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Determination of granulocyte-specific antigens on neutrophil FcA peceptorⅢbby polymerase chain reaction with sequence-specific primers,and genefrequencies in the Han population at Southern China 被引量:1
1
《中国输血杂志》 CAS CSCD 2001年第S1期384-,共1页
关键词 Determination of granulocyte-specific antigens on neutrophil FcA peceptor bby polymerase chain reaction with sequence-specific primers and genefrequencies in the Han population at Southern china
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The point mutation of p53 gene exon7 in hepatocellular carcinoma from Anhui Province,a non HCC prevalent area in China 被引量:13
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作者 LiuH WangY 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS CSCD 2002年第3期480-482,共3页
AIM: In hepatocellular carcinoma (HCC) prevalent areas of China, the point mutation of p53 exon7 is highly correlated with Hepatitis B virus(HBV) infection and aflatoxin B intake. While in non-HCC-prevalent areas of C... AIM: In hepatocellular carcinoma (HCC) prevalent areas of China, the point mutation of p53 exon7 is highly correlated with Hepatitis B virus(HBV) infection and aflatoxin B intake. While in non-HCC-prevalent areas of China, these factors are not so important in the etiology of HCC. Therefore, the point mutation of p53 exon7 may also be different than that in HCC-prevalent areas of China. The aim of this study is to investigate the status and carcinogenic role of the point mutation of p53 gene exon7 in hepatocellular carcinoma from Anhui Province, a non-HCC-prevalent area in China. METHODS: PCR PCR-SSCP and PCR-RFLP were applied to analyze the homozygous deletion and point mutation of p53 exon7 in HCC samples from Anhui, which were confirmed by DNA sequencing and Genbank comparison. RESULTS: In the 38 samples of hepatocellular carcinoma, no homozygous deletion of p53 exon7 was detected and point mutations of p53 exon7 were found in 4 cases, which were found to be heterozygous mutation of codon 249 with a mutation rate of 10.53%(4/38). The