miR-338-3p通过靶向PPM1B促进口腔癌细胞凋亡

目的探讨miR-338-3p在口腔鳞状细胞癌(OSCC)中的作用及其调节细胞增殖、迁移和凋亡的机制。方法以正常口腔组织或成人牙龈成纤维细胞(HGF)作为对照组,RT-qPCR法检测OSCC组织或OSCC细胞(TSCCA,CAL-27,Tb3.1)中miR-338-3p和PPM1B mRNA的表达情况;免疫组化法检测OSCC组织与正常组织PPM1B表达量;过表达miR-338-3p后,MTT法检测OSCC细胞增殖、Annexin V-FITC-PI双染试剂盒检测OSCC的凋亡;Western blot法检测PPM1B与凋亡相关蛋白Bax和Claved-caspase 3、Bcl-2的表达;采用生物信息学软件Target scan网站和荧光素酶检测法探索miR-338-3p和PPM1B潜在的靶向关系。通过敲除和过表达PPM1B探索其对OSCC细胞增殖、迁移和凋亡的影响。结果OSCC组织和细胞中miR-338-3p表达下调,而PPM1B mRNA与蛋白水平均升高(P<0.05)。过表达miR-338-3p可抑制OSCC细胞的增殖并诱导细胞凋亡(P<0.05)。Western blot检测显示,miR-338-3p可以促进Bax和Claved-caspase 3并抑制PPM1B、Bcl-2的表达(P<0.05)。敲除PPM1B也抑制了细胞的生长并诱导细胞凋亡(P<0.05)。荧光素酶报告基因检测显示PPM1B和miR-338-3p之间有直接结合(P<0.05)。过表达PPM1B部分逆转了miR-338-3p对OSCC细胞增殖、凋亡的作用(P<0.05)。结论miR-338-3p在OSCC患者和OSCC细胞系中表达下调。过表达miR-338-3p通过靶向PPM1B,抑制OSCC细胞增殖并诱导细胞凋亡。

血清miR-338-3p和miR-495-3p水平在重症腺病毒肺炎患儿诊断及病情评估中的应用

目的探讨血清微小RNA(miR)-338-3p和miR-495-3p水平在重症腺病毒肺炎患儿诊断及病情评估中的应用。方法选取2020年11月至2022年11月在沧州市中心医院接受治疗的腺病毒肺炎患儿130例作为观察组,根据患儿疾病的严重程度分为轻症肺炎组(n=90)和重症肺炎组(n=40),选取同期在沧州市中心医院检查的130例健康儿童为对照组,比较观察组和对照组、不同病情严重程度患儿血清miR-338-3p和miR-495-3p水平。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-338-3p和miR-495-3p对重症腺病毒肺炎的诊断价值。采用多因素Logistic回归分析重症腺病毒肺炎的影响因素。结果观察组患儿血清miR-338-3p水平比对照组低,miR-495-3p水平比对照组高(P<0.05)。轻症组和重症组电解质紊乱、循环系统并发症发生率及miR-338-3p水平、miR-495-3p水平、序贯器官衰竭评分和Murray肺损伤评分比较,差异有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清miR-338-3p、miR-495-3p辅助诊断重症腺病毒肺炎的曲线下面积(AUC)分别是0.745(95%CI 0.662~0.828)、0.774(95%CI 0.685~0.863),二者联合诊断的AUC为0.884(95%CI 0.821~0.946),均优于各项指标单独检测(Z=2.593、1.963,P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,miR-495-3p是影响重症腺病毒肺炎发生的危险因素,miR-338-3p为保护因素(P<0.05)。结论重症腺病毒肺炎患儿血清miR-338-3p水平降低,miR-495-3p水平升高,且二者联合检测对重症腺病毒肺炎有一定的诊断价值,可作为评估重症腺病毒肺炎病情严重程度的血清指标。

