非接触共培养体系下抑制ARPE-19中CAMKⅡ表达对HUVECs迁移和侵袭及管腔形成的影响

目的:探讨非接触共培养体系下抑制人视网膜色素上皮细胞(ARPE)中Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CAMKⅡ)表达对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)迁移、侵袭、管腔形成的影响。方法:将过表达CAMKⅡ-δ的ARPE-19样本进行RNA测序,应用生物信息学分析差异基因参与的功能。使用transwell小室构建ARPE-19和HUVECs非接触共培养体系,根据实验干预措施分为:空白组:仅接种未共培养的HUVECs,无ARPE-19细胞;对照组:ARPE-19和HUVECs细胞均使用完全培养基进行共培养;AIP组(CAMKⅡ抑制组):ARPE-19使用含有AIP(160 nmol/L)的完全培养基,HUVECs使用完全培养基,进行共培养。检测HUVECs迁移、侵袭和管腔形成能力的变化,并通过Western blotting检测CAMKⅡ/AMPK/mTOR/VEGFA蛋白表达水平。结果:生信分析发现差异基因参与细胞生长与死亡和细胞运动等生物学过程。划痕和transwell迁移实验均表明AIP组的HUVECs相对迁移率均明显低于对照组(均P<0.05)。而侵袭和小管形成实验表明,AIP组的相对侵袭率和相对管腔形成率较对照组无明显改变(均P>0.05)。Western blotting结果表明AIP组CAMKⅡ、P-mTOR、VEGFA蛋白表达较对照组均明显下调,而P-AMPK蛋白表达较明显上调(均P<0.05)。结论:在非接触共培养体系下抑制ARPE-19细胞中CAMKⅡ表达可以显著降低HUVECs迁移能力,但不能改变侵袭和管腔形成能力,这可能是通过AMPK/mTOR/VEGFA信号通路实现的。

Corilagin对OX-LDL诱导的HUVECs细胞损伤的保护作用及对MyD88信号通路表达的影响

目的探讨不同浓度和时间的柯里拉京(Corilagin)处理对氧化性低密度脂蛋白(oxidative low-density lipoprotein,ox-LDL)诱导人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)损伤的保护作用,以及其对MyD88信号通路表达调控的影响。方法体外培养HUVECs复制ox-LDL诱导损伤模型,利用形态学及免疫学方法鉴定HUVECs细胞,MTT法确定复制ox-LDL损伤HUVECs模型的最佳条件,根据不同处理将细胞分为正常组(Normal)、模型组(Model)、Corilagin(3.125、6.25、12.5、25、50μmol/L)组、阳性对照(VE 10μmol/L、Simvastain 1μmol/L)组。观察Corilagin对ox-LDL诱导损伤的HUVECs保护作用;Western blot和RT-qPCR方法检测HUVECs细胞中MyD88、P65、TNF-α、MCP-1表达变化。结果经形态学及免疫学方法鉴定,所培养细胞为HUVECs;70 mg/L的ox-LDL刺激12 h是复制ox-LDL损伤HUVECs模型的最佳条件;MTT结果显示,与ox-LDL组比较,Corilagin组细胞活力明显升高(P<0.01);RT-qPCR和Western blot结果表明,与Normal组比,ox-LDL组MyD88、P65、TNF-α及MCP-1的mRNA和蛋白表达升高(P<0.01);与ox-LDL组比较,Corilagin组及阳性对照组的MyD88、P65、TNF-α及MCP-1的mRNA和蛋白表达降低(P<0.01),且Corilagin组呈现剂量依赖下调MyD88、P65、TNF-α及MCP-1的mRNA和蛋白表达。结论随着时间和浓度的增加,Corilagin能明显提高ox-LDL诱导损伤的HUVECs细胞活力,其保护作用与抑制MyD88信号通路有关。

二苯乙烯苷调节ROS相关JNK通路对LPC诱导HUVECs损伤的作用

目的探讨从何首乌提取的二苯乙烯苷(TSG)对溶血卵磷脂(LPC)诱导人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)凋亡的影响及其可能机制。方法体外培养HUVECs,筛选溶血卵磷脂损伤内皮细胞的最适药物浓度,采用CCK-8检测细胞活力,透射电镜观察细胞形态,激光共聚焦显微镜检测和观察活性氧(ROS)水平,Western blot检测p-JNK蛋白的水平。结果 LPC能引起细胞损伤,并随质量浓度增加,细胞活力降低,其中10μg/mL LPC作用细胞后,与正常组比较细胞活力明显降低,细胞内空泡增多,线粒体肿胀,产生ROS的水平增高,p-JNK蛋白表达水平显著上调。经二苯乙烯苷预处理1 h后,二苯乙烯苷1.0μmol/L和10μmol/L组与溶血卵磷脂组比较,细胞活力增强,细胞内空泡减少,线粒体较完整,产生ROS水平降低,p-JNK蛋白表达量显著下调(P<0.05)。结论二苯乙烯苷具有降低溶血卵磷脂所致HUVECs的细胞损伤作用,其机制可能与调节ROS相关JNK通路有关。

