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双重PCR法快速检测欧鳗鲡嗜水气单胞菌 被引量:19
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作者 郭松林 关瑞章 柳佩娟 《集美大学学报(自然科学版)》 CAS 2007年第4期294-300,共7页
采用已知的嗜水气单胞菌编码溶血素(Hemolysin)和外膜蛋白(Ompts)的基因序列为目的基因,依据其保守序列设计两对相应引物,用双重PCR方法检测了32株从发病欧鳗鲡分离的细菌,将检测结果与试剂盒快速生化鉴定结果进行比较.以嗜水气单胞菌... 采用已知的嗜水气单胞菌编码溶血素(Hemolysin)和外膜蛋白(Ompts)的基因序列为目的基因,依据其保守序列设计两对相应引物,用双重PCR方法检测了32株从发病欧鳗鲡分离的细菌,将检测结果与试剂盒快速生化鉴定结果进行比较.以嗜水气单胞菌为阳性对照,以大肠杆菌、枯草芽胞杆菌、铜绿假单胞菌、鳗弧菌、溶壁微球菌、金黄色葡萄球菌为阴性对照检测了嗜水气单胞菌溶血素与外膜蛋白基因的特异性.结果表明:被检测的32株欧鳗鲡致病菌中,检测到的4株既有溶血素基因又有外膜蛋白基因的细菌,其生化鉴定结果全部为嗜水气单胞菌,而仅具有外膜蛋白基因的13株细菌中只有5株生化鉴定结果为嗜水气单胞菌.证明双重PCR法可用于快速检测部分嗜水气单胞菌. 展开更多
关键词 嗜水气单胞菌 溶血素基因 外膜蛋白基因 PCR检测 生化鉴定
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不同海洋弧菌中5类溶血素基因的分布及其与溶血活性和磷脂酶活性的相关性 被引量:5
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作者 王淑娴 张晓华 +1 位作者 孙铂光 陈吉祥 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期570-578,共9页
用57株海洋弧菌,包括26株弧菌标准菌株、20株哈维氏弧菌、11株副溶血弧菌(从不同宿主和不同地理环境中分离得到),用PCR法合成5类相应的地高辛标记的溶血素基因探针,利用其进行Southern Blot,检测这5类溶血素基因在57株弧菌中的分布。结... 用57株海洋弧菌,包括26株弧菌标准菌株、20株哈维氏弧菌、11株副溶血弧菌(从不同宿主和不同地理环境中分离得到),用PCR法合成5类相应的地高辛标记的溶血素基因探针,利用其进行Southern Blot,检测这5类溶血素基因在57株弧菌中的分布。结果显示,在57海洋株弧菌中,含有TDH、HlyA、TLH、δ-VPH和HLX溶血素基因的菌株分别为2株、2株、49株、3株和30株。另外,1株霍氏格里蒙菌(Grimontia hollisae)和1株副溶血弧菌(V.parahaemolyticus)中分别含有2个TDH溶血素基因。用鱼血平板和卵磷脂平板检测57株弧菌的溶血活性和磷脂酶活性,结果表明,弧菌溶血活性和磷脂酶活性与TLH溶血素基因具有显著相关性,与另外4类溶血素基因的关系不明显。 展开更多
关键词 弧菌 溶血素基因 溶血活性 磷脂酶活性
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猪链球菌血清2型JX02株溶血素基因的克隆及序列分析 被引量:5
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作者 马有智 方维焕 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期460-462,共3页
采用特异性引物对猪链球菌 2型 (Streptococcus suistype 2 ) JX0 2菌株进行 PCR扩增 ,将扩增到的溶血素基因克隆到 p MD18- T质粒载体中 ,经鉴定后测序。结果显示 ,扩增的 JX0 2株溶血素基因长度为 14 94 bp,与 P1/ 7株和 U S-1933株... 采用特异性引物对猪链球菌 2型 (Streptococcus suistype 2 ) JX0 2菌株进行 PCR扩增 ,将扩增到的溶血素基因克隆到 p MD18- T质粒载体中 ,经鉴定后测序。结果显示 ,扩增的 JX0 2株溶血素基因长度为 14 94 bp,与 P1/ 7株和 U S-1933株等进行序列比较 ,核苷酸同源性为 10 0 %和 99.7% ,氨基酸序列同源性为 10 0 %和 99.8%。 展开更多
关键词 猪链球菌 血清2型 JX02株 溶血素基因 基因克隆 序列分析 毒力因子 保护性抗原
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VHH/TLH溶血素基因在海洋弧菌中分布的研究(英文) 被引量:1
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作者 王淑娴 张晓华 +2 位作者 钟英斌 孙铂光 陈吉祥 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期874-881,共8页