血清miR-338-3p联合肺部超声评分预测急性呼吸窘迫综合征新生儿的预后价值

目的探讨血清miR-338-3p、肺部超声评分(LUS)对新生儿呼吸窘迫综合征(ARDS)预后价值。方法选择2019年5月至2022年5月在深圳市宝安区石岩人民医院收治的120例ARDS新生儿作为ARDS组,其中男性76例,女性44例;胎龄28~40周,平均胎龄32.32周;出生体质量1.68~3.89 kg,平均出生体质量2.18 kg;新生儿Apgar评分4~8分,平均Apgar评分6.37分;分娩方式,顺产43例,剖宫产57例;病因,脓毒症10例,早产29例,肺炎25例,胎粪吸入综合征21例,其他15例。选择同时期50例正常新生儿为对照组,其中男性34例,女性16例;胎龄31~40周,平均胎龄33.04周;出生体质量1.94~4.02 kg,平均出生体质量2.74 kg;分娩方式,顺产17例,剖宫产33例。ARDS新生儿根据预后分为生存组与死亡组,根据胸部X射线片结果分为轻度组与重度组。实时定量聚合酶链式反应(qPCR)检测血浆miR-338-3p水平,进行床旁肺部LUS及新生儿急性生理学评分围生期补充Ⅱ(SNAPPE-Ⅱ)评分。比较各组血浆miR-338-3p水平、LUS。Pearson相关性分析SNAPPE-Ⅱ与miR-338-3p、LUS的相关性。受试者工作特性(ROC)曲线分析miR-338-3p、LUS对ARDS新生儿死亡的预测价值。采用Logistic回归分析法分析miR-338-3p水平、LUS与ARDS新生儿预后的关系。结果ARDS新生儿LUS高于正常新生儿[(29.45±3.42)分vs(10.04±2.01)分],血浆miR-338-3p水平低于正常新生儿[(10.04±2.01)分vs(1.12±0.11)分](P<0.001)。重度组LUS、SNAPPE-Ⅱ评分高于轻度组[(34.27±4.25)分vs(18.97±2.11)分、(31.84±3.52)分vs(18.56±2.85)分],miR-338-3p水平低于轻度组[(0.28±0.02)vs(0.96±0.04)](P<0.001)。SNAPPE-Ⅱ评分与LUS呈正相关(r=0.971,P<0.001),与miR-338-3p水平呈负相关(r=-0.918,P<0.001)。死亡组新生儿LUS高于生存组,miR-338-3p水平低于生存组[(37.02±3.63)分vs(20.77±3.02)分、(0.33±0.02)vs(0.75±0.02)。P<0.001]。LUS评分、血浆miR-338-3p及两者联合预测ARDS新生儿预后的曲线下面积(AUC)分别为0.851、0.835、0.929。血浆miR-338-3p、LUS是影响ARDS新生儿预后的危险因素(均P<0.05)。结论ARDS新生儿血清miR-338-3p低表达,LUS升高,两者可预测ARDS新生儿病情程度、预后。

甲状腺乳头状癌组织中miR-338-3p、PLCD3表达及其与病理参数、上皮—间质转化、预后的关系

目的探讨甲状腺乳头状癌(PTC)组织中微小核糖核酸-338-3p(miR-338-3p)、磷脂酶Cδ-3(PLCD3)表达及与病理参数、上皮—间质转化(EMT)、预后的关系。方法选取2016年1月—2020年12月商洛市中心医院乳甲外科收治接受手术切除的PTC患者152例,取其癌组织及对应癌旁组织,采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测miR-338-3p、PLCD3 mRNA表达,免疫组织化学法检测EMT相关蛋白[N-钙黏蛋白(N-Cad)、E-钙黏蛋白(E-Cad)、波形蛋白(VIM)];分析miR-338-3p、PLCD3 mRNA表达与PTC病理参数的关系;通过Targetscan数据库预测miR-338-3p与PLCD3的结合位点,采用Pearson法和二列相关性分析miR-338-3p与PLCD3 mRNA及二者与EMT相关蛋白在PTC组织中表达的相关性;根据PTC组织miR-338-3p、PLCD3 mRNA表达均值分为高/低miR-338-3p、PLCD3 mRNA表达组,通过Kaplan-Meier法绘制高/低miR-338-3p、PLCD3 mRNA表达PTC患者无病生存率(DFS)生存曲线;通过Cox回归分析PTC患者DFS的影响因素。结果与癌旁组织比较,PTC组织miR-338-3p和E-Cad蛋白阳性表达率降低,PLCD3 mRNA和N-Cad、VIM蛋白阳性表达率升高(t/χ^(2)/P=32.875/<0.001、15.575/<0.001、37.351/<0.001、21.984/<0.001、16.604/<0.001);miR-338-3p与PLCD3 mRNA在PTC组织中表达呈负相关(r/P=-0.712/<0.001)。PTC组织中miR-338-3p与N-Cad、VIM蛋白阳性表达呈负相关,与E-Cad蛋白阳性表达呈正相关(r/P=-0.642/<0.001、-0.617/<0.001、0.622/<0.001);PTC组织中PLCD3 mRNA与N-Cad、VIM蛋白阳性表达呈正相关,与E-Cad蛋白阳性表达呈负相关(r/P=0.657/<0.001、0.624/<0.001、-0.632/<0.001)。不同TNM分期、淋巴结转移的PTC组织miR-338-3p、PLCD3 mRNA表达差异有统计学意义(F/t/P=30.778/<0.001、3.430/0.001)。miR-338-3p高表达组3年DFS高于低表达组,PLCD3 mRNA高表达组3年DFS低于低表达组(χ^(2)/P=15.615/<0.001、16.088/<0.001)。TNM分期Ⅲ期、淋巴结转移、PLCD3 mRNA≥1.83为PTC患者DFS的独立危险因素[HR(95%CI)=3.127(1.361~7.604)、2.546(1.115~5.817)、2.854(1.178~6.919)],miR-338-3p≥0.57为独立保护因素[HR(95%CI)=0.306(0.116~0.804)]。结论PTC组织中miR-338-3p低表达和PLCD3 mRNA高表达,与TNM分期、淋巴结转移、EMT和预后有关,可能成为PTC诊治新靶点。