third base mutation(G-T) of p53 codon 249 was found by DNA sequencing and Genbank comparison. CONCLUSION: The incidence of point mutation of p53 codon 249 is lower in hepatocellular carcinoma and the heterozygous mutation of p53 exon7 found in these patients only indicate that they have genetic susceptibility to HCC. p53 codon 249 is a hotspot of p53 exon7 point mutation, suggesting that the point mutation of p53 exon 7 may not play a major role in the carcinogenesis of HCC in Anhui Province, a non-HCC-prevalent area in China. 展开更多
关键词 Genes p53 Base Sequence Carcinoma Hepatocellular china DNA Neoplasm EXONS Humans Liver Neoplasms Molecular Sequence Data Point Mutation polymerase Chain reaction Polymorphism Restriction Fragment Length Polymorphism Single-Stranded Conformational Research Support Non-U.S. Gov't Sequence Homology Nucleic Acid
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江苏地区汉族人群八个短串联重复序列基因座遗传多态性研究 被引量:3
3
作者 易龙 陈仕林 +6 位作者 许争峰 潘永久 杨驰 应锋 丁卫东 王勇 凌立君 《医学研究生学报》 CAS 2004年第2期117-119,共3页
目的 :了解江苏地区汉族人群D14S30 6、D1S 818、D3S1338、LPL、F13B、F13A0 1、FESFPS和vWA等八个短串联重复序列 (STR)基因座的遗传多态性 ,并获得该群体的遗传学数据。 方法 :采用Chelex 10 0法从江苏地区无亲缘关系的汉族个体血标... 目的 :了解江苏地区汉族人群D14S30 6、D1S 818、D3S1338、LPL、F13B、F13A0 1、FESFPS和vWA等八个短串联重复序列 (STR)基因座的遗传多态性 ,并获得该群体的遗传学数据。 方法 :采用Chelex 10 0法从江苏地区无亲缘关系的汉族个体血标本 12 2份中提取DNA。特异引物聚合酶链反应。产物经 6 %变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离 ,银染检测。 结果 :这八个STR基因座在江苏地区汉族人群均具有遗传多态性 ,并符合Hardy Wein berg定律 ,它们的个人识别率范围从F13B的 0 .6 86 9到vWA的 0 .92 85 ,非父排除率范围从F13B的 0 .2 4 99到vWA的 0 .6 0 2 6不等。 结论 展开更多
关键词 聚合酶链反应 遗传多态性 短串联重复序列 江苏地区汉族群体
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酪蛋白激酶1基因在恶性黑色素瘤中的表达及临床意义 被引量:2
4
作者 孙达欣 王宝胜 戴显伟 《实用肿瘤杂志》 CAS 2012年第1期64-67,共4页
目的研究酪蛋白激酶-1(CK1)在恶性黑色素瘤细胞及组织中的表达并探讨其临床意义。方法采用qRT-PCR检测CK1 mRNA在恶性黑色素瘤细胞及正常黑色素细胞中的表达。Western blot检测CK1蛋白在恶性黑色素瘤细胞及正常黑色素细胞中的表达。应... 目的研究酪蛋白激酶-1(CK1)在恶性黑色素瘤细胞及组织中的表达并探讨其临床意义。方法采用qRT-PCR检测CK1 mRNA在恶性黑色素瘤细胞及正常黑色素细胞中的表达。Western blot检测CK1蛋白在恶性黑色素瘤细胞及正常黑色素细胞中的表达。应用免疫组织化学方法检测59例恶性黑色素瘤及30例色素痣标本中CK1的表达。结果恶性黑色素瘤细胞及组织中CK1基因表达明显高于在黑色素细胞及色素痣组织中的表达,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 CK1基因在恶性黑色素瘤细胞及组织中高表达揭示CK1可能与恶性黑色素瘤的发病机制相关。以CK1为靶点的抑制剂或反义基因治疗黑色素瘤可能会展示广阔的前景。 展开更多
