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基于CRISPR/Cas9技术建立敲除OSBPL2基因的HeLa细胞株
被引量:
2
1
作者
陈庆
鲁雅洁
+2 位作者
姚俊
魏钦俊
曹新
《南京医科大学学报(自然科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第9期1072-1078,共7页
目的 :利用CRISPR/Cas9技术构建OSBPL2基因敲除的稳定HeLa细胞株。方法 :设计3个单导向RNA(singleguide RNA,sg RNA),分别靶向OSBPL2基因的第2、3和5外显子,以PGK1.1为载体,构建出3个重组真核表达载体。分别转染HeLa细胞后,使用嘌呤霉...
目的 :利用CRISPR/Cas9技术构建OSBPL2基因敲除的稳定HeLa细胞株。方法 :设计3个单导向RNA(singleguide RNA,sg RNA),分别靶向OSBPL2基因的第2、3和5外显子,以PGK1.1为载体,构建出3个重组真核表达载体。分别转染HeLa细胞后,使用嘌呤霉素进行阳性细胞筛选,Cruiser TM敲除检测实验和测序共同检验载体靶向效率。选出靶向效率最高的质粒转染HeLa细胞,进行单克隆细胞培养,最后用Western blot鉴定敲除效果。结果:sg RNA正确插入到PGK1.1载体,靶向第2外显子的重组载体转染HeLa细胞并筛选单克隆后,细胞未检测出OSBPL2蛋白的表达。结论:敲除OSBPL2基因的稳定HeLa细胞株构建成功。
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关键词
CRISPR/Cas9
OSBPL2
he
la
细胞株
单克隆细胞
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职称材料
题名
基于CRISPR/Cas9技术建立敲除OSBPL2基因的HeLa细胞株
被引量:
2
1
作者
陈庆
鲁雅洁
姚俊
魏钦俊
曹新
机构
南京医科大学生物技术系
出处
《南京医科大学学报(自然科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第9期1072-1078,共7页
基金
国家自然科学基金(31171217
31571302)
文摘
目的 :利用CRISPR/Cas9技术构建OSBPL2基因敲除的稳定HeLa细胞株。方法 :设计3个单导向RNA(singleguide RNA,sg RNA),分别靶向OSBPL2基因的第2、3和5外显子,以PGK1.1为载体,构建出3个重组真核表达载体。分别转染HeLa细胞后,使用嘌呤霉素进行阳性细胞筛选,Cruiser TM敲除检测实验和测序共同检验载体靶向效率。选出靶向效率最高的质粒转染HeLa细胞,进行单克隆细胞培养,最后用Western blot鉴定敲除效果。结果:sg RNA正确插入到PGK1.1载体,靶向第2外显子的重组载体转染HeLa细胞并筛选单克隆后,细胞未检测出OSBPL2蛋白的表达。结论:敲除OSBPL2基因的稳定HeLa细胞株构建成功。
关键词
CRISPR/Cas9
OSBPL2
he
la
细胞株
单克隆细胞
Keywords
CRISPR/Cas9
OSBPL2
he la strain
monoclonal cell
分类号
R394.33 [医药卫生—医学遗传学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
基于CRISPR/Cas9技术建立敲除OSBPL2基因的HeLa细胞株
陈庆
鲁雅洁
姚俊
魏钦俊
曹新
《南京医科大学学报(自然科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2016
2
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