三氧化二砷与隐丹参酮不同配比对人肝癌HepG2裸鼠移植瘤的抑制作用

[目的]探讨三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)与隐丹参酮对人肝癌Hep G2裸鼠的最佳配伍剂量,以期提高As2O3治疗肝癌的临床疗效,并减轻其毒副作用。[方法]建立人肝癌细胞系Hep G2裸鼠肝癌模型,将As2O3(1.25mg·kg-1、2.5mg·kg-1、5.0mg·kg-1)与隐丹参酮(50mg·kg-1,100mg·kg-1,200mg·kg-1)低、中、高三个剂量分为9组联合治疗,计算各组瘤体体积、瘤重及计算肿瘤抑制率;进行血常规及血生化检测。[结果]与模型组比较,除L-L剂量组的平均瘤重外,As2O3与隐丹参酮联合用药组平均瘤重及瘤体积均显著小于模型组(P<0.05)。H-M剂量组瘤体积抑制率和瘤重抑制率分别为(56.38%,54.36%),抑瘤作用大于M-M剂量组(52.25%,45.43%)、L-M剂量组(48.90%,42.13%)、H-L剂量组(50.34%,40.82%)、H-H剂量组(46.10%,35.72%)、M-H剂量组(47.13%,33.68%)、L-H剂量组(32.08%,33.25%)、M-L剂量组(36.38%,31.94%)、L-L剂量组(33.39%,20.71%)。对血常规的影响:与模型组比较,M-H剂量组的白细胞数量显著升高(P<0.05);L-M剂量组、L-H剂量组、M-L剂量组、H-L剂量组、H-M剂量组、H-H剂量组的红细胞数量比模型组有显著下降(P<0.01),M-M剂量组(P<0.05);L-H剂量组、H-M剂量组、H-H剂量组血红蛋白数量有明显下降(P<0.05),M-L剂量组、H-L剂量组的血小板数量下降(P<0.05)。对血生化的影响:除L-L剂量组ALT升高外(P<0.05),As2O3联合隐丹参酮各剂量组ALT含量无统计学意义(P>0.05);L-L剂量组、L-M剂量组的AST含量有显著升高(P<0.05);L-L剂量组、L-H剂量组CREA含量升高(P<0.05);BUN与模型组比较无统计学意义(P>0.05)。[结论]As2O3与隐丹参酮配伍用药可显著的抑制肝癌裸鼠移植瘤的生长,高剂量的As2O3组对血液系统的影响较大,隐丹参酮的联合运用可以起到协同的作用,这为临床上As2O3治疗肝癌疗效的提高提供了一定的参考价值。

温肾消水膏皮肤给药舒缓H22肝癌腹水瘤模型小鼠癌性腹水的作用机制研究

目的观察温肾消水膏皮肤给药舒缓H22肝癌腹水瘤模型小鼠癌性腹水的作用机制。方法将9只C57BL/6小鼠随机分为模型组、温肾消水膏组、空白组,每组3只,其中模型组、温肾消水膏组采用腹腔接种H22肝癌细胞悬液的方法建立H22肝癌腹水瘤小鼠模型。空白组和模型组不予药物,温肾消水膏组从接瘤后24 h开始,每日予温肾消水膏外敷腹部,每天4 h,连续10天。于第11天以颈椎脱臼法处死小鼠,取腹水、肾脏组织;用注射器计量腹水量,采用显微镜计数法计算肿瘤细胞数,用蛋白质免疫印迹(Western Blot)法检测肾脏组织的水通道蛋白1(AQP1)、水通道蛋白2(AQP2)、血管内皮生长因子A(VEGF-A)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)蛋白表达,用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测肾脏组织中AQP1、AQP2、TNF-α、VEGF-A mRNA表达水平;对肾脏组织进行苏木素-伊红(HE)染色和马松(Masson)染色,观察肾脏的病理形态学改变。结果与模型组比较,温肾消水膏组腹水量减少,但比较差异无统计学意义(P>0.05)。与模型组比较,温肾消水膏组腹水瘤细胞计数减少,但比较差异无统计学意义(P>0.05)。与空白组比较,模型组、温肾消水膏组小鼠肾脏组织VEGF-A蛋白表达均降低(P<0.05),AQP1、AQP2、TNF-α蛋白表达比较差异无统计学意义(P>0.05)。与模型组比较,温肾消水膏组小鼠肾脏组织AQP1蛋白表达升高(P<0.05),AQP2、TNF-α、VEGF-A蛋白表达比较差异无统计学意义(P>0.05)。与空白组比较,模型组、温肾消水膏组肾脏VEGF-A mRNA表达均降低(P<0.05),AQP1、AQP2、TNF-αmRNA表达比较差异无统计学意义(P>0.05)。与模型组比较,温肾消水膏组小鼠肾脏组织AQP1、AQP2、TNF-α、VEGF-A mRNA表达比较差异无统计学意义(P>0.05)。HE染色结果显示,与空白组比较,温肾消水膏组、模型组小鼠肾小球系膜区增宽,系膜细胞增生,肾小管变性,部分区域肾小球萎缩,肾间质有炎性细胞浸润;与模型组比较,温肾消水膏组小鼠肾间质炎性细胞浸润情况较少,系膜细胞增生减少。Masson染色结果显示,与空白组比较,模型组、温肾消水膏组有大量胶原纤维沉积于肾小球系膜区;与模型组比较,温肾消水膏组胶原纤维较少。结论温肾消水膏有一定的舒缓肝癌癌性腹水作用,其机制可能涉及以下方面:一是温肾消水膏减轻了肾间质炎症,减少肾小球系膜细胞增生,改善了肾脏病理;二是可能与温肾消水膏上调肾脏AQP1、AQP2蛋白表达,调节肾脏VEGF蛋白表达使之接近正常的作用有关。