关键词 黑色素瘤 黑素细胞 酪蛋白激酶-1 基因 免疫组织化学 逆转录聚合酶链反应
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中国江苏地区汉人群五个高多态性短串联重复序列(STR)基因座基因频率分布调查 被引量:2
5
作者 易龙 杨驰 +4 位作者 王勇 史冬泉 李志刚 李继周 周晓军 《南京大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期576-584,共9页
为选择有较好基因频率分布的短串联重复序列遗传标记,对中国江苏地区随机汉族人群的D5S818、D19S253、D12S391、D2S1338和D22S684 5个微卫星基因座进行了基因频率分布调查,并评估它们作为法医遗传标记在中国江苏地区汉族群体中的效能。... 为选择有较好基因频率分布的短串联重复序列遗传标记,对中国江苏地区随机汉族人群的D5S818、D19S253、D12S391、D2S1338和D22S684 5个微卫星基因座进行了基因频率分布调查,并评估它们作为法医遗传标记在中国江苏地区汉族群体中的效能。采用Chelex-100法从中国江苏地区无血缘关系汉族个体的血样本105份中提取DNA,特异引物聚合酶链反应,产物经6%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,银染检测。这5个STR基因座在中国江苏地区汉人群均显具有高度遗传多态性并符合Hardy-Weinberg定律,它们的个人识别率(DP)范围从D5S818的0.892 8到 D2S1338的 0.952 7,非父排除率(PE)范围从 D5S818的0.538 5到D2S1338的0.690 7不等。5个基因座的联合 DP值和联合 PE分别为0.999 997和0.991 8。在D22S684基因座,首次在汉人群报道的等位基因频率分布与英国Caucasian,Afro-Caribbean和Asian fom the Indian 3个人群相比较,卡方检验有显著差异(P<0.005)。为常规应用这 8个STR遗传标记在中国江苏地区汉人群中进行亲子鉴定和个人识别提供了概率计算依据和群体遗传学数据。 展开更多
关键词 聚合酶链反应 遗传多态性 短串联重复序列 中国江苏地区汉族群体
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长链 PCR在中国汉族人多囊肾病 1型致病基因突变检测中的应用(英文) 被引量:1
6
作者 张树忠 梅长林 +7 位作者 孙田美 赵海丹 张殿勇 周玉琨 李林 张维莉 吴玉梅 沈学飞 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期507-510,共4页
目的 :研究特异性分离中国汉族人多囊肾病 1型致病基因 (polycystic kidney disease gene 1,PKD1)多拷贝区的方法 ,以排除同源序列对该基因突变检测的干扰。 方法 :利用与同源序列间的个别碱基差异设计 8对能涵盖 PKD1多拷贝区的长链 PC... 目的 :研究特异性分离中国汉族人多囊肾病 1型致病基因 (polycystic kidney disease gene 1,PKD1)多拷贝区的方法 ,以排除同源序列对该基因突变检测的干扰。 方法 :利用与同源序列间的个别碱基差异设计 8对能涵盖 PKD1多拷贝区的长链 PCR引物 ,分别对两例健康汉族人基因组 DNA进行 PCR,其扩增产物通过巢式 PCR进行序列测定。 结果 :通过优化PCR体系 ,尤其是以高质量基因组 DNA为模板 ,适当提高退火温度 ,经巢式 PCR测序证实扩增产物序列与 PKD1多拷贝区一致。 结论 :该研究采用的长链 PCR体系可克服同源序列的影响 ,适用于中国汉族人 PKD1多拷贝区的特异性扩增 ,为进一步通过单链构象多态性分析检测汉族人 PKD1突变位点奠定基础。 展开更多
关键词 长链PCR 中国汉族人 多囊肾病1型 致病基因 基因突变检测
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涎腺腺样囊性癌转移细胞株的Notch基因表达 被引量:6
7
作者 卢友光 杨春桃 +1 位作者 丁林灿 佘林 《福建医科大学学报》 2008年第1期6-8,29,共4页