川崎病急性期患儿血清活化HUVECs NF-κB并促进MMP-9分泌

川崎病(Kawasaki disease,KD),又称皮肤黏膜淋巴结综合征(mucocutaneous lymph node syndrome,MCLS),是一种好发于5岁以下儿童和婴幼儿的急性全身性血管炎性疾病。病变可累及动脉、静脉和毛细血管,尤以冠状动脉为明显,成为小儿后天性心脏病的主要病因[1]。目前,KD病因与发病机制尚不十分清楚,

大气颗粒物对A549和HUVECs细胞的毒性作用

比较了A549和HUVECs 2种细胞对颗粒物的敏感度,以探讨大气颗粒物粒径对生物活性的影响.采集北京市区PM10～2.5、PM2.5～0.1和PM0.1,将A549和HUVECs细胞暴露于不同浓度的颗粒物悬浮液24 h后,用噻唑蓝(MTT)法测定细胞存活率,并用LDH试剂盒测定细胞培养液中LDH(乳酸脱氢酶)的含量.结果表明:随着染毒剂量的增大,细胞存活率逐渐降低,并且呈剂量-反应关系;培养液中LDH浓度呈剂量依赖型增加;当染毒剂量>200μg/mL时,PM0.1的细胞致死率大于PM10～2.5和PM2.5～0.1(P<0.01);同一粒径的颗粒物对HUVECs的毒性比A549略大,但无统计意义.因此,相对于粗颗粒物,细、超细颗粒物具有较大的细胞毒性,A549和HUVECs细胞对颗粒物的敏感度差异不显著.

C6神经酰胺能诱导人血管内皮细胞(HUVECs)迅速出现衰老样变化(简报)

神经酰胺是一种神经鞘磷脂类代谢的关键分子,也是一种第二信使分子。它能抑制磷脂酶D的活性,从而抑制细胞周期的进行。神经酰胺参与细胞的分化、凋亡和衰老等多种生理代谢反应。许多细胞因子如:TNF、IL-1、Fas ligands等都能引起神经酰胺水平的升高;

植物雌激素α-ZAL抑制同型半胱氨酸诱导HUVECs的ET-1基因表达及抗氧化机制

目的:通过氧应激(ROS)信号转导通路探讨植物雌激素α-ZAL对同型半胱氨酸(HCY)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)中ET-1基因表达的抑制作用及抗氧化机制。方法:用荧光探针DCF检测HUVECs内ROS的含量;采用RT-PCR方法对ET-1mRNA的表达进行分析,运用WesternBlot法测定细胞外信号调节激酶(ERK)、磷酸化细胞外信号调节激酶(pERK)和c-Jun氨基末端激酶(c-jun/AP-1)的表达;同时测定HUVECs上清液中ET-1的浓度,利用瞬时转染技术观察HUVECs的AP-1报告基因的活性。结果:α-ZAL能降低AP-1的活性,抑制由HCY诱导ET-1的分泌和ET-1mRNA的表达,并可能通过抗氧化作用阻断由HCY诱导的HUVECsROS的产生。结论:α-ZAL能抑制HCY诱导HU-VECs的ET-1基因表达,推测可能是α-ZAL减弱了氧应激(ROS)、抑制了蛋白激酶ERK的激活和调节ET-1基因上核转录因子AP-1的表达。

葛根素6″-O-木糖苷对ox-LDL诱导HUVECs细胞损伤的影响

目的 探讨葛根素6″-O-木糖苷对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导人静脉内皮细胞(HUVECs)损伤的影响。方法 将HUVECs随机分为对照组、ox-LDL组及葛根素6″-O-木糖苷10、20、40μmol/L组,MTT法检测细胞活性,ELISA法检测白介素(IL)-1β和肿瘤坏死因子(TNF)-α水平,试剂盒检测caspase-3活性,Western blot检测细胞间黏附分子(ICAM1)、血管细胞黏附分子(VCAM1)、cleaved caspase-3、p-p65、p-IκB-α表达。结果 与对照组比较,ox-LDL处理使HUVECs细胞活性降低(P<0.05),caspase-3活性及IL-1β、TNF-α水平升高(P<0.05),cleaved caspase-3、ICAM1、VCAM1、p-p65、p-IκB-α蛋白表达升高(P<0.05);与ox-LDL组比较,葛根素6″-O-木糖苷能改善以上指标(P<0.05),并呈剂量依赖性。结论 葛根素6″-O-木糖苷能抵抗ox-LDL诱导的血管内皮细胞损伤,包括提高细胞活性、抑制细胞凋亡和炎症,其机制可能与抑制NF-κB信号通路有关。

