牛HTR1B基因的分子遗传特性研究

用PCR-SSCP技术研究了涉及肉牛和奶牛共计7品种HTR1B基因的编码区和3′侧翼区的多态性,以期为牛性情的标记辅助选择积累数据。扩增得到4个片段,有3个片段存在(SSCP)多态性。对不同的SSCP带型对应片段进行测序,共发现6个SNP多态位点(G205T、C507T、C546G、C744T、G816A和G942A)。各遗传群体内G205T、C744T、G816A和G942A位点均处于Hardy-Weinberg平衡,而C507T和C546G位点只有鲁西牛处于Hardy-Weinberg平衡。奶牛205T等位基因频率显著高于其他肉牛品种(χ2=6.87)。奶牛G205T位点多态信息含量为0.25,其余各位点在不同群体内均小于0.10,说明牛HTR1B基因较保守。

HTR1A基因-1019C/G多态性与重性抑郁障碍及氟西汀疗效的关联研究

目的探讨5羟色胺1A受体(HTR1A)基因多态性与重性抑郁障碍的相关性及与氟西汀治疗疗效之间的关系。方法采用聚合酶链式反应扩增技术与限制性片段长度多态性分析技术(PCR-RFLP)检测重性抑郁障碍患者(病例组,n=142)和正常人(对照组,n=154)HTR1A基因-1019C/G多态性的基因型和等位基因频率。氟西汀治疗前及治疗6周末,用17项汉密尔顿抑郁量表(HAMD)评价疾病严重程度及其变化,分析疗效与基因型之间的关系。结果 HTR1A基因-1019C/G多态性,病例组G等位基因的频率(74.3%)明显高于对照组(65.6%)(P<0.05)。病例组HAMD总分各基因型组间总体比较差异有统计学意义(P<0.05),C/C基因型组高于C/G、G/G基因型组(P<0.05)。氟西汀治疗6周末,各基因型之间疗效比较差异无统计学意义,不同性别患者各基因型之间疗效比较差异无统计学意义。结论 HTR1A基因-1019C/G多态性与重性抑郁障碍之间存在关联,G等位基因可能是抑郁障碍的危险因子;C等位基因与重性抑郁障碍患者的病情严重程度存在关联,携带C/C基因型的患者病情可能较严重;该基因多态性与氟西汀的抗抑郁疗效可能无关。

萨能奶山羊乳腺组织5-HTR1基因的克隆与序列分析

根据GenBank其他物种5-HT受体-1(5-HTR1)基因序列的同源序列对奶山羊5-HTR1基因设计1对克隆引物,通过奶山羊乳腺组织提取的总RNA进行RT-PCR,将PCR产物克隆、测序。结果显示,奶山羊5-HTR1基因与牛、鼠的同源性分别为97.3%和87.2%,推测的氨基酸序列信号肽为1～45aa,SapB结构域均为78～145aa,结构特征与牛、鼠的5-HT1结构特征相一致。克隆了奶山羊乳腺组织中5-HTR1基因,为进一步研究牛乳腺组织中5-HT受体基因的分布和提高其泌乳量方面提供理论基础。

坤宁安对围绝经期抑郁大鼠模型海马5-HTR1A和5-HTR2A受体亚型mRNA表达的影响

目的:观察坤宁安对围绝经期抑郁模型大鼠海马5HTR1A、5HTR2A受体亚型mRNA表达的影响。方法:采用孤养结合慢性轻度不可预见性应激造模法,观测围绝经期抑郁大鼠模型海马5HTR1A、5HTR2A受体亚型mRNA表达的变化。结果:抑郁模型组大鼠海马的5-HTR1A受体亚型mRNA表达降低(P<0.05),5-HTR2A受体亚型mRNA表达水平增高(P<0.05);坤宁安可使大鼠5-HTR1A受体亚型mRNA表达上调,使大鼠5-HTR2A受体亚型mRNA表达下调。结论:坤宁安影响抑郁模型大鼠海马5HTR1A、5HTR2A受体亚型mRNA的表达,可能是其治疗围绝经期抑郁症的机理之一。

