扁蒴藤素调节Shh/Gli1信号通路对宫颈癌HeLa细胞增殖、凋亡和血管生成拟态的影响

目的:探讨扁蒴藤素(Pris)调节Shh/Gli1信号通路对宫颈癌HeLa细胞增殖、凋亡和血管生成拟态(VM)的影响及其机制。方法:采用MTT法检测不同浓度Pris对宫颈癌HeLa细胞增殖的抑制作用,以选取合适的干预浓度。将HeLa细胞分为对照组、环巴胺组、Pris组、Pris+pc-NC组和Pris+pc-Shh组。采用MTT法、EdU法检测各组细胞的增殖能力,Transwell小室法、流式细胞术检测各组细胞的迁移及侵袭能力和细胞凋亡率,体外血管生成实验观察VM形成情况,qPCR法检测各组细胞中Shh和Gli1 mRNA表达水平,WB法检测细胞中血管内皮生长因子A(VEGF-A)、血管内皮钙黏素(VE-cadherin)、Ki-67、caspase-3及与Shh/Gli1信号通路相关蛋白表达水平。结果:0.25~2.5μmol/L的Pris对HeLa细胞增殖均有显著抑制作用,选择1.5μmol/L的Pris进行后续实验。对照组细胞形成良好的管腔结构,与对照组相比,环巴胺组、Pris组和Pris+pc-NC组HeLa细胞管腔结构被明显破坏,细胞增殖活力和增殖率、迁移及侵袭细胞数目、Shh和Gli1 mRNA、VEGF-A、VE-cadherin、Ki-67、Shh、Gli1蛋白表达均显著降低(均P<0.05),细胞凋亡率和caspase-3表达均显著升高(均P<0.05);环巴胺组与Pris组HeLa细胞各项检测指标比较差异均无统计学意义(均P>0.05);与Pris+pc-NC组相比,Pris+pc-Shh组细胞管腔结构形成明显改善,细胞增殖活力和增殖率、迁移及侵袭细胞数、Shh和Gli1 mRNA、VEGF-A、VE-cadherin、Ki-67、Shh、Gli1蛋白表达均显著升高(均P<0.05),细胞凋亡率和caspase-3表达均显著降低(均P<0.05)。结论:Pris抑制宫颈癌HeLa细胞的增殖、迁移与侵袭和VM的形成并促进细胞凋亡,可能与阻断Shh/Gli1信号通路有关。