circ_0061140靶向miR-338-3p调控多发性骨髓瘤细胞的增殖和凋亡

目的:研究环状RNA 0061140(circ_0061140)对多发性骨髓瘤Sko-007细胞增殖和凋亡的影响和调控机制。方法:采用生物信息学数据库预测circ_0061140的靶miRNA,双荧光素酶报告实验证实circ_0061140与miR-338-3p靶向关系。实时定量PCR分析健康对照者和多发性骨髓瘤病人外周血中circ_0061140和miR-338-3p表达。将circ_0061140小干扰RNA(si-circ_0061140)、miR-338-3p模拟物、si-circ_0061140联合miR-338-3p抑制剂分别转染Sko-007,采用CCK-8法、流式细胞术分析干扰circ_0061140或过表达miR-338-3p或同时抑制circ_0061140和miR-338-3p对Sko-007细胞增殖、凋亡的影响。蛋白质印迹法分析B细胞淋巴瘤-2蛋白(Bcl-2)和Bcl相关x蛋白(Bax)表达变化。结果:miR-338-3p是circ_0061140达靶基因。circ_0061140在多发性骨髓瘤病人血清中的表达显著高于健康对照者(P<0.01),miR-338-3p在多发性骨髓瘤病人血清中的表达显著低于健康对照者(P<0.01)。干扰circ_0061140表达后Sko-007细胞增殖活力、Bcl-2表达显著降低(P<0.01),miR-338-3p和Bax表达、细胞凋亡率显著升高(P<0.01)。过表达miR-338-3p后Sko-007细胞增殖活力、Bcl-2表达显著降低(P<0.01),细胞凋亡率、Bax表达显著升高(P<0.01)。与干扰circ_0061140比较,同时抑制circ_0061140和miR-338-3p表达后Sko-007细胞增殖活力、Bcl-2表达显著升高(P<0.01),细胞凋亡率、Bax表达显著降低(P<0.01)。结论:circ_0061140通过靶向miR-338-3p促进多发性骨髓瘤细胞增殖,抑制细胞凋亡,在多发性骨髓瘤中具有致癌作用。

调控circARF3/miR-338-3p对ox-LDL诱导的血管内皮细胞损伤的影响

目的:探讨调控circARF3/miR-338-3p对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的血管内皮细胞损伤的影响及其可能作用机制。方法:采用双荧光素酶报告实验验证circARF3与miR-338-3p的靶向关系。人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)分为6组:空白对照组(未处理)、模型组(50 mg/L ox-LDL处理24 h)、pcDNA组、pcDNA-circARF3组、pcDNA-circARF3+miR-NC组、pcDNA-circARF3+miR-338-3p组,后4组基于脂质体转染法分别转染相应质粒后再用ox-LDL处理24 h。采用MTT法、Annexin V-FITC/PI双染法分别检测细胞增殖及凋亡,Western blot法检测细胞中Bax、Bcl-2蛋白的表达,采用试剂盒检测培养上清液中SOD、LDH活性和MDA的水平,ELISA法检测IL-6、TNF-α水平。结果:circARF3可靶向结合、负向调控miR-338-3p。与空白对照组比较,模型组增殖抑制率、凋亡率和Bax蛋白表达均升高,而Bcl-2蛋白表达降低,培养上清液中SOD活性降低,MDA水平和LDH活性升高,IL-6、TNF-α水平升高(P<0.05);与模型组、pcDNA组相比,pcDNA-circARF3组增殖抑制率、凋亡率和Bax蛋白表达减少,Bcl-2蛋白表达提高,培养上清液中SOD活性升高,MDA水平和LDH活性降低,IL-6、TNF-α水平降低(P<0.05);与pcDNA-circARF3+miR-NC组比较,pcDNA-circARF3+miR-338-3p组增殖抑制率、凋亡率和Bax蛋白表达均升高,Bcl-2蛋白表达降低,培养上清液中SOD活性降低,MDA水平和LDH活性升高,IL-6、TNF-α水平升高(P<0.05)。结论:circARF3过表达可能通过抑制miR-338-3p削弱ox-LDL引发的血管内皮细胞损伤。