CYP3A4、HTR1A基因检测和血药浓度指导精神分裂患者喹硫平个体化给药

目的分析CYP3A4*18、HTR1A rs6295两种基因型表达水平与喹硫平血药浓度和临床疗效的关系。方法选取2019年1月—2021年3月江苏省苏州市广济医院收治的精神分裂患者85例。采用实时荧光定量PCR检测患者的CYP3A4*18、HTR1A rs6295基因表达,采用液相色谱进行喹硫平血药浓度的测定。根据阳性和阴性症状量表(PANSS)评价喹硫平的临床疗效。结果CYP3A4*18 CC型血药浓度明显高于CT型和TT型(P<0.05或P<0.01);HTR1A rs6295 TT型血药浓度明显高于CC型和CT型(P<0.05);CYP3A4*18 CC型总分减分值显著高于TT型(P<0.01);HTR1A rs6295 TT型总分减分值与阳性症状减分值显著高于CT型和CC型(P<0.01)。结论精神分裂患者CYP3A4*18、HTR1A rs6295的基因表达情况及与血药浓度存在一定相关性,为评价喹硫平的临床疗效提供了依据,在用药剂量选择与降低不良反应发生风险方面具有重要意义。

人HTR1E基因在不同细胞系和多种组织中的表达及其功能

人的HTR1E基因是五羟色胺受体(HTR)家族中的一员.这个家族里面的基因都和精神分裂症、抑郁症以及人的自杀活动有关.但是对于其具体的作用机制目前研究不多.采用实时定量PCR方法分析了HTR1E基因在各个组织和不同细胞系中的表达情况,亚细胞定位发现HTR1E位于细胞膜上,萤光素酶实验分析确定HTR1E可以抑制原癌基因erbB2启动子的转录活性.这些研究结果为进一步研究HTR1E基因在疾病发生中的作用奠定了一定的基础.

黑线仓鼠Htr1a克隆及生物信息学分析

Htr1a是介导5-HT系统功能的关键,主要分布于额叶皮层、海马、外侧隔、中缝背核、脊髓前角等.该研究以黑线仓鼠(Cricetulus barabensis)为实验材料,用RT-PCR技术克隆黑线仓鼠Htr1a的部分cDNA序列1486bp(GeneBank登录号:MH169583),运用生物信息学对Htr1a核酸序列以及蛋白质序列进行分析,构建系统进化树.研究结果表明:克隆的Htr1a部分cDNA序列包含一个完整的开放阅读框1269bp,部分5′,非翻译区和部分3′,非翻译区,共编码422个氨基酸.Htr1a蛋白质分子量为46332.47Da,等电点为9.18,该蛋白质有7个跨膜螺旋,一个G蛋白偶联受体家族标签,不含有信号肽,不属于分泌蛋白,疏水性分析也表明其符合膜蛋白的特征;同源性比对和系统进化树分析显示,黑线仓鼠与中国仓鼠(Cricetulus griseus)亲缘关系相近,与啮齿类较近,而与其他哺乳类和鸟类物种的亲缘关系均较远,这与传统的物种分类相一致.以上结果证实本实验成功克隆到黑线仓鼠Htr1a的部分cDNA序列,为进一步探究黑线仓鼠5-HT系统功能奠定了分子生物学基础.

血药浓度和HTR1A基因型对广西百色地区壮族精神分裂症患者喹硫平用药的指导价值分析

目的探讨广西百色地区壮族精神分裂症患者5-羟色胺1A受体[5-hydroxytryptamine(serotonin)receptor 1A,HTR1A]基因表达情况和不同HTR1A基因表达患者接受喹硫平治疗后血药浓度情况,并分析血药浓度和HTR1A基因检测对喹硫平临床用药的指导价值。方法择2022年1月~2023年1月来我院就诊的广西百色地区壮族精神分裂症患者86例,以荧光定量聚合酶链反应(Real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)法对HTR1Ars6295基因型进行检测,所有患者均服用喹硫平进行治疗,治疗4周(w)后,使用阳性和阴性症状量表(Positive and Negative Syndrome Scale,PANSS)评价效果,以液相色谱法对血药浓度检测,比较HTR1A基因不同表达患者疗效和血药浓度差异,并以Spearman检验分析患者血药浓度和PANSS减分值之间的相关性。结果广西百色地区壮族精神分裂症患者HTR1A基因型及对应等位基因满足Hardy-weinberg平衡定律(P>0.05),HTR1A CC型、CT型和TT型基因患者间血药浓度有统计学差异(P<0.05),其中,TT型患者血药浓度较CT型和CC型患者高(P<0.05),CT型和CC型患者血药浓度差异无统计学意义(P>0.05),经4 w治疗后HTR1A TT型患者阳性症状和总分减分值高于CC型和CT型(P<0.05),一般精神病理征状和阴性症状减分值三组间差异无统计学意义(P>0.05),经Spearman相关分析,发现血药浓度与广西百色地区壮族精神分裂症患者阳性症状减分值和总分减分值呈明显正相关(P<0.05),与一般精神病理征状减分值、阴性症状减分值之间相关性不显著(P>0.05)。结论不同HTR1A基因型广西百色地区壮族精神分裂症患者喹硫平血药浓度和PANSS评分减分值有一定差异,临床可依据不同基因分型患者血药浓度特点指导喹硫平用药剂量,从而在保证治疗效果的同时避免不良反应出现。