目的筛选与涎腺腺样囊性癌转移相关的候选基因,并对其进行初步验证。方法限制片段差异显示PCR技术(RFDD-PCR)构建涎腺腺样囊性癌高低转移细胞株(ACC-M、ACC-2)基因表达谱,生物信息学分析两个表达谱的Notch基因,半定量RT-PCR技术对两细... 目的筛选与涎腺腺样囊性癌转移相关的候选基因,并对其进行初步验证。方法限制片段差异显示PCR技术(RFDD-PCR)构建涎腺腺样囊性癌高低转移细胞株(ACC-M、ACC-2)基因表达谱,生物信息学分析两个表达谱的Notch基因,半定量RT-PCR技术对两细胞株的Notch基因差异表达进行验证。结果用RFDD-PCR方法成功构建涎腺腺样囊性癌高低转移细胞株(ACC-M、ACC-2)的表达谱,共获得5420个基因片段,其中包含3个Notch基因。半定量RT-PCR证实Notch2、Notch4在ACC-M的表达高于ACC-2,Notch1在两表达谱未见表达,半定量RT-PCR发现其在ACC-M的表达高于ACC-2。Notch3在两个细胞株表达的差别无统计学意义。结论Notch1、Notch2、Notch4可能与涎腺腺样囊性癌的发生、发展、转移有关。 展开更多
关键词 腺样囊性 涎腺肿瘤 基因表达谱 逆转录聚合酶链反应 基因
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日本血吸虫(中国大陆株)谷胱甘肽转移酶编码区基因的体外扩增、克隆及在原核细胞的高效表达 被引量:1
8
作者 沈际佳 蒋作君 +2 位作者 余新炳 汪学龙 王维 《生物学杂志》 CAS CSCD 2000年第3期13-15,共3页
为表达、获取日本血吸虫谷胱甘肽转移酶 (SjGST)基因工程重组蛋白 ,以日本血吸虫 (中国大陆株 )cDNA为模板 ,设计、合成特定寡核苷酸引物 ,RT—PCR法扩增GST编码基因序列 ,将扩增产物连接 pGEM-T克隆载体 ,再亚克隆到真、原核表达质粒pB... 为表达、获取日本血吸虫谷胱甘肽转移酶 (SjGST)基因工程重组蛋白 ,以日本血吸虫 (中国大陆株 )cDNA为模板 ,设计、合成特定寡核苷酸引物 ,RT—PCR法扩增GST编码基因序列 ,将扩增产物连接 pGEM-T克隆载体 ,再亚克隆到真、原核表达质粒pBK -CMV中 ,转染大肠杆菌XL1 -blue ,经IPTG诱导后用SDS—PAGE分析表达效果。结果RT—PCR法特异性扩增出日本血吸虫GST编码区基因片段 ,其大小约为 670bp。重组 pGEM -T克隆载体和重组 -GST表达质粒经双酶切及以相应质粒为模板的PCR法均证实其中含有插入的GST目的基因。重组菌经IPTG诱导后以大小约 2 9KD融合蛋白形式表达 ,诱导后 6小时表达产物约占菌体蛋白 3 0 %。结论 pBK -SjcGST重组质粒的成功构建和高效表达 ,为进一步纯化提取基因工程重组日本血吸虫GST蛋白 ,分析其在血吸虫病免疫诊断、免疫预防中的作用提供了必要的条件。 展开更多
关键词 日本血吸虫病 SjGST 基因工程疫苗 免疫诊断
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儿童恶性肿瘤患者骨髓涂片人微小病毒B19-DNA的检测 被引量:3
9
作者 焦丽 张国成 +4 位作者 郭新莉 王晓明 许东亮 谢敏 李飚 《第四军医大学学报》 1998年第4期415-417,共3页
用巢式聚合酶链反应(PCR)技术检测儿童恶性肿瘤患者骨髓涂片人微小病毒B19-DNA,以了解此类患儿B19感染状况.方法:收集住院期间71例患有恶性肿瘤疾病的患儿骨髓标本,其中急或慢性白血病59例,恶性淋巴瘤12例,对照组非血液系统疾... 用巢式聚合酶链反应(PCR)技术检测儿童恶性肿瘤患者骨髓涂片人微小病毒B19-DNA,以了解此类患儿B19感染状况.方法:收集住院期间71例患有恶性肿瘤疾病的患儿骨髓标本,其中急或慢性白血病59例,恶性淋巴瘤12例,对照组非血液系统疾病的患儿骨髓标本26例行病例对照研究.用巢式PCR检测B19VP1基因DNA.结果:①化疗期间肿瘤患儿骨髓标本B19-DNA阳性检出率为33.8%(24/71),与对照组比较差异非常显著(P<0.01).②B19-DNA阳性的白血病和淋巴瘤无显著性差异(P>0,05).但有3例化疗前B19-DNA阴性,在强化化疗过程中检出B19-DNA.③急性淋巴细胞白血病化疗期有较高的B19感染,感染率41.2%,但白血病完全缓解率有稍上升趋势.结论:提示化疗及免疫功能低下的恶性肿瘤患儿易发生B19感染,并诱发骨髓造血功能低下和(或)慢性贫血. 展开更多
关键词 恶性肿瘤 骨髓涂片 微小病毒 感染性 溶血性贫血
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PPARγ_2基因Pro12Ala多态性与肥胖的相关性 被引量:4
10
作者 李秀丽 章琳 +1 位作者 杨渭临 王妮 《福建医科大学学报》 2007年第5期423-425,共3页
