凋亡情况。结果 1Real time PCR检测后显示对Survivin基因起到最佳干扰效果的片段为shRNA3序列。2构建出的shRNA载体经过送序验证比对后,3对shRNA序列与最初设计的序列完全相同。在HT-29细胞中可见绿色荧光,实验组Survivin相对含量(31.71±1.49)较空载组(100±0)、空白组(95.12±2.15)明显减少(P<0.05),APC mRNA表达水平较空载组(0±0)、空白组(0.51±0.15)明显增加(P<0.05)。实验组Survivin蛋白相对含量(0.18±0.01)较空白组(0.24±0.04)、空载组(0.22±0.03)明显减少,APC蛋白表达水平(0.147±0.016)较空白组(0.095±0.012)、空载组(0.108±0.015)明显升高(P<0.05)。3实验组凋亡相对比值(0.573±0.050)较空白组(0.390±0.040)、空载组(0.407±0.030)明显增加(P<0.05)。结论成功构建Survivin-shRNA-APC双基因共表达慢病毒载体,并能够在HT-29结肠癌细胞中成功表达,该双基因共表达载体可为后续利用该载体进行基因治疗的基础实验提供材料。

乳酸菌体外粘附人结肠腺癌细胞系HT-29细胞的研究

用实验室保存的24株乳酸菌菌种做了对人结肠腺癌细胞系HT-29细胞的体外粘附性试验。发现双歧杆菌的粘附能力较高,平均在 10.5个/细胞;乳杆菌的粘附能力较低,平均在 3.2个/细胞;球菌的粘附能力很低,平均在 2.3个/细胞。其中双歧杆菌中 Bifidobacterium bifidum 02菌株粘附能力最好,达到(18.4±2.7)个/细胞。乳杆菌中 Lactobacillus acidophilus 99101粘附能力最好,达到(10.2±1.8)个/细胞。同时,同种不同株的乳酸菌粘附能力有差异,而同属中,来自人粪便与来自猪粪便的乳酸菌的粘附能力没有明显差异。

SurvivinshRNA-APC双基因共表达慢病毒载体对HT-29结肠癌细胞裸鼠皮下移植瘤生长情况的影响

目的在转录后水平进行干预的RNA干扰技术在多基因治疗中的应用越来越广泛。文中旨在构建人HT-29结肠癌细胞裸鼠皮下移植瘤模型,通过联合RNAi和外源性补充的方式研究Survivin shRNA-APC双基因共表达慢病毒载体对结肠癌裸鼠移植瘤生长情况的影响。方法选取35只裸鼠随机数字表法分为5组,即Survivin shRNA-APC双基因组、Survivin shRNA组、APC组、空载组和空白组,每组7只;将已经构建好的处于对数生长期的双基因共表达Survivin shRNA-APC、Survivin shRNA及APC稳转株,空载稳转株,HT-29结肠癌细胞(均为2×106/mL)分别注射至5组裸鼠左前腋下成瘤,构建人HT-29结肠癌细胞裸鼠皮下移植瘤模型;通过测量瘤体体积、重量,检测移植瘤生长抑制率,Real time PCR检测移植瘤组织survivin mRNA的表达,免疫组化检测Survivin蛋白的表达,TUNEL检测凋亡情况。结果与空白组比较,APC组、Survivin shRNA组、双基因组移植瘤平均体积、平均重量均减少(P<0.05);与空载组比较,APC组、Survivin shRNA组、双基因组平均体积、平均移植瘤重量亦减少(P<0.05),而体积抑制率、瘤重抑制率均增加(P<0.05);与双基因组比较,APC组、Survivin shRNA组移植瘤平均体积、平均重量均增加(P<0.05)。与空白组和空载组相比,APC组、Survivin shRNA组、Survivin shRNA-APC双基因组移植瘤组织Survivin mRNA和蛋白表达相对含量明显降低(P<0.05);与Survivin shRNA组、APC组相比,双基因组移植瘤组织Survivin mRNA和蛋白表达相对含量亦明显降低(P<0.05)。与空白组裸鼠移植瘤组织结肠癌细胞凋亡指数[(9.89±0.31)%]比较,APC组、Survivin shRNA组、双基因组[(31.19±1.79)%、(33.64±2.03)%、(56.72±3.17)%]明显升高(P<0.05),而APC组、Survivin shRNA组、双基因组亦较空载组[(10.06±0.43)%]明显升高(P<0.05);与Survivin shRNA组、APC组相比,Survivin shRNA-APC双基因组移植瘤组织癌细胞凋亡指数明显升高(P<0.05)。结论 Survivin shRNA-APC双基因共表达慢病毒载体能够使Survivin基因的表达水平降低,促进结肠癌细胞的凋亡,抑制移植瘤的生长,且优于单个基因的影响。

藤黄酸联合肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体诱导人结肠癌HT-29细胞凋亡的效果和机制

