FQ-PCR同步检测HTLV-Ⅰ及HTLV-Ⅱ方法的建立及临床应用

目的:建立可同时检测HTLV-Ⅰ和HTLV-Ⅱ的双重荧光定量PCR(FQ-PCR)方法,并对所建体系进行方法学评价。方法:根据HTLV-Ⅰpol基因和HTLV-Ⅱtax基因的保守序列设计引物及TaqMan-LNA探针,构建重组质粒作为荧光定量PCR的标准品。优化荧光定量PCR反应条件,建立起可同时检测HTLV-Ⅰ和HTLV-Ⅱ的双重荧光定量PCR(FQ-PCR)的方法。结果:结果显示该方法对HTLV-Ⅰ及HTLV-Ⅱ的线性范围分别为108-102 copy/μl和107-10copy/μl;检测灵敏度分别为102copy/μl和10copy/μl。对阳性标本检测均呈阳性,对非目标菌检测均呈阴性。应用该方法对175例临床标本进行考核,有HTLV-Ⅰ阳性6例,HTLV-Ⅱ阳性3例,其中HTLV-Ⅰ和HTLV-Ⅱ双阳性2例。结论:本研究建立的双重FQ-PCR方法特异、快速、灵敏,对HTLV的血液筛查有重要意义。