兔VX_2肝癌模型的建立及超声评价

目的 探讨不同方法制作兔VX2 移植性肝癌模型的特点 ,评价超声检查在监测VX2 肝癌中的价值。方法 将VX2 细胞滤液、VX2 瘤株小块及VX2 瘤株小块 +明胶海绵分别注射或接种于 2 8只新西兰大白兔的肝脏内 ,一周后不同时间行超声检查。结果 A组滤液注射法 :平均成瘤时间约 2 1天 ,肝的原位成瘤率为 75 %。B组包块埋植法 :平均成瘤时间14天 ,肝的原位成瘤率为 83 %。C组包块埋植 +明胶海绵法 :平均成瘤时间 14天 ,肝的原位成瘤率 88%。三组成瘤率统计学无显著差异 ( χ2 =1.118,P >0 .0 5 )。肝脏内的移植瘤在超声上均表现为低回声伴声晕的肿块 ,彩色多普勒血流成像表现为周边血供丰富 ,中央血供稀少。结论 三种方法均能制成肝癌模型 ,超声检查是一种监测肝癌模型的有效手段。

兔肝脏、肌肉、皮下VX2肿瘤模型的建立和对比研究

目的通过对肝脏、肌肉及皮下不同部位兔VX2肿瘤模型的建立和比较,寻求更适合于肿瘤经皮介入治疗的荷瘤动物模型。方法将54只新西兰白兔按VX2肿瘤接种部位不同随机分为肝脏组、肌肉组和皮下组,每组18只。三组动物术后12、16、20 d均进行CT灌注扫描,测量肿瘤大小,每次各组分别处死6只兔进行病理观察,并对三组模型的建模手术时间、肿瘤体积及并发症等情况进行比较。结果皮下组肿瘤生长最慢,肌肉组其次,肝脏组生长最快,组间差异有统计学意义(P<0.05)。接种第12天,肝脏组肿块长径已约1 cm,而皮下组则需20 d肿块长径才达1 cm左右,肌肉组肿块生长速度介于二者之间。三组建模所用时间分别为肝脏组(5.54±0.51)min,肌肉组(1.02±0.20)min,皮下组(0.98±0.21)min,肝脏组明显较长。除了肝脏组出现腹水、肝内转移及腹壁种植外,皮下组、肌肉组均无明显影响模型的情况。结论与肝脏和皮下建模相比,兔肌肉内VX2肿瘤模型具有操作简单,成瘤稳定,肿瘤生长速度适中的优点,更适合作为兔VX2瘤的经皮介入治疗模型。

建立兔移植性Vx-2肝癌模型的改进

目的 建立Vx 2兔移植性肝癌改良模型。方法 将Vx 2瘤粒经剖腹直接种植于肝实质内 ,依观察时间不同分成 3组 ,每组 10只 ,种植后分别观察 2、3、4周 ,对比观察其病理形态学和影像学表现。结果 15只种植成功 ,种植 2周组各项观察指标最为满意。结论 以瘤粒肝内种植方式、2周后可成功建立Vx 2兔移植性肝癌模型。

MMP-2/PCNA在模拟介入治疗后的兔VX_2肝癌中的表达及意义

目的 研究MMP 2 PCNA在兔VX2 肝癌中表达的意义以及模拟介入治疗对其表达的影响。方法 建立兔VX2 肝癌的动物模型,将实验动物分为介入组和对照组,比较两组的肝功能变化、肿瘤生长率,用原位杂交和免疫组化法研究各组的MMP 2 PCNA表达情况。结果 介入组在1、2、3、4周的门冬氨酸转氨酶(AST :IU L)分别为(13±2 )、(96±2 5 )、(68±13 )、(4 8±10 ) ,而同时间段对照组分别为(16±3 )、(10 3±2 3 )、(13 1±3 4)、(14 6±3 6) ;介入组在1、2、3、4周的丙氨酸转氨酶(ALT :IU L)分别为(3 6±5 )、(13 0±3 1)、(78±18)、(64±13 ) ,而同时间段对照组分别为(3 3±5 )、(14 5±2 6)、(160±3 2 )、(186±42 )。对照组的AST和ALT分别高于同一时间段介入组。各组肿瘤随着时间延长体积均增大,介入组和对照组在术后1、2、3周的肿瘤生长率分别为(10 2±88) %、(2 3 8±96) %、(2 85±94) %、(164±88) %、(5 68±12 0 ) %、(886±45 5 ) %。其中介入组在术后2、3周的肿瘤生长率明显低于同期对照组,差异有显著性(P <0 0 5 )。介入组MMP 2mRNA及蛋白表达的阳性率分别为66 7%、5 4 2 % ,较对照组(4 1 7% ,3 3 3 % )明显减少(P <0 0 5 ) ,转移组MMP 2mRNA及蛋白表达的阳性率分别为68 9%、5 1 7% ,较无转移组(