中药砒霜上调E-钙黏蛋白抑制宫颈癌Hela细胞生长、侵袭、迁移机制研究

目的:研究中药砒霜的主要成分三氧化二砷(As_(2)O_(3))抑制宫颈癌Hela细胞生长、侵袭、迁移的机制,观察As_(2)O_(3)对宫颈癌Hela细胞组蛋白脱乙酰基酶1(HDAC1)、E-钙黏蛋白表达的影响,以及联合HDAC1抑制剂伏立诺他(SAHA)的协同作用。方法:以宫颈癌Hela细胞作为载体,随机分为空白对照组、As_(2)O_(3)组、SAHA组、As_(2)O_(3)+SAHA组4组,采用CCK-8法测定不同药物浓度对Hela细胞活性的抑制情况,并筛选后续实验药物浓度;采用Transwell法、划痕法检测各组药物对Hela细胞侵袭、迁移能力的影响;采用实时荧光定量聚合酶链式反应及蛋白免疫印迹法检测HDAC1和E-钙黏蛋白的mRNA表达情况与蛋白表达情况。结果:随着各组药物浓度增加,Hela细胞的活性逐渐降低。As_(2)O_(3)组、SAHA组、As_(2)O_(3)+SAHA组的Hela细胞活性均低于空白对照组(P<0.05)。As_(2)O_(3)组、SAHA组、As_(2)O_(3)+SAHA组穿越Transwell小室膜的细胞数量均少于空白对照组(P<0.05);As_(2)O_(3)+SAHA组的细胞数量少于As_(2)O_(3)组、SAHA组(P<0.05);As_(2)O_(3)组的细胞数量少于SAHA组(P<0.05)。As_(2)O_(3)组、SAHA组、As_(2)O_(3)+SAHA组的Hela细胞迁移百分比均低于空白对照组(P<0.05);As_(2)O_(3)+SAHA组的Hela细胞迁移百分比低于As_(2)O_(3)组、SAHA组(P<0.05);As_(2)O_(3)组的Hela细胞迁移百分比低于SAHA组(P<0.05)。As_(2)O_(3)组、SAHA组、As_(2)O_(3)+SAHA组的HDAC1 mRNA表达水平均低于空白对照组(P<0.05);As_(2)O_(3)组的HDAC1 mRNA表达水平高于SAHA组(P<0.05);As_(2)O_(3)+SAHA组的HDAC1 mRNA表达水平低于As_(2)O_(3)组、SAHA组(P<0.05)。As_(2)O_(3)组、SAHA组、As_(2)O_(3)+SAHA组的E-钙黏蛋白mRNA表达水平均高于空白对照组(P<0.05);As_(2)O_(3)+SAHA组的E-钙黏蛋白mRNA表达水平高于As_(2)O_(3)组、SAHA组(P<0.05)。As_(2)O_(3)组、SAHA组、As_(2)O_(3)+SAHA组的HDAC1蛋白表达水平均低于空白对照组(P<0.05);As_(2)O_(3)+SAHA组的HDAC1蛋白表达水平低于As_(2)O_(3)组、SAHA组(P<0.05)。As_(2)O_(3)组、SAHA组、As_(2)O_(3)+SAHA组E-钙黏蛋白的蛋白表达水平均高于空白对照组(P<0.05);As_(2)O_(3)+SAHA组E-钙黏蛋白的蛋白表达水平高于As_(2)O_(3)组、SAHA组(P<0.05)。结论:As_(2)O_(3)抑制Hela细胞的最佳浓度为8μmol/L,联合SAHA时,最佳抑制浓度为4μmol/L。As_(2)O_(3)可能通过抑制HDAC1的表达,同时促进升高E-钙黏蛋白的表达,与SAHA发挥协同作用抑制Hela细胞生长、侵袭、迁移。

