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Halo-tag标记技术及其在植物细胞成像中的应用 被引量:1
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作者 钱虹萍 罗鹏云 +4 位作者 刘帅 徐昌文 殷金环 崔亚宁 林金星 《植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期475-485,共11页
细胞是生物体的基本结构和功能单位,其内部复杂的组织结构、相互作用及动力学过程等决定着整个生物体的生命形态和生命过程。开展活体状态下细胞结构和功能研究,对于探索和掌握生命的本质具有重要意义。随着科学技术的不断进步,一系列... 细胞是生物体的基本结构和功能单位,其内部复杂的组织结构、相互作用及动力学过程等决定着整个生物体的生命形态和生命过程。开展活体状态下细胞结构和功能研究,对于探索和掌握生命的本质具有重要意义。随着科学技术的不断进步,一系列新的活细胞标记技术被不断革新。近年来,Halo-tag标记技术逐渐发展成为一种广泛应用的新型分子标记技术,在活细胞成像和追踪研究领域取得了极大进展,并逐渐在植物细胞成像中得到应用。该文首先系统介绍了Halo-tag标记技术的定义、分类和发展过程,然后详细介绍了Halo-tag标记技术发生脱卤有机反应的机制及其荧光配基的种类,最后从观察分子的精细定位、追踪分子的实时运动和检测分子间的相互作用3方面着重阐述了该技术在植物活细胞成像中的最新进展,以期为后续Halo-tag标记技术在植物中的潜在应用奠定理论基础并提供技术支持。 展开更多
关键词 新型标记技术 halo-tag标签 halo-tag配基 活细胞成像
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2-(2-(6-氯己氧基)乙氧基)乙氨的合成
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作者 林润锋 张珩 钟武 《化学试剂》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期161-163,共3页
2-(2-氨基乙氧基)乙醇溶于乙醇,用叔丁氧羰基酸酐(Boc2O)进行氨基保护得N-叔丁氧羰基-2-(2-氨基乙氧基)乙醇,与1-氯-6-溴己烷在正己烷及50%NaOH和四丁基溴化铵作用下缩合,得N-叔丁氧羰基-2-(2-(6-氯己氧基)乙氧基)乙氨,最后在二氯甲烷... 2-(2-氨基乙氧基)乙醇溶于乙醇,用叔丁氧羰基酸酐(Boc2O)进行氨基保护得N-叔丁氧羰基-2-(2-氨基乙氧基)乙醇,与1-氯-6-溴己烷在正己烷及50%NaOH和四丁基溴化铵作用下缩合,得N-叔丁氧羰基-2-(2-(6-氯己氧基)乙氧基)乙氨,最后在二氯甲烷及三氟乙酸混合液中脱保护,得标题化合物,总收率11.4%。 展开更多
关键词 HALO Tag蛋白标记 2-(2-(6-氯己氧基)乙氧基)乙氨 WILLIAMSON 反应
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重组标签蛋白在蛋白质纯化中的研究进展 被引量:15
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作者 崔超 呼延霆 尹大川 《现代生物医学进展》 CAS 2014年第32期6372-6378,6359,共8页
重组蛋白的表达纯化是研究蛋白质结构与功能的重要环节之一,表达重组蛋白宿主细胞的监测筛选和重组蛋白低水平可溶性表达、低回收率以及不稳定易水解等问题一直是蛋白质高通量纯化工艺中的难题。近年来,将多肽或蛋白质作为标签,与目标... 重组蛋白的表达纯化是研究蛋白质结构与功能的重要环节之一,表达重组蛋白宿主细胞的监测筛选和重组蛋白低水平可溶性表达、低回收率以及不稳定易水解等问题一直是蛋白质高通量纯化工艺中的难题。近年来,将多肽或蛋白质作为标签,与目标蛋白共表达的方法已经很大程度地解决了这一问题。因此,针对不同特性的蛋白质选择合适的标签纯化策略在重组蛋白纯化研究中是相当关键的环节。本文回顾了几种传统标签蛋白的研究概况(His-tag,Arg-tag,Flag-tag,GST-tag,MBP-tag等),着重对近年来新开发的了几种标签蛋白(Si-tag,Halo-tag,Intein-CBD-tag,ELPs-tag等)进行了深入探讨,并对新标签蛋白在蛋白质纯化中的应用前景作以展望。 展开更多
关键词 重组蛋白 标签蛋白 Si-tag halo-tag Intein-CBD-tag ELPs-tag
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新型蛋白标签在分子生物学中的应用 被引量:5
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作者 巨红妹 张霞 王云华 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2011年第8期632-634,共3页
蛋白标签技术在细胞蛋白定位等基础研究中的应用已经极为日常化和普遍化。传统的融合蛋白标签在蛋白定位、转运、相互作用以及构象改变等研究中发挥重要作用。但是来自这类标签的信号不能随意开启,从而会妨碍一些蛋白表达、定位及降解... 蛋白标签技术在细胞蛋白定位等基础研究中的应用已经极为日常化和普遍化。传统的融合蛋白标签在蛋白定位、转运、相互作用以及构象改变等研究中发挥重要作用。但是来自这类标签的信号不能随意开启,从而会妨碍一些蛋白表达、定位及降解的时间分辨研究。随着技术的不断进步,研究人员相继开发出了具有不同功能的新型蛋白标签。这些新型蛋白标签可为活细胞表面蛋白及细胞内蛋白成像、时间分辨标记、蛋白捕获及纯化、蛋白质定位及转运、活细胞内初期蛋白合成及复合体形成等蛋白动力学、脉冲追踪分析等方面的研究提供强有力的工具。 展开更多
关键词 蛋白标签 SNAP-TAG CLIP-tag halo-tag 综述
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戊型肝炎病毒ORF2蛋白与新型融合标签Halo Tag的融合表达 被引量:2