目的探讨PPARγ2基因Pro12ALa多态性与肥胖相关性。方法将研究对象按体质量指数(BMI)分为肥胖组(n=62)和非肥胖组(n=121)。再将所有对象分为糖尿病组(DM组,n=79)、对照组(NC组,n=104);DM组和NC组再分别根据BMI分为肥胖组与非肥胖组。应... 目的探讨PPARγ2基因Pro12ALa多态性与肥胖相关性。方法将研究对象按体质量指数(BMI)分为肥胖组(n=62)和非肥胖组(n=121)。再将所有对象分为糖尿病组(DM组,n=79)、对照组(NC组,n=104);DM组和NC组再分别根据BMI分为肥胖组与非肥胖组。应用聚合酶链反应-限制性内切酶片段长度多态性方法检测PPARγ2基因Pro12Ala多态性。比较肥胖与非肥胖组、DM组中的肥胖与非肥胖人群、NC组中的肥胖与非肥胖人群基因型频率及等位基因频率。结果肥胖组和非肥胖组基因型频率和等位基因频率无显著性差异(P>0.05)。进一步分组,DM组中肥胖组和非肥胖组基因型频率、等位基因频率之间无显著性差异(P>0.05),NC组中肥胖组和非肥胖组基因型频率无显著性差异(P>0.05),而等位基因频率有显著性差异(P<0.05)。结论PPARγ2基因Pro12Ala多态性与无T2DM家族史的正常人群肥胖有关,与糖尿病组中肥胖人群无关。 展开更多
关键词 过氧化物酶体增殖物激活受体 糖尿病 2型 肥胖症 多态性 限制性片断长度 聚合酶链反应
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二胺氧化酶在肝癌组织中的基因表达 被引量:4
11
作者 王红珊 王红梅 +1 位作者 吴琳 简美贞 《临床医药实践》 2007年第9期805-807,共3页
目的:探讨二胺氧化酶(DAO)在人类原发性肝癌组织中基因表达。方法:应用半定量逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测22例人类正常肝脏组织、36例人原发性肝癌旁组织和36例人原发性肝癌组织新鲜标本中基因mRNA的表达情况。结果:在肝癌组... 目的:探讨二胺氧化酶(DAO)在人类原发性肝癌组织中基因表达。方法:应用半定量逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测22例人类正常肝脏组织、36例人原发性肝癌旁组织和36例人原发性肝癌组织新鲜标本中基因mRNA的表达情况。结果:在肝癌组织中DAO基因呈高表达。结论:肝脏中DAO基因表达随肿瘤的发展而变化。 展开更多
关键词 原发性肝癌组织 二胺氧化酶 RT-PCR
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SYBR Green实时荧光PCR方法检测广谱人乳头瘤病毒的方法建立 被引量:1
12
作者 徐平 章晓鹰 张慧敏 《国际检验医学杂志》 CAS 2011年第7期734-735,738,共3页
目的建立实时荧光PCR方法以检测广谱人乳头瘤病毒。方法该实时荧光PCR方法利用了degenerate PCR引物与非特异性的SYBR Green染料替代通常使用的PCR特异性引物与探针,并与市售高危13型、低危6型试剂盒以及degener-ate PCR方法进行比较。... 目的建立实时荧光PCR方法以检测广谱人乳头瘤病毒。方法该实时荧光PCR方法利用了degenerate PCR引物与非特异性的SYBR Green染料替代通常使用的PCR特异性引物与探针,并与市售高危13型、低危6型试剂盒以及degener-ate PCR方法进行比较。结果对于用高危13型试剂盒及低危6型试剂盒检测的100例黏膜型人乳头瘤病毒阳性标本,用SYBR Green实时荧光PCR方法检出的阳性数为69例,敏感性为69%,相反,用SYBR Green实时荧光PCR方法检测出的40例皮肤型人乳头瘤病毒阳性标本,用高危13型试剂盒以及低危6型试剂盒检测均为阴性;对于用SYBR Green实时荧光PCR方法及degenerate PCR方法检测的90例黏膜型、60例皮肤型标本,其检测结果显示两种方法有高度一致性(Kappa=0.907)。结论与市售试剂盒相比,SYBR Green实时荧光PCR方法可以覆盖广谱的HPV型别(皮肤型与黏膜型),并且比degenerate PCR方法高效、快速和简便,不失为一个可用于临床与科研的良好检测手段。 展开更多
关键词 皮肤 人乳头瘤病毒 聚合酶链反应
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血液筛查室间质评中聚合酶链式反应循环阈值差异的分析 被引量:1
13
作者 刘李栋 伍晓菲 +6 位作者 贾尧 黄宇闻 莫琴 刘鸿 马荣钠 徐忠 王迅 《中国输血杂志》 CAS 2022年第9期933-936,共4页
