IGF-1诱导PI3K-Akt通路磷酸化对平滑肌细胞的作用

目的比较胰岛素生长因子-1(IGF-1)对人脐静脉平滑肌细胞(HUVSMC)和脐动脉平滑肌细胞(HUASMC)增殖的影响并探讨其机制。方法采用人源HUVSMC和HUASMC进行研究,噻唑蓝(MTT)法检测IGF-1对两种细胞增殖的影响,并通过Western blotting技术检测IGF-1对两种细胞中PI3K-Akt信号通路的影响。结果不同浓度的IGF-1对HUVSMC和HUASMC的增殖都有明显的促进作用,但对HUVSMC的促增殖作用明显高于对HUASMC。进一步检测PI3K-Akt信号通路,IGF-1可激活PI3K-Akt信号通路,并且IGF-1对HUVSMC的激活明显强于HUASMC。IGF-1R抗体或wortmannin(渥曼青霉素)明显抑制IGF-1对细胞增殖的促进作用。结论 IGF-1可明显促进SMC增殖,并且在HUVSMC更为明显;IGF-1主要通过激活PI3K-Akt信号通路来促进平滑肌细胞的增殖。冠状动脉搭桥术(CABG)后静脉移植物比动脉移植物更容易发生内膜增生的原因可能就在于此。

不同浓度葡萄糖环境下Fe^2＋对人脐静脉平滑肌细胞增殖及基质金属蛋白酶-2分泌的促进作用

目的:探讨正常及高葡萄糖环境下,Fe2+对人脐静脉平滑肌细胞(HUVSMC)增殖及基质金属蛋白酶-2(MMP-2)分泌的作用。方法:以相同浓度接种普通培养液及高浓度葡萄糖培养液培养的3～5代HUVSMC为正常组及高糖组,分别以不同浓度Fe2+处理。培养24h后,四甲基氮唑盐(MMT)比色法测定细胞增殖水平,ELISA试剂盒检测细胞培养上清中MMP-2含量。结果:不同浓度葡萄糖环境下,0.0125～0.1000g/L浓度Fe2+均能促进HUVSMC增殖,且高糖组作用较正常组强;正常组Fe2+浓度在0.1g/L时能促进HUVSMC分泌MMP-2,高糖组所有浓度Fe2+均表现促分泌作用。结论:适当浓度的Fe2+能影响HUVSMC的生物学特性,促进HUVSMC的增殖与MMP-2的分泌,且高糖环境下促进作用更为显著。

柚皮苷和橙皮苷对人脐静脉平滑肌细胞增殖及凋亡的影响

目的通过对比两种主要的柑橘类黄酮—柚皮苷和橙皮苷对体外培养的人脐静脉平滑肌细胞(HUVSMCs)细胞活力、增殖和凋亡的影响,探究不同结构柑橘类黄酮对HUVSMCs功能的影响。方法将柚皮苷和橙皮苷与氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)一起作用于HUVSMCs24 h后,MTT法测细胞活力,流式细胞术测细胞周期和凋亡,实时荧光定量PCR和Western blot分别检测细胞增殖(PCNA和Cyclin D1)和凋亡(Caspase-3和Caspase-8)相关基因和蛋白的表达。结果两种柑橘黄酮均能抑制由ox-LDL引起的HUVSMCs细胞增殖,且相同浓度下,橙皮苷抑制增殖的作用更强(P<0.05);柚皮苷和橙皮苷均能降低PCNA和Cyclin D1基因和蛋白表达量,升高Caspase-3和Caspase-8表达量,且橙皮苷升高Caspase-3的作用较柚皮苷更强(P<0.05);结论与柚皮苷相比,橙皮苷具有更强的抑制由ox-LDL诱导的HUVSMCs细胞增殖作用,并促进其凋亡。

IL-6通过STAT3/Oct-1/ATM途径调节人脐静脉平滑肌细胞增殖

该研究旨在探究白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)对人脐静脉平滑肌细胞(human umbilical vascular smooth muscle cells,HUVSMCs)增殖的影响及具体的调节机制。通过细胞活性检测试剂盒(cell count kit 8,CCK-8)和EdU成像试剂盒检测HUVSMCs增殖的变化,蛋白质免疫印迹(Western blot)分析细胞的蛋白表达变化,特异性小RNA抑制八聚体转录因子-1(octamer transcription factor-1,Oct-1)的表达,免疫荧光技术检测Oct-1在细胞中的位置变化。结果显示,IL-6可以显著促进HUVSMCs的增殖,激活信号转导子和转录激活子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)的Ser727位点磷酸化,促进Oct-1和共济失调毛细血管扩张突变蛋白(ataxia telangiectasia mutated,ATM)的表达;此外,IL-6刺激细胞0 h和6 h时,Oct-1主要集中在细胞核中,12 h和24 h时,Oct-1部分转移至细胞质中。同时,抑制Oct-1可以有效降低细胞增殖,减少IL-6和ATM的表达,加入IL-6可以缓解由Oct-1抑制的HUVSMCs增殖。以上结果表明,IL-6可以通过STAT3/Oct-1/ATM途径影响HUVSMCs的增殖。这一发现为心血管疾病的基础治疗带来新思路。