miR-338-3p靶向核因子κB受体活化因子配体影响牙槽骨成骨细胞增殖及凋亡

背景:miR-338-3p能够抑制破骨细胞分化,下调核因子κB受体活化因子配体水平能够促进骨形成。然而miR-338-3p是否通过调控核因子κB受体活化因子配体表达影响牙槽骨成骨细胞增殖、凋亡尚不清楚。目的:探究miR-338-3p靶向核因子κB受体活化因子配体对牙槽骨成骨细胞增殖、凋亡的影响及机制。方法:分离人牙槽骨成骨细胞,对其进行细胞转染及Wnt-C59(Wnt/β-catenin通路抑制剂)处理,分为转染对照组、miR-338-3p组、miR-338-3p+对照组、miR-338-3p+核因子κB受体活化因子配体组和miR-338-3p+Wnt-C59组。双荧光素酶实验验证miR-338-3p对核因子κB受体活化因子配体的调控作用;CCK-8、EdU染色检测细胞增殖水平;流式细胞术检测细胞周期和凋亡水平;RT-qPCR检测细胞miR-338-3p、核因子κB受体活化因子配体、Wnt-3a、β-catenin、糖原合酶激酶3βmRNA表达水平;Western Blot检测细胞核因子κB受体活化因子配体、增殖细胞核抗原、Ki67、细胞周期蛋白D1、Bcl-2、Bax、天冬氨酸半胱氨酸蛋白酶3、Wnt-3a、β-catenin、糖原合酶激酶3β蛋白表达水平。结果与结论:①miR-338-3p靶向调控核因子κB受体活化因子配体;②过表达miR-338-3p后,细胞存活率、EdU阳性细胞率、S期细胞比例升高,细胞凋亡率降低,miR-338-3p、增殖细胞核抗原、Ki67、细胞周期蛋白D1、Bcl-2、Wnt-3a、β-catenin mRNA和蛋白水平升高,Bax、天冬氨酸半胱氨酸蛋白酶3、核因子κB受体活化因子配体、糖原合酶激酶3βmRNA和蛋白水平降低(均P<0.05);③过表达核因子κB受体活化因子配体或Wnt-C59处理能够减弱过表达miR-338-3p对细胞增殖、凋亡的影响(均P<0.05);④结果表明,miR-338-3p靶向核因子κB受体活化因子配体表达可促进牙槽骨成骨细胞增殖,并抑制细胞凋亡,其可能通过激活Wnt/β-catenin信号通路发挥作用。

未破裂颅内动脉瘤病人血清miR-338-3p表达变化及临床意义

目的:分析未破裂颅内动脉瘤(UIAs)病人血清微小RNA-338-3p(miR-338-3p)的表达情况及其临床意义。方法:选取住院的UIAs病人105例作为观察组,另选取同期无脑动脉瘤的常规体检者100名作为对照组。UIAs病人入院后1 d、对照组体检当日的清晨空腹肘静脉血,检测血清miR-338-3p、血清基质金属蛋白酶2(MMP-2)水平,分析血清miR-338-3p、MMP-2表达与UIAs病人临床病理特征的关系,采用Pearson相关分析UIAs病人血清miR-338-3p与MMP-2的相关性。结果:观察组血清miR-338-3p、MMP-2水平均高于对照组(P<0.01和P<0.05)。不同动脉瘤直径及动脉瘤数目病人血清miR-338-3p、MMP-2水平差异均有统计学意义(P<0.05~P<0.01)。Pearson相关分析显示,UIAs病人血清miR-338-3p与MMP-2呈显著正相关关系(P<0.01)。结论:UIAs病人血清miR-338-3p、MMP-2水平均高于对照组,二者呈正相关,且均与病人动脉瘤直径和数目有关。

circ_0000069靶向miR-338-3p对非小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的 探讨环状RNA 0000069(circ_0000069)是否靶向miR-338-3p调控非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞增殖、迁移和侵袭。方法 采用qRT-PCR技术检测NSCLC患者癌组织、癌旁正常组织中circ_0000069和miR-338-3p表达量。采用CCK-8、Transwell实验分析抑制circ_0000069或过表达miR-338-3p对A549细胞增殖活力、迁移和侵袭的影响。使用荧光素酶酶报告实验和qRT-PCR分析circ_0000069和miR-338-3p之间的相互作用。结果NSCLC组织中circ_0000069表达量较癌旁组织升高(P<0.05),而miR-338-3p表达量显著降低(P<0.05)。抑制circ_0000069或过表达miR-338-3p后A549细胞活力、迁移和侵袭细胞数显著降低(P<0.05)。miR-338-3p是circ_0000069的靶基因,circ_0000069靶向负调控miR-338-3p表达。干扰miR-338-3p表达显著减弱circ_0000069对A549细胞增殖、迁移和侵袭的抑制(P<0.05)。结论 抑制circ_0000069通过上调miR-338-3p抑制NSCLC细胞A549增殖、迁移和侵袭。