兔肝Vx-2移植癌改良模型的建立

【目的】建立稳定的兔Vx-2移植性肝癌模型,探讨不同植瘤方式的成功率。【方法】60只新西兰白兔随机分3组,每组20只。第1组,将Vx-2瘤细胞(5×107个)经肝动脉灌注入兔的肝脏;第2组,将Vx-2瘤细胞(5×107个)经肝包膜接种于2组兔的肝左叶;第3组,将瘤组织块(约含106-108个瘤细胞)经肝包膜植入肝左叶。观察:1.不同方式植瘤的成活率;2.B超测定肝内肿瘤7、10、14、17、21 d时的大小,并计算肿瘤生长率;3.大体及镜下(光镜和电镜)瘤组织形态特征。【结果】3组植瘤成活率分别为7/20、10/20、19/20,改良组植瘤成活率最高(P<0.05),瘤体呈指数性生长。病理学表明该瘤在肝组织中呈浸润式生长,其性状与移植于兔其它部位的Vx-2鳞状细胞癌特征相似。【结论】成功建立了兔Vx-2移植性肝癌模型,瘤组织块种植方式成功率明显高于动脉途径和细胞液注射方式,为肝癌介入治疗的基础及临床研究提供了成熟的大型实验动物模型。

靶向血管内皮生长因子受体2微泡造影剂评价肿瘤血管生成的实验研究

目的:探讨靶向血管内皮生长因子受体2(vascular endothelial growth factor receptor 2,VEGFR2)微泡造影剂用于肿瘤血管生成的超声分子成像。方法:用生物素-亲和素桥接法制备靶向VEGFR2超声微泡,免疫荧光法检测微泡与抗体的结合。建立裸鼠Hep G2肝癌皮下种植瘤模型,随机分成靶向组(n=5)和非靶向组(n=5),经尾静脉团注相同剂量靶向微泡或非靶向微泡,录像并绘制时间-强度曲线(time-intensity curve,TIC);注入造影剂5 min后利用高声压爆破技术清除肿瘤内部微泡,比较爆破前后两组造影图像灰阶强度的下降,估计靶向微泡在体内与靶点的结合能力。结果:靶向造影剂和非靶向造影剂均表现为裸鼠皮下瘤的显著增强,但TIC显示两组间曲线下面积差异有统计学意义[(3 940.4±200.9)dB·s vs.(2 796.8±452.3)dB·s,P=0.001];微泡爆破后靶向组灰阶强度降低显著大于非靶向组[(7.61±2.20)dB vs.(3.74±1.40)dB,P=0.010]。结论:靶向VEGFR2微泡造影剂在体内能显著增强肿瘤血管成像,可作为监测肿瘤血管生成的较可靠分子影像学探针。

抗VEGFR-2嵌合Fab抗体对裸鼠肝癌原位移植瘤新生血管生成的影响

目的:检测抗VEGFR-2嵌合Fab抗体对裸鼠肝癌原位移植瘤血管生成的影响。方法:建立裸鼠肝癌H22细胞原位移植瘤模型,随机分成生理盐水组(n=12)和抗体组(n=12)。采用免疫组织化学SP染色法对两组肝脏移植瘤进行血管染色,观察其微血管密度(MVD)情况。结果:成功建立裸鼠H22肝癌原位移植瘤模型,HE染色显示肝脏移植瘤为肝细胞肝癌,免疫组化结果显示肝脏实体瘤内微血管密度抗体组较生理盐水组显著性减少(25.64±1.53 vs 8.65±1.79,P<0.05)。结论:抗VEGFR-2嵌合Fab抗体能够抑制裸鼠肝癌原位移植瘤的血管生成。

介入治疗对兔VX_2肝癌MMP-2基因表达的影响

目的研究MMP-2在兔VX2肝癌中表达的意义以及介入治疗对其表达的影响。方法建立兔VX2肝癌的动物模型,将实验动物分为介入组和对照组,比较2组的肝功能变化、肿瘤体积增长率,用原位杂交和免疫组化方法研究各组的MMP-2基因及蛋白表达情况。结果对照组的AST和ALT分别高于同一时间段介入组。各组肿瘤随着时间延长体积均增大,但介入治疗后尤其是术后2、3周体积增长减缓,与对照组相比,有显著性差异。原位杂交及免疫组化显示MMP-2mRNA及蛋白表达主要定位于癌细胞胞浆。介入组MMP-2mRNA及蛋白表达的阳性率较对照组明显减少(P<0·05)。转移组MMP-2mRNA及蛋白表达的阳性率较无转移组明显增加(P<0·05)。结论介入治疗能改善肝功能,延缓肿瘤生长,减少转移。MMP-2的高表达预示着高转移潜能。