白藜芦醇对氧化应激环境中HUVECs细胞衰老、增殖、凋亡的影响及机制

目的探讨白藜芦醇(RSV)在氧化应激环境中对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)衰老、增殖及凋亡的影响,并对相关机制进行探索。方法利用β-半乳糖苷酶染色HUVECs衰老的细胞并记录阳性细胞数,观察过氧化氢(H2O2)单独处理以及联合RSV后,细胞衰老情况的变化;采用长时程动态活细胞成像及分析系统检测H2O2单独处理以及联合RSV后细胞增殖能力的变化并绘制生长曲线;利用流式细胞技术检测H2O2单独及联合RSV对HUVECs细胞周期及细胞凋亡情况的影响;采用Western印迹检测相关蛋白表达情况。结果HUVECs经H2O2处理后,相比于H2O2组,RSV组β-半乳糖苷酶染色阳性细胞比例明显减低,细胞增殖能力增强,二者差异显著(P<0.05);相比于RSV组,H2O2组细胞周期多被阻滞在G1期,且细胞增殖相关蛋白(p-AKT和pERK)表达减少,而衰老相关蛋白p53、p21、p16、p-Rb表达明显增多;而RSV可拮抗H2O2对HUVECs的作用,使HUVECs凋亡细胞数显著减少,Survivin蛋白表达明显增多(P<0.05)。结论RSV可抑制氧化应激环境中HUVECs细胞的衰老及凋亡、促进细胞增殖,对HUVECs细胞具有保护作用,其机制与RSV改变相关蛋白表达有关。

肿瘤坏死因子α致HUVECs内皮型一氧化氮合酶降解

目的研究肿瘤坏死因子-α(TNF-α)是否可以通过细胞内蛋白质降解途径引起人脐静脉内皮细胞(HUVECs)内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的蛋白量减少。方法建立原代HUVECs培养,选取TNF-α不同浓度(0.01、0.1、1和10 ng/m L)、不同时间(24、48和72 h)处理HUVECs;溶酶体抑制剂氯化铵(NH4Cl)、caspase抑制剂(caspase inhibitor)和泛素-蛋白酶体抑制剂(MG-132)预处理HUVECs 1.5 h后加入TNF-α(1 ng/m L)共处理24 h,Western blot方法检测HUVECs中eNOS蛋白表达。结果与对照组比较,1 ng/m L TNF-α处理细胞24 h,eNOS蛋白量明显减少(P<0.01);MG-132与TNF-α共处理组,eNOS蛋白量明显增加(P<0.01)。结论 TNF-α可以通过泛素-蛋白酶体途径引起eNOS蛋白降解。

重组kisspeptin-10抑制子痫前期患者HUVECs的体外增殖、迁移及血管形成

子痫前期患者主要特征是胎盘血管形成异常，其血清及胎盘中kisspeptin表达水平明显上升[1],其受体GPR54表达于冠状动脉．且kisspeptin-10可促进冠状动脉收缩[2]，故推测．kisspeptin／GPR54系统可能参与子痫前期异常血管的形成与发展。

淫羊藿苷对H2O2诱导HUVECs细胞氧化损伤的保护作用

目的观察淫羊藿苷(ICA)对H2O2诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)氧化损伤的保护作用及可能机制。方法 H2O2体外诱导HUVECs,构建氧化应激损伤模型,加入不同浓度的淫羊藿苷(12.5μg·mL^-1, 25μg·mL^-1, 50μg·mL^-1),噻唑蓝(MTT)比色法测定细胞活力,生化法测细胞中超氧化物歧化酶(SOD)活性和上清液中乳酸脱氢酶(LDH)释放量,荧光实时定量PCR(RT-PCR)检测细胞中MCP-1和ICAM-1 mRNA的表达。结果与模型组相比,不同浓度的淫羊藿苷能显著提高受损细胞的细胞活力和SOD活性,减少上清液中LDH释放,下调ICAM-1和MCP-1 mRNA表达,且均具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论淫羊藿苷能改善受损细胞氧化指标,降低动脉粥样硬化相关细胞因子表达,改善动脉粥样硬化等血管疾病的进程。

β-NGF减轻H_2O_2对HUVECs的损伤

血管内皮细胞损伤被认为是导致动脉粥样硬化的重要病理原因之一,且多与氧化应激损伤有关。因此,如何保护氧化损伤后血管内皮细胞功能对于防治动脉粥样硬化等心血管疾病具有重要意义。神经生长因子β-NGF是一种多功能性神经营养因子,可以促进血管新生且与血管内皮功能密切相关,但其对氧化损伤后血管内皮细胞的作用及其机制尚未知[1]。