下调lncRNA DSCAM-AS1表达通过负调控miR-338-3p抑制结直肠癌细胞增殖、侵袭和迁移的机制

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)DSCAM-AS1对结直肠癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响及潜在的作用机制。方法将miR-NC组(转染miR-NC)、miR-338-3p组(转染miR-338-3p mimics)、si-NC组(转染si-NC)、si-DSCAM-AS1组(转染DSCAM-AS1)、pcDNA组(转染pcDNA)、pcDNA-DSCAM-AS1组(转染pcDNA-DSCAM-AS1)、si-DSCAM-AS1+anti-miR-NC组(共转染si-DSCAM-AS1和anti-miR-NC)、si-DSCAM-AS1+anti-miR-338-3p组(共转染si-DSCAM-AS1和anti-miR-338-3p)均用脂质体法转染至结直肠癌SW480细胞中;采用qRT-聚合酶链反应(PCR)检测miR-338-3p和DSCAM-AS1 mRNA的表达水平;采用双荧光素酶报告基因检测荧光活性;各组细胞侵袭和迁移采用Transwell检测;细胞活性采用噻唑蓝(MTT)法检测;蛋白表达采用Western印迹检测。结果与正常结直黏膜上皮细胞NCM460相比,结直肠癌细胞SW480、HT29、SW1116中DSCAM-AS1 mRNA表达水平显著升高(P<0.05),miR-338-3p表达水平显著降低(P<0.05);下调DSCAM-AS1、过表达miR-338-3p均可显著抑制SW480细胞增殖、迁移和侵袭及CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白表达(P<0.05)。DSCAM-AS1抑制miR-338-3p表达,靶向调控miR-338-3p的表达,部分逆转下调DSCAM-AS1对SW480细胞侵袭、迁移和增殖的抑制作用。结论lncRNA DSCAM-AS1对结直肠癌细胞的调控机制可能与靶向调控miR-338-3p有关,可对癌细胞的侵袭、迁移、增殖起到抑制作用,可为结直肠癌的治疗、预防和诊断提供新靶点。

健脾合剂调控miRNA-219a-5p、miRNA-338-3p干预IBS-D大鼠的作用机制研究

目的基于miRNA-219a-5p、miRNA-338-3p探讨健脾合剂干预腹泻型肠易激综合征(Diarrhea-predominant irritable bowel syndrome,IBS-D)大鼠的作用机制。方法采用急-慢应激法联合番泻叶灌胃法制备IBS-D大鼠模型,分组后给予健脾合剂干预。实验过程中及治疗完成后,记录大鼠一般情况、体质量及粪便性状;采用直肠扩张下腹壁回缩反射(Abdominal withdrawal reflex,AWR)评分检测大鼠的疼痛阈值,评估IBS-D大鼠的内脏敏感性;采用显色基质鲎试剂检测大鼠血液中的细菌内毒素含量,观察其肠道通透性变化;观察大鼠结肠黏膜组织病理,对其肠黏膜状态进行评估;并使用RT-PCR法检测大鼠结肠黏膜miR-219a-5p、miR-338-3p的含量。结果粪便性状评分、内脏敏感性测定、组织病理结果表明IBS-D大鼠模型制备成功。与空白组比较,模型组大鼠大便稀溏甚则水样,体质量下降;健脾合剂治疗后,低剂量组及高剂量组大鼠大便成形,粪便Bristol评分显著降低,体质量有所增加。内脏敏感性结果显示,IBS-D大鼠内脏疼痛阈值下降;健脾合剂干预后,低剂量组及高剂量组大鼠内脏疼痛阈值有所升高,内脏敏感性降低。显色基质鲎试剂检测结果显示,IBS-D大鼠血清内毒素含量升高;健脾合剂干预后,低剂量组及高剂量组大鼠内毒素含量较前下降,肠道通透性降低。大鼠结肠粘膜病理结果表明,IBS-D大鼠结肠组织黏膜上皮轻度破损,局部可见水肿。健脾合剂治疗后,低剂量组及高剂量组大鼠结肠黏膜上述情况得到有效改善。Realtime PCR法检测大鼠结肠粘膜结果显示,IBS-D大鼠结肠黏膜miR-219a-5p、miR-338-3p水平显著降低,健脾合剂治疗后,高剂量组大鼠miR-219a-5p、miR-338-3p含量有所升高。结论健脾合剂对改善IBS-D症状具有一定的作用,健脾合剂能够增加IBS-D大鼠结肠黏膜miR-219a-5p、miR-338-3p水平,提示其可能通过对miR-219a-5p、miR-338-3p的调控降低IBS-D大鼠的肠道通透性及内脏敏感性,从而发挥疗效。

Circ_0058063通过miR-338-3p靶向SOX4调控膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究