目的分析血站实验室在室间质评中聚合酶链式反应(PCR)循环阈值(Ct值)的差异,对参评实验室提出质量改进建议。方法以2018~2021年血站实验室参加CITIC核酸检测血液筛查室间质评罗氏诊断试剂组的数据为来源,以HBV A亚型(400 IU/mL)、HCV 1... 目的分析血站实验室在室间质评中聚合酶链式反应(PCR)循环阈值(Ct值)的差异,对参评实验室提出质量改进建议。方法以2018~2021年血站实验室参加CITIC核酸检测血液筛查室间质评罗氏诊断试剂组的数据为来源,以HBV A亚型(400 IU/mL)、HCV 1b亚型(400 IU/mL)和HIV B基因型(500 IU/mL)3组质评标本的检测Ct值为对象,将数据先后按质评(标本)批次、试剂批次和不同实验室分组,利用方差分析的统计方法(P<0.05为差异有统计学意义),对各分组检测Ct值进行分析。结果3个项目(HBV/HCV/HIV依次按序)共有42个质评批次(13/12/17),28个试剂批次(11/8/9)和57个实验室(19/19/19)分组数据入选。质评批次分组分析表明,HBV和HCV各质评批次间无显著性差异,而除了2021年发布的2批次HIV质评标本与之前的批次存在显著性差异以外,其他HIV批次间也无显著性差异。各试剂批次分组分析表明,HCV和HIV检测各试剂批次间无显著性差异;而HBV有2批次试剂间存在显著性差异,其他试剂批次间均无显著性差异。在剔除质评批次标本分组和试剂批次标本分组中有显著性差异的数据组后,各实验室分组在HBV、HCV和HIV 3个项目中均存在极显著性差异,通过配对分析,发现有4家实验室在3个项目上与其他大多数实验室都存在显著性差异,主要表现为Ct均值偏高。结论对于质评标本检测结果正确的血站实验室,其PCR检测Ct值总体上存在差异,这种差异主要可能是由参评实验室检测能力造成。 展开更多
关键词 中国国际输血感染预防与控制项目 室间质评 核酸检测 聚合酶链式反应 循环阈值
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某地区吸毒人员丙型肝炎病毒的流行病学和基因分型研究 被引量:1
14
作者 王乃昌 吴立平 +6 位作者 刘玉萍 乔晓春 毛爱玲 段元宏 郭晓黎 聂晓勇 张丽芬 《山西职工医学院学报》 CAS 2001年第4期24-26,共3页
目的 :了解吸毒人群中丙型肝炎病毒 (HCV)的流行和基因分布现状 ,探索HCV的传播规律。方法 :采集本市强制戒毒所 5 76份吸毒人员和本站体检的从业人员 2 10份血清标本 ,用ELISA法对所有标本进行抗HCV的检测 ;检出抗HCV阳性的血清进一步... 目的 :了解吸毒人群中丙型肝炎病毒 (HCV)的流行和基因分布现状 ,探索HCV的传播规律。方法 :采集本市强制戒毒所 5 76份吸毒人员和本站体检的从业人员 2 10份血清标本 ,用ELISA法对所有标本进行抗HCV的检测 ;检出抗HCV阳性的血清进一步用特异性引物RT -PCR法进行基因分型。结果 :5 76份标本中 ,经血途径 (静脉吸毒、共用注射器 )吸毒或有输血史和用血制品史的吸毒者 ,其抗HCV检出率 ( 13 8% )明显高于经口吸毒者 ( 6 3% ) ,说明静脉吸毒、共用注射器吸毒、用血制品、输血都是感染HCV的危险因素。经口吸毒者抗HCB检出率明显高于从业人员 ,提示经口吸毒在传播HCV上具有重要意义。此外 ,本地籍吸毒者的抗HCV检出率 ( 5 7% )明显低于外省吸毒者 ( 2 7 7% )、外省有血途径感染机会的吸毒者 ,83 3%都感染了HCV ,本地有同样途径有吸毒者 ,仅有 8 6%感染了HCV ;这可能与外省有关城市的高感染率有关。结果还显示 ,山西省吸毒人群的HCV基因型的分布与从业人员较一致 ,均以 1b型为主 ( 78 9% ) ,其次为 2a型 ( 15 8% )和 1b/2a混合型 ( 5 3% ) ;未检出 1b型、2b型和 3a型。结论 :该吸毒人群中HCV基因以 1b型占优势。其分布与南方城市和本省的其他人群相近[6 ] 。血途径仍是HCV感染的主要途径 。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 吸毒 抗HCV 聚合酶链反应 基因型 流行病学
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东北虎和华南虎源传染性鼻气管炎病毒的PCR检测和序列分析 被引量:17
15
作者 肖建雄 单芬 +1 位作者 黄嘉欣 陈武 《野生动物》 2013年第3期146-151,共6页