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作者 马天武 黄芬 +2 位作者 井申荣 曾韦锟 禹文海 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2012年第12期1583-1586,共4页
目的在大肠杆菌KRX中表达戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)ORF2与新型融合标签Halo Tag融合蛋白。方法采用RT-PCR法从4型HEV毒株中扩增ORF2基因部分片段(aa 382~620),插入含新型融合标签Halo Tag的原核表达载体pFN18the中,构建... 目的在大肠杆菌KRX中表达戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)ORF2与新型融合标签Halo Tag融合蛋白。方法采用RT-PCR法从4型HEV毒株中扩增ORF2基因部分片段(aa 382~620),插入含新型融合标签Halo Tag的原核表达载体pFN18the中,构建重组表达质粒pFN18the-ORF2,转化大肠杆菌KRX,鼠李糖诱导表达Halo-ORF2融合蛋白,纯化后Western blot分析融合蛋白的反应原性。结果经RT-PCR扩增出717 bp的目的基因片段;重组表达质粒pFN18the-ORF2经双酶切和测序鉴定构建正确;表达的融合蛋白Halo-ORF2相对分子质量为57 900,表达量约占菌体总蛋白的15%,以包涵体形式表达,纯化后纯度达90%以上,可与HEV IgG阳性血清特异性结合。结论在大肠杆菌KRX中表达了Halo-ORF2融合蛋白,为HEV结构蛋白抗原表位的筛选及戊肝血清学诊断的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 肝炎病毒 戊型 ORF2蛋白 HALOTAG 融合蛋白 原核细胞 基因表达
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缩硫脲类荧光探针分子的合成
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作者 黄亚飞 钟武 李松 《军事医学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期539-542,共4页
目的合成带有Halo-tag专属性配基小分子的缩硫脲(缩氨基硫脲)化合物,作为研究抗肿瘤金属螯合剂作用机制的探针分子。方法以相应的酮为原料与肼基甲硫酸甲硫酯缩合,缩合物用2-(2-氨基乙氧基)乙醇取代其中甲硫基,得到重要中间体3酮缩4-[2-... 目的合成带有Halo-tag专属性配基小分子的缩硫脲(缩氨基硫脲)化合物,作为研究抗肿瘤金属螯合剂作用机制的探针分子。方法以相应的酮为原料与肼基甲硫酸甲硫酯缩合,缩合物用2-(2-氨基乙氧基)乙醇取代其中甲硫基,得到重要中间体3酮缩4-[2-(2-羟基乙氧基)乙基]氨基硫脲,最后再与6-氯-1-溴己烷发生亲核取代反应生成目标化合物酮缩4-(2-[2-(6-氯己氧基)乙氧基]乙基)-3-氨基硫脲。目标化合物结构经1H-NMR、13C-NMR和LC-MS确认。结果与结论建立了抗肿瘤金属螯合剂与Halo-tag的专属性配基分子结合的制备路线,合成了3个连接Halo-tag专属性配基和高活性抗肿瘤金属螯合剂的探针分子,为研究该类抗肿瘤金属螯合剂的作用机制提供了工具分子。 展开更多
关键词 HALOTAG 连接子 金属螯合剂 抗肿瘤
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Probing the halo and cluster structure of exotic nuclei 被引量:1
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作者 叶沿林 吕林辉 +1 位作者 曹中鑫 肖军 《Chinese Physics C》 SCIE CAS CSCD 2012年第2期127-131,共5页
The Halo and cluster structure at the ground state of unstable nuclei are among the most exciting phenomena of current nuclear physics. Probing these structures requires a careful selection of reaction tools. In the p... The Halo and cluster structure at the ground state of unstable nuclei are among the most exciting phenomena of current nuclear physics. Probing these structures requires a careful selection of reaction tools. In the past twenty years, knockout reactions have been used intensively to investigate spectroscopically the structure of unstable nuclei. In this report we have illustrated the latest development of the knockout reaction tool and have emphasized the recoiled proton tagging method. A quantitative criteria is developed to evaluate the quasi-free feature of the knockout process. The newly discovered "towing mode" reaction tool is also outlined and its applicability at transit energies is discussed. 展开更多
关键词 halo nucleus knockout reaction proton tagging towing mode
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