苹果火疫解淀粉欧文氏USAW004菌株Harpin_(Ea) USAW004基因的克隆和高效表达

从感染火疫病的苹果幼芽中分离纯化解淀粉欧文氏Erwinia amylovora菌株USAW004.该菌株能引起非寄主植物烟草叶片过敏反应.通过构建USAW004基因组文库和菌落原位杂交方法,从USAW004基因组文库中成功筛选到HarpinEaUSAW004基因的阳性克隆,并将其亚克隆到pBluescript-II SK(+).测定阳性克隆片段核苷酸序列HarpinEaUSAW004基因的orf长度为1 212 bp,转录产物HarpinEaUSAW004由403个氨基酸残基组成.将HarpinEaUSAW004基因克隆到表达载体pET28a(+)的T7启动子下,成功构建了高效表达质粒pT7-HarpinEaUSAW004,在大肠杆菌JM109中,经异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导HarpinEaUSAW004基因高效表达,其表达产物可以诱导烟草叶片产生典型过敏反应症状.