NADPH氧化酶4在高糖促进HUVECs内活性氧产生机制中的作用

目的:研究在高浓度葡萄糖刺激状态下,人脐静脉内皮细胞(HUVECs)内活性氧的主要来源。方法:Ⅱ型胶原酶消化法分离培养人脐静脉内皮细胞,流式细胞术检测细胞内活性氧的生成,RT-PCR及Westernblot检测细胞内NADPH氧化酶4(NOX4)的表达。结果:高糖处理HUVECs后细胞内ROS升高、NOX4表达明显上调;NOX抑制剂DPI能够抑制NOX4表达的上调和细胞内ROS的升高。结论:高糖处理HUVECs时细胞内ROS升高主要来源于NOX4。

松香酸通过上调miR-30a-3p表达增强缺氧诱导的HUVECs血管生成

目的探讨松香酸对急性心肌梗死(AMI)后内皮细胞血管生成及迁移的作用与机制。方法在体外构建人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)细胞缺氧模型;通过Matrigel小管形成实验检测HUVECs的血管生成情况;Transwell及伤口愈合实验检测HUVECs的细胞迁移;Western blot检测血管内皮生成因子A(VEGFA)的表达情况;qRT-PCR检测miR-30a-3p的转录水平。结果成功构建细胞缺氧模型;Matrigel小管形成实验显示缺氧抑制HUVECs的血管生成及细胞迁移,而利用松香酸处理缺氧细胞后,可以促进其血管生成和细胞迁移;Western blot结果显示,松香酸能够促进VEGFA的表达;进一步利用qRT-PCR检测松香酸处理后细胞内miR-30a-3p水平,发现松香酸可明显提高miR-30a-3p水平,而在细胞内转染miR-30a-3p inhibitor后,松香酸促进HUVECs的血管生成和细胞迁移作用被抑制。结论松香酸可能通过调节miR-30a-3p的表达,增强HUVECs的血管生成与细胞迁移。

金丝桃素光动力通过抑制HUVECs细胞增殖、迁移和管腔形成抑制血管生成

目的探讨金丝桃素光动力(hypericin-photodynamic therapy,HY-PDT)对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)增殖、迁移及管腔形成的影响,研究抑制血管生成的作用机制。方法以血卟啉为阳性药,用金丝桃素及血卟啉分别与HUVECs避光孵育24 h后,给予585 nm黄光照射(1.0 J/cm2),24 h后采用MTT法检测不同浓度HY对HUVECs细胞增殖的影响,细胞划痕实验观察HUVECs迁移情况,Matrigel实验观察对HUVECs细胞管腔形成的作用,qRT-PCR检测Smad2基因mRNA的表达,Western blot检测ERK1/2、p-ERK1/2、Smad2表达变化。结果 HY-PDT能够抑制HUVECs细胞增殖、迁移及管腔形成;HY-PDT使HUVECs中ERK1/2磷酸化比率(p-ERK1/2/ERK1/2)显著降低(P<0.01),并显著下调Smad2 mRNA及蛋白表达(P<0.01)。结论 HY-PDT通过抑制ERK1/2蛋白磷酸化活化、降低Smad2 mRNA表达及蛋白水平,使HUVECs细胞增殖、迁移管腔形成受到抑制,抑制血管的生成。

姜黄素抑制ox-LDL诱导HUVECs凋亡

目的研究姜黄素对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡的保护作用及其可能机制。方法体外培养HUVECs,实验分为:对照组、ox-LDL组、ox-LDL加内质网应激(ERS)抑制剂PBA组、姜黄素组、ox-LDL加姜黄素组和ox-LDL加姜黄素加PI3K抑制剂LY294002组。CCK-8法检测细胞存活率;流式细胞仪检测细胞凋亡;激光共聚焦显微镜观察活化转录因子6(ATF6)转位;Western bolt检测ERS相关蛋白:糖调节蛋白78(GRP78)、蛋白激酶样内质网激酶(PERK)和肌醇激酶-1(IRE-1)以及相关通路蛋白:LOX-1、AKT和p-AKT的表达。结果与对照组相比,ox-LDL可增加细胞凋亡,提高ERS相关蛋白的表达(P<0.01),促使ATF6向核内转位,以及提高LOX-1(P<0.01)和降低p-AKT的表达(P<0.01);与ox-LDL组相比,PBA可抑制ox-LDL诱导的细胞凋亡(P<0.01),姜黄素可抑制ox-LDL诱导的ERS相关蛋白和LOX-1的表达(P<0.01),ATF6的核转位,内皮细胞的凋亡(P<0.01),同时它还可提高ox-LDL引起的p-AKT表达下调(P<0.01);LY294002可部分削弱姜黄素抑制ox-LDL诱导ERS相关蛋白表达的作用(P<0.05)。结论姜黄素可降低ox-LDL诱导HUVECs的凋亡,其可能机制是通过抑制LOX-1的表达和激活AKT通路减轻细胞ERS来实现的。