茵陈蒿汤对代谢相关脂肪性肝病小鼠“肠TPH1-肝HTR2A轴”的影响

目的基于肠TPH1-肝HTR2A轴探讨茵陈蒿汤防治MAFLD的作用机制。方法24只C57BL/6J小鼠随机分为对照组、模型组、茵陈蒿汤组,每组8只。模型组、茵陈蒿汤组小鼠采用高脂饲料喂饲,12周后,茵陈蒿汤组给予茵陈蒿汤灌胃,每日1次,连续4周。采用HE染色和油红O染色观察肝脏组织病理变化,检测血清HDL-C、LDL-C、TC、TG、AST、ALT和5-HT含量,肝脏TC、TG、DAG、PLC含量,小肠TPH1、SERT及肝脏HTR2A、SREBP-1c、GPAT1、FASN mRNA水平,小肠TPH1、SERT及肝脏HTR2A、PKC-ε、P-PI3K、P-AKT、P-mTOR、SREBP-1c、GPAT1、FASN蛋白表达。结果对照组肝细胞排列整齐,无明显脂肪变性;模型组肝细胞体积肿胀,有明显脂肪变性;与模型组比,茵陈蒿汤组肝细胞脂肪变性显著减少。相较于对照组,模型组肝脏脂质沉积显著升高,茵陈蒿汤显著改善肝脏脂质沉积。与对照组比,模型组肝脏TG和TC水平显著升高(P<0.05);血清AST、ALT、HDL-C、LDL-C、TG、TC水平显著升高(P<0.05);血清5-HT及肝脏DAG、PLC水平显著升高(P<0.05);小肠TPH1及肝脏HTR2A、SREBP-1c、GPAT1、FASN mRNA表达水平显著升高,小肠SERT mRNA表达水平显著降低(P<0.05);小肠TPH1及肝脏HTR2A、PKC-ε、P-PI3K、P-AKT、P-mTOR、SREBP-1c、GPAT1、FASN蛋白表达水平显著升高,小肠SERT蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。与模型组比,茵陈蒿汤组肝脏TG和TC水平显著降低(P<0.05);血清AST、ALT、HDL-C、LDL-C、TG、TC水平显著降低(P<0.05);血清5-HT及肝脏DAG、PLC水平显著降低(P<0.05);小肠TPH1及肝脏HTR2A、SREBP-1c、GPAT1、FASN mRNA表达水平显著降低,小肠SERT mRNA表达水平显著升高(P<0.05);小肠TPH1及肝脏HTR2A、PKC-ε、P-PI3K、P-AKT、P-mTOR、SREBP-1c、GPAT1、FASN蛋白表达水平显著降低,小肠SERT蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。结论茵陈蒿汤可能通过肠TPH1-肝HTR2A轴调节肝脏TG合成,从而抑制MAFLD发生发展。

一贯煎加味对大鼠慢性不可预见应激模型更年期抑郁症的治疗

目的探讨一贯煎加味对更年期抑郁症大鼠海马、皮质5-HTR1A mRNA表达的影响,进而明确其治疗更年期抑郁症的作用机理。方法对雌性成年大鼠采用去势+孤养+改良的慢性不可预见应激方法建立更年期抑郁症模型;将去势大鼠随机分为更年期组、模型组、西药组(百优解联用雌激素)、中药组(一贯煎加味),并以假手术组为对照。采用RT-PCR法测定海马、皮质神经元中5-HTR1A mRNA转录水平,应用GIS-2010凝胶图像分析系统采集图像、读取灰度值。比较分析各组灰度值之间的差异。结果模型组大鼠海马、皮质5-HTR1A mR-NA转录水平低于假手术组,有显著性差异(P<0.01);中药组大鼠海马、皮质5-HTR1A mRNA转录水平显著高于模型组、西药组,有显著性差异(P<0.01)。结论一贯煎加味从基因水平影响5-HTR1A mRNA转录功能,从而发挥其抗抑郁作用。