背景与目的:肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)能选择性地杀伤肿瘤细胞,但多种肿瘤对其耐药。该研究旨在探讨藤黄酸(gambognic acid,GA)与TRAIL联合对人结肠癌HT-29细胞裸鼠移植瘤生长的影响及GA联合TRAIL抗结肠癌的作用机制。方法:建立人结肠癌HT-29细胞裸鼠皮下移植瘤模型,测定TRAIL和(或)GA对裸鼠移植瘤的影响,采用H-E染色观察肿瘤组织形态结构改变,TUNEL法检测细胞凋亡状况;HT-29细胞经过siRNA干扰Nrf2表达后,通过AnnexinⅤ-FITC/PI双染检测细胞凋亡情况,流式细胞术检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量,RT-PCR法检测Nrf2、Bcl-2、Bax和DR5 mRNA的表达水平。结果:联合应用GA显著促进了TRAIL对裸鼠皮下移植瘤的生长抑制(抑瘤率达67.0%)和诱导凋亡作用,下调了组织中Nrf2、Bcl-2的表达,增强了Bax和DR5的表达;与阴性对照siRNA相比,Nrf2干扰能明显上调TRAIL诱导HT-29细胞的凋亡率,提高ROS含量,下调Nrf2和Bcl-2表达,上调Bax和DR5表达。结论:GA可能是通过下调Nrf2表达,使ROS水平升高而激活线粒体凋亡途径与死亡受体途径,从而逆转人结肠癌HT-29细胞体内外对TRAIL的耐药性。

半枝莲醇提物含药血清对人结肠癌HT-29细胞增殖、凋亡和周期的影响

目的:研究半枝莲醇提物(EESB,ethanol extract from Scutellaria barbata)含药血清对人结肠癌HT-29细胞株体外诱导其凋亡和周期的变化。方法:体外常规培养人结肠癌HT-29细胞株,制备含药血清,设置空白血清组、含有不同浓度EESB含药血清组、5-FU组,1应用MTT法评价EESB含药血清对HT-29细胞24 h、48 h、72 h的生长抑制率,2Annexin V-PE/7-AAD双染色分析在流式细胞仪上观察EESB含药血清处理HT-29细胞48 h后的细胞凋亡率,3PI法检测细胞周期变化。结果:1与空白组比较,MTT法显示EESB低、中、高剂量含药血清都能抑制HT-29细胞增殖(P<0.05),抑制率与作用时间及血清含药浓度相关,72 h时其达到39%。2同空白组比较,低、中、高剂量含药血清处理HT-29细胞48 h后凋亡率显著高于对照组(P<0.05),同时低、中、高剂量含药血清处理HT-29细胞48 h后,3与空白组比较,G0/G1期细胞明显较对照组增加(P<0.05),提示半枝莲可促进细胞凋亡,并且将细胞生长周期阻滞于G0/G1期,并且S期减少。结论:半枝莲对人结肠癌HT-29细胞有抑制作用,作用机制可能不光与抑制细胞生长有关,还和阻滞细胞生长周期及诱导细胞凋亡有关。

bcl-2和p53在丹皮酚诱导人结直肠癌HT-29细胞凋亡中的作用及其机制

目的探讨bcl-2和p53在丹皮酚(paeonol,Pae)诱导人结直肠癌HT-29细胞凋亡过程中的作用及可能的作用机制。方法应用透射电镜技术和原位末端标记(TUNEL)法观察不同浓度的Pae对HT-29细胞凋亡的诱导作用,应用免疫细胞化学技术检测用药前、后凋亡相关基因bcl-2及p53表达的变化,并与对照组比较。结果透射电镜观察到Pae作用后HT-29细胞出现典型的细胞凋亡形态;Pae在15.63mg/L、62.50mg/L、250.00mg/L3种浓度下作用48h均可诱导HT-29细胞凋亡,TUNEL法显示各组凋亡指数(AI)间差别有显著性意义(P<0.05);免疫细胞化学染色显示Pae作用后HT-29细胞bcl-2及p53蛋白表达显著降低。结论Pae能抑制HT-29细胞增殖并诱导其凋亡,其作用可能与下调bcl-2及p53蛋白的表达有关。

黄芪多糖通过调控miR-20a/TGFBR2分子轴降低结直肠癌HT-29/DDP细胞的顺铂耐药性

目的:探讨黄芪多糖(APS)通过调控miR-20a/TGFBR2分子轴对结直肠癌(CRC)顺铂耐药细胞HT-29/DDP增殖、侵袭、凋亡和耐药性的影响及其机制。方法:以人CRC HT-29细胞、HT-29/DDP细胞为亲本和耐药细胞模型,将HT-29/DDP细胞随机分为4组:对照组、APS处理组、过表达miR-20a+APS组、沉默TGFBR2+APS组。用不同质量浓度的APS(0、0.5、1.0、1.5和2.0 mg/ml)处理HT-29/DDP细胞后,以qPCR和Wb实验检测细胞中miR-20a和TGFBR2的表达水平;用CCK-8、Transwell和Annexin V-FITC/PI染色流式细胞术检测对HT-29/DDP细胞增殖、侵袭和凋亡的影响;用双荧光素酶报告基因验证miR-20a与TGFBR2的靶向作用关系。构建裸鼠皮下CRC HT-29/DDP细胞移植瘤模型,观察APS对移植瘤生长的影响及其机制。结果:APS显著抑制HT-29/DDP细胞的增殖(P<0.01),且呈剂量依赖性。miR-20a在经APS处理后的HT-29/DDP细胞中低表达(P<0.01)、TGFBR2的表达水平显著上调(P<0.01)。双荧光素酶报告基因证实miR-20a靶向作用TGFBR2并下调其表达水平。体内外实验证实APS通过靶向下调miR-20a对TGFBR2的抑制作用,提高HT-29/DDP细胞的药物敏感性,进而抑制该细胞增殖、侵袭和促进凋亡(均P<0.01);同时发现,该作用与抑制PCNA、Bcl-2蛋白而促进Bax、Caspase-3蛋白表达有关联。结论:APS通过下调miR-20a对TGFBR2表达的抑制作用,从而逆转HT-29/DDP细胞对顺铂的耐药性。