目的:探讨Circ_0058063通过miR-338-3p靶向SOX4调控膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭。方法:qRT-PCR、Western Blot分别检测正常人尿路上皮细胞系SV-HUC-1细胞、T24膀胱癌细胞Circ_0058063、miR-338-3p、SOX4表达;将si-NC、si-Circ_0058063、si-Circ_0058063+inhibitor NC、si-Circ_0058063+miR-338-3p inhibitor分别转染至T24细胞并命名为si-NC组、si-Circ_0058063组、si-Circ_0058063+inhibitor NC组、si-Circ_0058063+miR-338-3p inhibitor组,未做任何处理的T24细胞记为NC组。双荧光素酶报告基因实验检测Circ_0058063、miR-338-3p、SOX4关系;qRT-PCR检测T24细胞中Circ_0058063、miR-338-3p表达;CCK-8法检测T24细胞增殖情况;流式细胞术检测T24细胞凋亡率;Transwell检测T24细胞侵袭、迁移数量;Western Blot检测T24细胞SOX4、E-cadherin、Vimentin、N-cadherin的蛋白水平。结果:与SV-HUC-1细胞相比,T24细胞中Circ_00 58063、SOX4水平显著上调(P<0.05),miR-338-3p表达显著下调(P<0.05)。与NC组、si-NC组相比,si-Circ_0058063组T24细胞OD_(450)值、迁移、侵袭细胞数量、Circ_0058063表达量、SOX4、N-cadherin、Vimentin蛋白水平显著下降(P<0.05),T24细胞凋亡率、miR-338-3p表达、E-cadherin蛋白水平显著升高(P<0.05);而miR-338-3p表达下调逆转了沉默Circ_0058063抑制T24细胞增殖、迁移和侵袭的效果;Circ_0058063靶向调节miR-338-3p/SOX4轴。结论:沉默Circ_0058063可能通过上调miR-338-3p来抑制SOX4表达,进而对膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭产生影响。

Circ_0007841通过miR-338-3p靶向JAG1促进肝癌细胞恶性生物学活性的机制研究

目的:探究肝癌恶性生物学活性的调控机制。方法:购买人源正常肝上皮细胞THLE-3与肝癌细胞系BEL-7405、SNU-387、MHCC-97H、HCCLM3、Huh7,转染si-0007841/NC或miR-338-3p inhibitor/NC至Huh7细胞,qRT-PCR检测circ_0007841、miR-338-3p、JAG1的表达。在各组Huh7中利用CCK-8、Transwell检测各组的增殖活力、迁移、侵袭能力变化。Circular RNA Interactome、miRWalk预测circ_0007841与miR-338-3p、miR-338-3p与JAG1的靶向关系,双荧光素酶报告实验验证靶向结合。结果:circ_0007841在HCC中呈高表达,抑制circ_0007841的表达可以抑制HCC的增殖活力与迁移、侵袭能力;进一步抑制miR-338-3p的表达后,可以部分逆转低表达circ_0007841对HCC恶性行为的遏制。在HCC中,circ_0007841可以靶向抑制miR-338-3p的表达,而miR-338-3p则可以靶向抑制JAG1的表达。结论:肝癌中高表达的circ_0007841通过竞争性结合miR-338-3p增加JAG1转录,最终促进肝癌细胞恶性生物学活性。

LncRNA LINC00525调控miR-338-3p/RUNX2轴对子宫颈癌细胞生物学行为的影响

目的:探讨长链非编码RNA长基因非蛋白质编码RNA 525(LncRNA LINC00525)调控miR-338-3p/核心结合因子(RUNX2)轴对子宫颈癌细胞生物学行为的影响。方法:样本选自2018年10月至2020年10月期间石家庄市第四医院的52例子宫颈癌组织和52例癌旁组织,以及子宫颈癌细胞HeLa、C33A、SiHa和人正常子宫颈上皮细胞Ect1/E6E7。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测LINC00525、miR-338-3p、RUNX2 mRNA的表达;通过细胞计数试剂8(CCK8)、Transwell、蛋白印迹(Western blot)实验检测HeLa细胞的增殖、迁移与侵袭、RUNX2蛋白的表达;采用双荧光素酶报告基因、RNA下拉实验验证LINC00525与miR-338-3p、miR-338-3p与RUNX2的关系。结果:①与癌旁组织比较,子宫颈癌组织中LINC00525、RUNX2 mRNA表达水平显著升高(P<0.05),miR-338-3p表达水平显著降低(P<0.05);与人正常子宫颈上皮细胞Ect1/E6E7比较,子宫颈癌HeLa、C33A、SiHa细胞中LINC00525、RUNX2 mRNA表达水平显著升高(P<0.05),miR-338-3p表达水平显著降低(P<0.05),且HeLa细胞变化最显著。②下调LINC00525抑制HeLa细胞增殖、迁移与侵袭。③LINC00525靶向负调控miR-338-3p的表达;miR-338-3p靶向下调RUNX2的表达;④下调miR-338-3p表达减弱了下调LINC00525对HeLa细胞增殖、迁移与侵袭的抑制作用,过表达RUNX2减弱了下调LINC00525或过表达miR-338-3p对HeLa细胞增殖、迁移与侵袭的抑制作用。结论:下调LINC00525可能通过调控miR-338-3p/RUNX2轴抑制子宫颈癌细胞增殖、迁移与侵袭。