为了鉴定东北虎和华南虎疑似传染性鼻气管炎病料中病毒的种类及进行流行病学分析,我们设计并合成了4对引物Fhv1、Fhv2、Fhv3、Fhv4用于扩增大小分别为193 bp,288 bp,312 bp和1088 bp的基因片段,同时对PCR扩增产物进行纯化、克隆至PMD18-... 为了鉴定东北虎和华南虎疑似传染性鼻气管炎病料中病毒的种类及进行流行病学分析,我们设计并合成了4对引物Fhv1、Fhv2、Fhv3、Fhv4用于扩增大小分别为193 bp,288 bp,312 bp和1088 bp的基因片段,同时对PCR扩增产物进行纯化、克隆至PMD18-T Simple载体、转化、酶切鉴定、测序及序列分析。结果显示设计并合成的4对引物Fhv1、Fhv2、Fhv3、Fhv4均扩增出与目的片段大小相符的明亮条带,分别约为200 bp、290 bp、310 bp、1100 bp;对Fhv3进行单酶切鉴定,出现大小分别约为160 bp、150 bp的2条条带;对Fhv4进行测序及序列分析,与GenBank^(TM)中已公布的猫传染性鼻气管炎病毒毒株(序列号:FJ478159.2)序列相似性为100%,与其他基因序列相似性均较低。本研究首次发现东北虎和华南虎源猫传染性鼻气管炎病毒,可为虎类的饲养管理及疾病的防控提供参考,为虎传染性鼻气管炎病毒的相关研究奠定基础。 展开更多
关键词 东北虎 华南虎 猫传染性鼻气管炎病毒 PCR 鉴定 序列分析
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套式PCR法检测间日疟原虫的研究 被引量:3
16
作者 孙明林 陈培霞 +2 位作者 薛采芳 万磊 刘忠湘 《地方病通报》 1996年第1期17-20,共4页
以滤纸采集间日疟原虫患者血样,点沸法萃取DNA模板,用间日疟原虫SSUrDNA特异序列为内外引物,进行双温度点套式PCR扩增,其检测原虫率水平为0.84×10 ̄(-6),特异性强。检测云南疟区发热患者血样166份... 以滤纸采集间日疟原虫患者血样,点沸法萃取DNA模板,用间日疟原虫SSUrDNA特异序列为内外引物,进行双温度点套式PCR扩增,其检测原虫率水平为0.84×10 ̄(-6),特异性强。检测云南疟区发热患者血样166份,检出率为63.9%,显著高于镜检法的48.2%。以镜检法为参照,本法的敏感性为97%,特异性为61%,阳性预期值和阴性预期值分别为65%和97%,表明是检测间日疟原虫感染的一个良好手段,可作为疟区流行病学监测、药物和疫苗效果考核及供血员筛选的有效工具。 展开更多
关键词 疟疾 间日疟原虫 聚合酶链反应 基因诊断
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poly(A)聚合酶加尾实时荧光定量聚合酶链反应法检测血清miR-103方法学建立和初步临床应用 被引量:1
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作者 臧素纲 陈曦 +2 位作者 陈鑫 周玉贵 韩霜 《实用医技杂志》 2019年第2期143-145,共3页
目的建立ploy(A)聚合酶加尾SYBR GreenⅠ实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法测定血标本中miR-103的检测方法,并进行初步的临床应用研究。方法使用Trizols溶解试剂提取待检标本总RNA,逆转录反应获得cDNA,通过SYBR GreenⅠ实时定量PCR法测... 目的建立ploy(A)聚合酶加尾SYBR GreenⅠ实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法测定血标本中miR-103的检测方法,并进行初步的临床应用研究。方法使用Trizols溶解试剂提取待检标本总RNA,逆转录反应获得cDNA,通过SYBR GreenⅠ实时定量PCR法测定血清标本mi R-103。结果本方法可以用于定量检测血清miR-103的浓度,其PCR反应熔解曲线表现为单峰状,PCR产物具有特异性,在10~3~10~6 copies/μL线性范围间检测重复性好,有良好的线性关系(R^2=0.999)。2型糖尿病患者标本中mi R-103表达水平明显低于健康对照人群,差异有统计学意义(P<0.05)。结论本研究所创立的用于检测血清mi R-103的poly(A)加尾实时荧光定量PCR法具有很好的灵敏度和特异性,为进一步应用研究提供方法学保证。 展开更多
关键词 聚合酶链反应 荧光免疫测定 miR-103 糖尿病 2型
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鸡贫血病毒全长基因串联体的构建
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作者 李秀梅 郭立力 +5 位作者 李颖 朱雅宁 石瑜 杨爱华 王健春 乔钢樑 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第12期14-16,共3页