155例汉族男性人群5-羟色胺受体1B基因单核苷酸多态性的特征分析

目的:探讨中国汉族男性人群中5-羟色胺受体1B基因(HTR1B)单核苷酸多态性(SNP)的遗传特征。方法:通过基因再测序筛查155例汉族男性人群HTR1B基因多态性位点,采用HaploView软件分析筛查到的多态性位点的遗传学特征、连锁不平衡(LD)、标签SNP和单体型(域)分布。结果:155例汉族男性人群中,HTR1B基因SNP位点包含5′-侧翼区的rs17273700(-860A>G)、rs1228814(-700G>T)、rs11568817(-262 A>C)、rs130058(-161T>A),编码区的rs6298(+129A>G)、rs6296(+861G>C)和3′-侧翼区的rs6297(+1 180T>C);各多态性位点基因型频率均符合Hardy-Weinberg平衡(P>0.05);rs17273700与rs11568817位点之间(|D′|=1.0,2r=0.94)和rs6296与rs6298位点之间(|D′|=0.946,r=0.849)呈强LD关联;该人群主要存在8种单体型,占94.2%,其中最主要为野生单体型H1(46.0%);筛选出-860A>G、-700G>T、-161T>A、+129A>G、+1 180T>C共5个标签SNP和两个单体型域,-860A>G和+129A>G分别为其代表性单体型标签SNP(htSNP)。结论:本研究首次筛查出HTR1B基因在中国汉族男性人群中的合适的标签SNP和htSNP,减少了后续研究的SNP位点数目,为探讨其与疾病的关系奠定了基础。

食管滴酸刺激诱导内脏致敏大鼠岛叶基因表达谱的改变

目的:观察酸刺激模式下经腹腔卵清蛋白(OVA)致敏大鼠岛叶中基因谱的改变.方法:SD大鼠20只分为3组:A组于实验前1d腹腔注射OVA与氢氧化铝混合液[OVA100mg,Al(OH)3200mg]1.5mL致敏;B组于实验前1d腹腔注射生理盐水1.5mL作假手术对照;C组不予处理作空白对照.实验第14天,对A、B、C组动物分别进行食管酸灌注,使用0.1mol/L盐酸滴注,滴注液保持37℃,速度10mL/h,共50min.通过脑定位仪定位岛叶并取材保存,对标本进行RNA抽提和纯化后,采用基因芯片进行寡核苷酸芯片杂交,并对芯片差异基因进行数据分析.结果:在食管滴酸灌注致敏SD大鼠后,31099个待测基因中,3组间显著差异表达基因389条(1.25%),其中已知功能基因158条,未知功能基因231条,有显著性功能的基因有21条(4.88%).这些基因主要涉及到初级代谢产物、转移酶活性、ATP结合物、阳离子结合物,细胞定位,阳离子转运等.下调的基因中包括了调控与内脏感觉相关的5-HT1B受体基因.结论:岛叶皮层中枢可能存在有通过中枢下行抑制的减弱致内脏高敏感的中枢机制,HTR1B基因的下调可能在调控食管内脏感觉中发挥着重要的作用.

HTRI设计立式热虹吸再沸器

根据立式热虹吸再沸器的原理,结合工作实践,详细介绍了用HTRI设计立式热虹吸再沸器的方法和设计要点。

HTRA1基因过表达对视网膜色素上皮细胞增殖及迁移影响

目的研究HTRA1基因过表达对人视网膜色素上皮细胞（RPE）的增殖和迁移能力的影响，探讨HTRA1基因在老年黄斑变性（AMD）发病中的作用。方法用携带人HTRA1基因的慢病毒感染体外培养的人RPE细胞，荧光显微镜下观察细胞的感染效率，lit—PCR和WesternBlot检测HTRA1mRNA和蛋白的表达，MTT比色法检测感染细胞毒性及细胞增殖能力，Transwell小室检测细胞迁移能力变化。结果与空载体慢病毒感染RPE细胞相比，HTRA1基因慢病毒感染的RPE细胞HTRA1mRNA和蛋白的表达量明显增加，细胞增殖能力及迁移能力均明显下降，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论过表达HTRA1基因能抑制人视网膜色素上皮细胞的增殖及迁移，THRA1基因可能通过影响RPE细胞功能参与AMD的进程。