假单胞菌(Pseudomonas sp. cn 4902)甘露醇-1-磷酸脱氢酶基因克隆及表达

参照几种生物的甘露醇 1 磷酸脱氢酶基因 (mtlD)的序列设计引物 ,以极端耐盐的假单胞菌 (Pseudomonassp cn 4 90 2 )的总DNA为模板 ,采用PCR扩增、构建重组高效表达载体以及生物信息学研究等方法 ,进行基因克隆、表达及功能定性等研究。结果表明 ,克隆获得一长为 114 9bp的基因。经蛋白质保守区域研究 ,初步判别该基因为mtlD结构基因。将该基因与pBV2 2 0质粒构建成高效表达原核重组载体pBH。SDS PAGE电泳表明 ,含pBH的转化子产生特异的、分子量约为 4 1kD的蛋白带 ,表达量约占菌体可溶性蛋白 6 7%。转化子的耐盐水平比对照提高了约 1/5。在含 0 9mol/LNaCl的液体培养基中 ,转化子培养 2 4h后其生物量约是对照的 10 2倍 ,甘露醇含量约是对照的 4 1倍。可见 ,假单胞菌的甘露醇 1 磷酸脱氢酶基因是一个重要的耐盐相关基因 ,该基因已在GenBank登记 ,代号为AY112 6 96。

盐生盐杆菌含耐盐相关基因DNA片段的克隆

将盐生盐杆菌总 DNA的 Bam HI不完全酶切片段与质粒 p U C19连接成重组质粒 ,并以重组质粒转化 E. coli JM10 1.经 X- Gal- IPTG法筛选白色重组子 ,结合高盐平板检测 ,已经获得 3株比原受体菌的耐盐性提高 30 %～ 67%的转化子 .重组质粒酶切电泳分析表明 ,被克隆的盐生盐杆菌含耐盐相关基因的 DNA片段长度在 1.0～ 3.5kb之间 .

盐生植物海马齿中与K^＋离子胁迫有关的基因功能初步鉴定

盐生植物海马齿常年生长在海边沙地,能忍耐高盐干旱。本研究对从海马齿植物盐胁迫下的差减文库(SSH文库)中分离的3个全长基因SRTG152-Ⅰ、SRTG152-Ⅱ和SRTG152-Ⅲ(GenBank:FJ457924,FJ457925和FJ457926)进行了微生物表达和耐盐分析。3个全长基因分别插入pET-22b(+)表达载体,经过1mmol/L的IPTG在37℃下诱导3h,它们均获得了成功表达。耐盐性功能分析表明,3个基因对Ca2+、Mg2+和Na+离子没有抗性,而在900mmol/L高浓度K+离子的胁迫下与对照相比赋予菌株一定的K+离子抗性。所以,我们初步推测这3个全长基因SRTG152-Ⅰ、SRTG152-Ⅱ和SRTG152-Ⅲ是一类与K+离子的抗性相关的基因。