miR-338-5p通过靶向TSHZ3促进膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的探讨miR-338-5p通过靶向TSHZ3调控膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制。方法实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-338-5p在33例膀胱癌组织和癌旁组织中的表达;在膀胱癌T24和UM-UC-3细胞中分别转染mimics-NC、miR-338-5p mimics、inhibitor-NC和miR-338-5p inhibitor,qRT-PCR检测转染效率;采用CCK-8实验检测过表达或者敲低miR-338-5p对膀胱癌细胞增殖能力的影响;Transwell实验检测miR-338-5p对膀胱癌细胞迁移和侵袭能力的影响;TargetScan、miRDB和Targetminer数据库预测miR-338-5p潜在的靶基因,选定靶基因TSHZ3;双萤光素酶报告基因实验和Western blot验证miR-338-5p和TSHZ3的靶向关系;在膀胱癌细胞中共转染miR-338-5p mimics和TSHZ3过表达质粒,通过CCK-8和Transwell实验检测细胞的增殖、迁移和侵袭能力;Western blot检测过表达miR-338-5p或者TSHZ3对Wnt/β-catenin信号通路的影响。结果miR-338-5p在膀胱癌中表达上调(P<0.05);过表达miR-338-5p提高了膀胱癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力(P<0.05),转染miR-338-5p inhibitor则降低了膀胱癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力(P<0.05);生物信息学分析和双萤光素酶报告基因实验表明,miR-338-5p和TSHZ3存在靶向关系;挽救实验表明,同时过表达miR-338-5p和TSHZ3部分消除了过表达miR-338-5p对膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的促进作用(P<0.05);Western blot结果显示,与mimics-NC组比较,过表达miR-338-5p降低了TSHZ3蛋白表达水平,提高了Wnt3a和β-catenin蛋白表达水平(P<0.05);过表达TSHZ3降低了Wnt3a和β-catenin蛋白表达水平(P<0.05)。结论miR-338-5p在膀胱癌中表达上调,通过靶向抑制TSHZ3的表达促进膀胱癌的增殖、迁移和侵袭,该机制可能与激活Wnt/β-catenin信号通路有关。

卵巢上皮性癌组织中miR-338-3p的表达

目的:检测微小RNA-338-3p(miR-338-3p)在卵巢上皮性癌组织中的表达情况,探讨其在卵巢癌发生发展中的作用。方法:采用qRT-PCR检测20例正常卵巢组织、20例良性卵巢上皮性肿瘤组织和65例卵巢上皮性癌组织中miR-338-3p的表达情况,分析卵巢上皮性癌与组织中miR-338-3p表达与临床病理指标的关系,Kaplan-Meier法分析miR-338-3p表达对卵巢癌患者生存的影响。结果:卵巢上皮性癌组织中miR-338-3p的表达显著低于正常卵巢组织和良性卵巢上皮性肿瘤组织(P<0.05)。临床分期晚、组织级别高、有淋巴结转移的卵巢上皮性癌组织中miR-338-3p表达低(P<0.05)。miR-338-3p表达水平相对较低的卵巢上皮性癌患者的总体生存率和无进展生存期明显短于miR-338-3p表达水平相对较高的患者(P<0.05)。结论:miR-338-3p低表达与卵巢癌患者预后不良有关,可作为卵巢癌预后的标记物。

miR-338-3p和MACC1基因在卵巢上皮性癌(EOC)组织中的表达及其意义

目的探讨微RNA-338-3p(miR-338-3p)和MET转录调剂因子MACC1在卵巢上皮性癌(epithelial ovariancancer,EOC)组织中的表达及其临床意义。方法采用实时荧光定量PCR技术检测20例正常卵巢组织、20例卵巢良性上皮性肿瘤组织和65例EOC组织中miR-338-3p和 MACC1 基因的表达情况,分析二者表达的相关性及其与EOC临床病理指标的关系,Log-rank和Cox回归分析影响EOC患者复发和死亡的危险因素,Kaplan-Meier法分析miR-338-3p和MACC1表达对EOC患者生存的影响。结果 EOC组织中miR-338-3p和 MACC1 基因的表达分别为0.331±0.038和0.774± 0.025 ,与正常卵巢组织和良性卵巢肿瘤组织中的表达差异有统计学意义( F=77.916,P<0.001;F=77.945,P <0.001),不同性质卵巢组织中miR-338-3p和MACC1的表达呈明显负相关( r=-0.968,P <0.001)。在EOC中,临床分期越晚、组织级别越高、有淋巴结转移的癌组织中miR-338-3p表达越低、MACC1表达越高。Log-rank单因素分析显示miR-338-3p低表达与EOC患者的复发( P =0.038,HR=4.139,95%CI:1.271~8.078)和死亡( P =0.008,HR=3.007,95%CI:1.217~7.431)相关。与其他患者相比,miR-338-3p低表达且MACC1高表达的EOC患者的总体生存率和无进展生存率最低(χ 2= 16.960,P=0.001;χ 2=18.930,P =0.000)。结论 miR-338-3p低表达和MACC1高表达可能与EOC患者预后不良相关,二者可能共同参与EOC的进展和复发。