为了进一步研究鸡贫血病毒全长基因组感染性分子克隆和生物学特性,试验采用PCR方法,根据GenBank上已发表的鸡贫血病毒Cux-1株序列合成1对引物,利用高保真酶扩增鸡贫血病毒全长基因组DNA,并克隆到pB luescriptⅡSK(+)载体上,获得全长基因... 为了进一步研究鸡贫血病毒全长基因组感染性分子克隆和生物学特性,试验采用PCR方法,根据GenBank上已发表的鸡贫血病毒Cux-1株序列合成1对引物,利用高保真酶扩增鸡贫血病毒全长基因组DNA,并克隆到pB luescriptⅡSK(+)载体上,获得全长基因组DNA分子克隆。通过不完全酶切将2个全长基因连接,并进行酶切鉴定和测序分析。结果表明:2个全长基因为顺向连接,全长基因串联体构建成功。 展开更多
关键词 鸡贫血病毒 聚合酶链式反应 分子克隆 基因串联
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弓形虫快速鉴定及国内实验动物感染调查 被引量:3
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作者 高正琴 《实验动物科学》 2018年第5期40-45,共6页
目的建立弓形虫快速鉴定方法,进行国内实验动物感染调查,为国家标准的修订提供参考依据。方法选择2012年12月至2016年12月期间全国60个不同厂家的12 394只实验动物(包括:猴290只、小型猪425只、犬579只、兔1 234只、地鼠372只、豚鼠1 36... 目的建立弓形虫快速鉴定方法,进行国内实验动物感染调查,为国家标准的修订提供参考依据。方法选择2012年12月至2016年12月期间全国60个不同厂家的12 394只实验动物(包括:猴290只、小型猪425只、犬579只、兔1 234只、地鼠372只、豚鼠1 363只、大鼠987只、小鼠7 144只)作为调查对象。采用ELISA方法检测动物血清中弓形虫抗体IgG和循环抗原CAg。利用PCR技术鉴定弓形虫p30基因。应用直接镜检实时动态显微视屏摄录技术识别弓形虫虫体。结果用ELISA从12 394份动物血清中检出4份弓形虫抗体IgG阳性。在这4份抗体IgG阳性样本中都发现了弓形虫虫体和DNA。通过PCR扩增p30基因的分子特性证明了样本中弓形虫病原体的存在。通过直接镜检实时动态显微视屏摄录技术,在这些样本中发现了弓形虫速殖子。2012年12月至2016年12月期间,对12 394只实验动物调查结果显示,弓形虫感染率为0.03%(4/12 394)。结论 ELISA、PCR、直接镜检实时动态显微视屏摄录技术相结合可完成实验动物的弓形虫检验工作。国内实验动物中存在弓形虫感染。因此,建议设计合理的筛查程序用于防止动物传播的弓形虫病。有必要开发新的诊断工具,特别是快检技术用于这一重要人兽共患病的未来研究。 展开更多
关键词 弓形虫 感染 鉴定 实验动物 中国 酶联免疫吸附试验 聚合酶链反应 直接镜检实时动态显微视屏摄录技术
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肾上腺脑白质营养不良外显子6、7、8基因突变研究
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作者 施晓容 陈育才 +4 位作者 谢文煌 章涛 黄梅芳 侯晓君 王柠 《中国优生与遗传杂志》 2003年第5期25-27,共3页
目的 探讨中国人X -连锁隐性遗传肾上腺脑白质营养不良 (adrenoleukodystrophy)的分子发病机理。方法 应用聚合酶链反应 (polymerasechainreaction)结合DNA测序技术 (DNAsequencing) ,对收集的 6例患者、患者母亲及 2 0名正常对照的AL... 目的 探讨中国人X -连锁隐性遗传肾上腺脑白质营养不良 (adrenoleukodystrophy)的分子发病机理。方法 应用聚合酶链反应 (polymerasechainreaction)结合DNA测序技术 (DNAsequencing) ,对收集的 6例患者、患者母亲及 2 0名正常对照的ALD基因外显子 6、7、8及其侧翼进行突变检测。结果 检出一例患者在ALD基因外显子 6发生了Val5 17Ile(G→A)的碱基错义突变 ;另一侧患者在ALD基因外显子 7发生了Gln5 5 6Arg(A→G)的碱基错义突变。ALD基因突变合成异常不稳定的蛋白 (ALDP) ,从而使VLCFA在脑白质、肾上腺及血浆聚集增多 ,导致疾病发生。结论 ALD基因突变是中国人X -连锁隐性遗传ALD发病原因之一。 展开更多
关键词 肾上腺脑白质营养不良 聚合酶链反应 DNA序列分析 基因突变
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