鸦胆子苦醇通过TLR9-MyD88信号通路调控Hela细胞凋亡的机制研究

目的探究鸦胆子苦醇(Brusatol,BRU)通过TLR9-MyD88信号通路调控Hela细胞凋亡的分子机制。方法针对本实验室保存的Hela细胞,使用不同浓度(0、5.0、10.0、20.0、40.0、80.0 nmol·L^(-1))的鸦胆子苦醇处理细胞。并将Hela细胞分为Control组(正常培养的Hela细胞)、BRU-L组(使用10.0 nmol·L^(-1)的鸦胆子苦醇处理细胞)BRU-H组(使用20.0 nmol·L^(-1)的鸦胆子苦醇处理细胞)、BRU+pcDNA-NC组(转染pcDNANC+20.0 nmol·L^(-1)的鸦胆子苦醇)、BRU-H+pcDNA-TLR9组(转染pcDNA-TLR9+20.0 nmol·L^(-1)的鸦胆子苦醇)。使用细胞计数试剂盒(CCK-8)法和EdU法检测各组细胞增殖情况;TUNNEL染色法,经流式细胞仪检测细胞凋亡;蛋白免疫印迹(Western blot)检测各组细胞TLR9、MyD88、Bax、Bcl-2、Cleaved Caspase-3和Cleaved Caspase-9蛋白表达水平;流式细胞术检测细胞凋亡和线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)情况、ELISA检测各组细胞三磷酸腺苷(ATP)和活性氧基团(ROS)含量。结果与0 nmol·L^(-1)组比较,10 nmol·L^(-1)组细胞活存活率、IC50值开始显著降低(P<0.05)。不同浓度的BRU刺激细胞后,细胞增殖能力显著降低,且呈剂量依赖(P<0.05)。。与Control组比较,BRU-L、BRU-H组、BRU-H+pcDNA-NC组细胞5-乙炔基-2′-脱氧尿嘧啶核苷(EDU)阳性细胞率、缺口末端标记法(TUNEL)阳性细胞率、细胞凋亡率、细胞Bcl-2蛋白均显著降低,TLR9和MyD88蛋白、Bax、Bax/Bcl-2、Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9蛋白水平均明显增加(P<0.05);Control组、BRU-L、BRU-H组/BRU-H+pcDNA-NC呈持续递减/递减趋势(P<0.05);与BRU-H+pcDNA-NC组比较,BRU-H+pcDNA-TLR9组EDU阳性细胞率、TUNEL阳性细胞率、细胞凋亡率、细胞Bcl-2蛋白均显著升高,TLR9和MyD88蛋白、Bax、Bax/Bcl-2、Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9蛋白水平均明显降低(P<0.05)。与Control组比较,BRU-L、BRU-H组、BRU-H+pcDNA-NC组细胞JC-1水平和ATP含量显著降低,而ROC含量、mitotracker染色阳性细胞水平显著增加(P<0.05);与BRU-L组比较,BRU-H组、BRU-H+pcDNANC组JC-1水平和ATP含量进一步降低,而ROC含量、mitotracker染色阳性细胞水平进一步增加(P<0.05);与BRU-H+pcDNA-NC组比较,BRU-H+pcDNA-TLR9组细胞JC-1水平和ATP含量增加,而ROC含量、mitotracker染色阳性细胞水平降低(P<0.05)。结论鸦胆子苦醇可通过调控TLR9-MyD88信号通路制Hela细胞增殖。

斑蝥酸钠在诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡相关基因表达中的作用机制研究

目的:探讨斑蝥酸钠在诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡相关基因表达中的作用机制。方法:2023年1月—2023年12月购买1株人宫颈癌Hela细胞,培养至对数生长期后开始实验,将其分为4组,分别加斑蝥酸钠0μmol/L(空白对照组)、4μmol/L(4μmol/L组)、8μmol/L(8μmol/L组)和16μmol/L(16μmol/L组),每个浓度分别设置5个复孔(每组样本量为5),以细胞活力试验(CCK-8)检测细胞增殖情况,以流式细胞仪检测细胞凋亡情况,以实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(Real-time PCR)检测B淋巴细胞瘤2(BCL-2)、人细胞凋亡调节因子(Bax)、人半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)的表达情况。结果:4μmol/L组、8μmol/L组和16μmol/L组的细胞增殖抑制率、凋亡率和Caspase-3相对表达量水平均高于空白对照组,BCL-2/Bax相对表达量水平低于空白对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。随着斑蝥酸钠浓度的升高,人宫颈癌Hela细胞增殖抑制率、凋亡率和Caspase-3随之也升高,BCL-2/Bax相对表达量逐渐下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。经斑蝥酸钠处理后可见细胞皱缩、变圆,细胞边缘出芽形成多花环结构的凋亡小体。结论:斑蝥酸钠具有抑制人宫颈癌Hela细胞增殖、促进其凋亡的作用,具有剂量依赖性,其对细胞凋亡的调控作用可能与调控BCL-2,Bax和Caspase-3表达有关。

PPP2R1A对Hela细胞系中调节癌症相关基因表达的影响

目的分析PPP2R1A对Hela细胞系中调节癌症相关基因表达的影响。方法以未干预的Hela细胞系作为对照组,以克隆并过表达PPP2R1A的Hela细胞系作为过表达组。通过RNA测序分析对照组和过表达组细胞中PPP2R1A的表达和选择性剪接(AS)。通过实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)实验验证PPP2R1A参与调控的肿瘤转移相关基因和选择性剪接基因(ASGs)。结果与对照组比较,过表达PPP2R1A可显著抑制Hela细胞的增殖。PPP2R1A调控细胞黏附、病毒应答、细胞生长调节等数百个基因的表达水平,同时还调节参与细胞周期、连接黏附、子宫内膜癌和RNA转运基因的AS。结论PPP2R1A可能通过AS调控潜在转录来调控肿瘤的进展。