卵巢上皮性癌细胞中miR-338-3p过表达对MACC1表达及细胞迁移和侵袭的影响

目的:探讨卵巢上皮性癌OVCAR-3和OVCAR-8细胞中miR-338-3p过表达对MET转录调节因子(MACC1)表达及细胞迁移和侵袭的影响。方法:在线医学数据库检索miR-338-3p在卵巢上皮性癌组织中的表达,预测其下游靶基因,双荧光素酶报告实验验证其靶基因;miR-338-3p和MACC1过表达慢病毒载体及阴性对照慢病毒载体分别转染OVCAR-3和OVCAR-8细胞,Transwell实验分析其对OVCAR-3和OVCAR-8迁移和侵袭的影响,Western blot法检测经典Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达的影响。结果:miR-338-3p在上皮性卵巢癌组织中的表达低于正常卵巢组织,MACC1是miR-338-3p下游的靶基因之一。过表达MACC1可促进OVCAR-3和OVCAR-8细胞的迁移和侵袭(P<0.05),而过表达miR-338-3p可抑制OVCAR-3和OVCAR-8细胞的迁移和侵袭(P<0.05),也可抑制MACC1、Wnt3a和p-LRP6蛋白的表达(P<0.05)。结论:miR-338-3p可能通过调节MACC1和经典Wnt/β-catenin通路影响卵巢上皮性癌细胞的迁移和侵袭。

MicroRNA-338-3p真核表达载体的构建及其对胃癌细胞SGC-7901增殖的影响

目的构建microR-338-3p(miR-338-3p)过表达载体并探究其对人胃癌SGC-7901细胞系体外增殖的影响。方法以pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR真核表达载体为基础,经EcoRⅠ和HindⅢ双酶切和纯化后与人工合成miR-338-3p的寡聚核苷酸进行连接,转化至E.Coli Top10后,经过DNA测序、BLAST检测及验证;将构建成功的载体瞬时转染入SGC-7901细胞系中,应用Real-time PCR检测miR-338-3p的表达水平,利用MTT法检测细胞增殖的改变。结果测序验证成功构建了miR-338-3p的真核表达载体;瞬时转染SGC-7901细胞后miR-338-3p表达水平有显著增加,能够抑制SGC-7901细胞的体外增殖。结论成功构建了miR-338-3p的真核表达载体,获得了瞬时表达miR-338-3p的人胃癌SGC-7901细胞系,初步证实miR-338-3p过表达可抑制肿瘤细胞的增殖。

miR-338-3p在恶性肿瘤中的表达异常及其表观遗传组蛋白的修饰位点

目的探讨不同种类肿瘤中miR-338-3p表达谱及其表达异常的表观遗传修饰调控机制。方法生物信息学大数据库(TCGA Pan-Cancer)分析miR-338-3p在15种不同种类肿瘤组织中的表达谱;以胃癌为研究对象,分析数据库中45例正常胃组织和366例胃癌组织中miR-338-3p表达情况;CRCH37数据库预测miR-338-3p上游启动子区组蛋白修饰位点;利用染色质免疫共沉淀获取组蛋白结合的DNA,PCR扩增miR-338-3p启动子区片段,凝胶电泳验证PCR产物。结果 miR-338-3p在包括食道癌(ESCA)等不同种类肿瘤中表达异常,其中ESCA、头颈部鳞状细胞癌(HNSC)、肾嫌色细胞癌(KICH)、肾乳头状肾细胞癌(KIRP)、肺鳞癌(LUSC)和甲状腺癌(THCA)中表达显著下调(P<0.05),而在结肠腺癌(COAD)、肾透明细胞癌(KIRC)和肝细胞肝癌(LIHC)表达显著上调(P<0.05);366例胃癌组织中miR-338-3p表达普遍下调;染色质免疫共沉淀结合PCR证实组蛋白H3K9m2和H3K4m3是可能引起miR-338-3p下调的两个修饰位点。结论 miR-338-3p在胃癌中表达下调,组蛋白H3K9和H3K4甲基化修饰是潜在原因。