3T3-L1细胞中FoxO1基因沉默对高分子量脂联素表达的影响

目的观察其受抑制后对二硫键A氧化还原酶样蛋白(disulfide-bond A oxidoreductase-like protein,Dsb A-L)和高分子量(high molecular weight,HMW)脂联素表达的影响.方法利用短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)构建慢病毒载体,沉默3T3-L1细胞的叉头状转录因子O1(fork head box transcription factor O1,FoxO1)基因,建立携带sh RNAFoxO1的慢病毒载体,用qPCR和Western blot法从基因和蛋白水平筛选出最佳干扰效果的sh RNA-FoxO1慢病毒载体.在后续实验中利用此FoxO1-sh RNA慢病毒载体沉默3T3-L1 FoxO1基因,通过Western blot检测Dsb A-L、HMW脂联素的表达.结果在3T3-L1细胞中筛选出sh RNA-1组对FoxO1基因的表达的沉默效果最佳,抑制率达到60%以上(与对照组相比,基因相对表达量1.04±0.04 v s 0.37±0.05,P<0.001);在后续实验选用sh RNA-1干预3T3-L1细胞,用Western blot检测,并与对照组比较,结果FoxO1蛋白表达显著减少(与GAPD H光密度比值分别是1.02±0.08和0.38±0.08,P<0.001),而Dsb A-L和HMW表达明显增加(Dsb A-L与GAPDH光密度比值分别是0.28±0.06和0.53±0.07,P=0.009;HMW脂联素与GAPDH光密度比值分别是0.05±0.02和0.11±0.03,P=0.043).结论在3T3-L1细胞中,沉默FoxO1基因后可促进Dsb A-L和HMW脂联素的表达.