哈维氏弧菌(V.harveyi)的VHH溶血素是对海水养殖鱼类的潜在致病因子。哈维氏弧菌的VHH溶血素基因与副溶血弧菌(V.parahaemolyticus)的TLH热不稳定性溶血素基因具有高度相似性,其氨基酸序列的相似性达到85.6 %。根据哈维氏弧菌vhhA... 哈维氏弧菌(V.harveyi)的VHH溶血素是对海水养殖鱼类的潜在致病因子。哈维氏弧菌的VHH溶血素基因与副溶血弧菌(V.parahaemolyticus)的TLH热不稳定性溶血素基因具有高度相似性,其氨基酸序列的相似性达到85.6 %。根据哈维氏弧菌vhhA溶血素基因序列,合成一个地高辛标记的VHH基因探针,利用其进行Southern Blot ,检测VHH溶血素基因在57株弧菌(包括26株国际标准菌株,20株哈维氏弧菌,11株副溶血弧菌)中的分布情况。结果显示,VHH基因探针与13株弧菌标准菌株有强杂交信号,包括2株溶藻胶弧菌(V.alginolyticus) ,2株哈维氏弧菌以及1株霍氏格里蒙菌(Grimontia hollisae) ,坎贝氏弧菌(V.campbellii) ,辛辛那提弧菌(V.cincinatiensis) ,费氏弧菌(V.fischeri) ,拟态弧菌(V.mimicus) ,飘浮弧菌(V.natriegens) ,副溶血弧菌,解蛋白弧菌(V.proteolyticus)和火神弧菌(V.logei)。与6株弧菌标准菌株有弱杂交信号,包括鳗弧菌(V.anguillarum) ,河口弧菌(V.aestuarianus) ,美人鱼发光杆菌(Photobacterium damselae subsp.damselae) ,河弧菌(V.fluvialis) ,弗尼斯弧菌(V.furnissii)和创伤弧菌(V.vulnificus) ,而另外7株弧菌标准菌株中无杂交信号。所有的哈维氏弧菌菌株至少含有一条杂交带,其中菌株VIB645 , VIB 648和SF-1分别含有2条杂交带。11株副溶血弧菌中均含有一条杂交带。上述数据表明,vhh/tlh溶血素基因广泛分布于弧菌中,尤其是哈维氏弧菌相关菌株和费氏弧菌相关菌株中。另外对鳗弧菌VIB 72 ,坎贝氏弧菌VIB 285 ,飘浮弧菌VIB 299和哈维氏弧菌VIB 647的vhh/tlh溶血素基因进行克隆并测序,其氨基酸序列与VHH溶血素和TLH溶血素氨基酸序列的同源性分别为67 %~99 %和69 %~91 %。对vhh/tlh溶血素基因在弧菌中的分布研究,将有助于进一步确定这类溶血素基因在病原弧菌致病性中的作用。 展开更多
关键词 弧菌 哈维氏弧菌 副溶血弧菌 溶血素基因 VHH tlh
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鱼类烂鳃病病原柱状黄杆菌溶血素基因的初步研究 被引量:5
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作者 李烨 李楠 +2 位作者 张晓林 秦婷 聂品 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期604-607,共4页
柱状黄杆菌(Flavobacterium columnare)隶属于拟杆菌门、黄杆菌纲、黄杆菌目、黄杆菌科,是重要的水生动物致病菌且呈世界性分布,鱼类感染柱状黄杆菌以后会引发柱形病(Columnaris disease),在我国又称烂鳃病[1]。鲑科(Salmonidae)... 柱状黄杆菌(Flavobacterium columnare)隶属于拟杆菌门、黄杆菌纲、黄杆菌目、黄杆菌科,是重要的水生动物致病菌且呈世界性分布,鱼类感染柱状黄杆菌以后会引发柱形病(Columnaris disease),在我国又称烂鳃病[1]。鲑科(Salmonidae)、鲤科(Cyprinidae)、鲶科(Siluridae)等多科鱼类(几乎所有的淡水鱼类)都会感染柱形病[2]。患病鱼体会出现烂鳃、体表溃疡、组织坏死及鳍条腐烂等症状,死亡率可高达100%,全球每年因柱形病感染引起鱼类发病死亡所造成的经济损失极其严重[3]。 展开更多
关键词 柱状黄杆菌 溶血素 基因 表达
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上海市售海产品中副溶血性弧菌的分布状况 被引量:14
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作者 陈志芸 施春雷 +4 位作者 周秀娟 张茜 周敏 王大鹏 史贤明 《中国食品学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2015年第8期196-202,共7页
海产品中副溶血性弧菌引起的食物中毒已成为我国沿海地区细菌性食物中毒的首要病原。本研究中针对上海市闵行区某农贸市场的海产品开展为期1年的调查分析,共采集257份样品。按照国家标准(GB/T4789.7-2008),以硫代硫酸钠柠檬酸胆盐蔗糖... 海产品中副溶血性弧菌引起的食物中毒已成为我国沿海地区细菌性食物中毒的首要病原。本研究中针对上海市闵行区某农贸市场的海产品开展为期1年的调查分析,共采集257份样品。按照国家标准(GB/T4789.7-2008),以硫代硫酸钠柠檬酸胆盐蔗糖培养基(TCBS)和科玛嘉弧菌显色培养基(CV)两种选择性培养基辅助分离副溶血性弧菌疑似菌株,结合生化试验和PCR方法对疑似菌株进行鉴定,从84份阳性样本中获得107株副溶血性弧菌分离株。其结果表明:该农贸市场市售海产品中副溶血性弧菌的污染率为32.7%,其中牡蛎中副溶血性弧菌污染率最高(达54.4%),蛤蜊和海瓜子次之(分别为33.9%,25.6%)。牡蛎中副溶血性弧菌的污染水平与季节性变化直接相关。对107株分离株的主要毒力基因tdh和trh进行PCR筛查,tdh阳性菌株为10株,trh阳性菌株为1株,并且此株菌为tdh、trh双阳性菌株,tdh和trh的携带率分别为9.4%和1.0%,tdh、trh双基因的携带率为1.0%。结论:市售海产品中副溶血性弧菌污染状况较为严重。这为政府相关职能部门开展食品安全防控提供了参考依据。 展开更多
关键词 海产品 副溶血性弧菌 溶血毒素基因 PCR
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