微小染色体维持蛋白2基因诱导性敲除宫颈癌HeLa细胞系的建立及对DNA复制的影响

目的利用诱导性CRISPR/Cas9技术建立微小染色体维持蛋白2(MCM2)基因敲除的宫颈癌HeLa细胞系,并探究MCM2对DNA复制及复制压力的影响。方法使用诱导性CRISPR/Cas9系统TLCV2,构建MCM2敲除HeLa细胞系;并分为对照组(Control)、敲除1组(KO1)和敲除2组(KO2)。通过Western blot、EdU掺入实验、实时定量PCR、免疫荧光、CCK-8等实验,分析MCM2敲除对DNA复制和羟基脲诱导复制压力的影响。结果经过诱导后CRISPR/Cas9系统有效地敲除MCM2基因,并影响MCM2-7复合物的稳定。与对照细胞相比,MCM2敲除细胞DNA复制能力显著下降,同时Cyclin A1、Cyclin E1和CDK4的mRNA表达水平降低。在DNA复制压力下,MCM2敲除降低了细胞的存活能力、DNA损伤修复能力,并增加基因组的不稳定性。结论MCM2基因敲除降低正常条件下HeLa细胞的DNA复制能力,并降低复制压力后细胞的存活能力。本研究成功地构建了诱导性MCM2基因敲除HeLa细胞系,为进一步研究MCM2基因在宫颈癌中的作用及其生物学功能奠定了基础。

藻岩黄质对人宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨藻岩黄质对宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响,分析其抑制肿瘤生长的机制。方法:体外培养HeLa细胞,设为给药组和空白对照组,空白对照组采用常规细胞培养,给药组加入一定浓度的藻岩黄质培养。采用MTT法检测不同浓度(0.1、0.5、1μmol/L)藻岩黄质处理HeLa细胞24 h及0.5μmol/L藻岩黄质处理HeLa细胞12、24、48 h后,HeLa细胞存活率的变化;采用Annexin V/PI流式细胞仪分别检测0.1μmol/L、0.5μmol/L藻岩黄质刺激HeLa细胞24 h及48 h后的凋亡情况;测定0.1、0.5、1μmol/L的藻岩黄质刺激HeLa细胞后培养基中ATP的生成和总氧摄取量。结果:与空白对照组相比,随着药物浓度增加,HeLa细胞生长逐渐缓慢(P<0.05);随着药物浓度和刺激时间增加,HeLa细胞凋亡率显著增加(P<0.05);随着药物刺激浓度增加,HeLa细胞ATP的产生率也显著下降(P<0.05)。结论:藻岩黄质能够抑制宫颈癌HeLa细胞活力并诱导其凋亡。

苦参碱对宫颈癌HeLa细胞的作用

目的:观察不同浓度的苦参碱对宫颈癌HeLa细胞的作用。方法:浓度分别为0.5,1.0,1.5,2.0 g/L的苦参碱体外培养HeLa细胞24,48,72 h后,分别用MTT法观察苦参碱对HeLa细胞的生长抑制作用、AnnexinV-PI双标染色用流式细胞仪检测苦参碱对HeLa细胞凋亡的影响。结果:不同浓度(0.5,1.0,1.5,2.0 g/L)的苦参碱具有抑制宫颈癌HeLa细胞增殖的作用,呈明显的时间、剂量依赖性。各浓度和时间之间比较具有显著差异性(P<0.01)。FCM检测结果显示苦参碱作用后,细胞的凋亡率增加,呈现随时间和剂量依赖性。各浓度和时间之间比较也具有显著差异性(P<0.01)。结论:苦参碱对人宫颈癌HeLa细胞的增殖具有明显的抑制作用,能诱导细胞凋亡的凋亡。

紫草素对人宫颈癌Hela细胞增殖的影响及其作用机制研究

目的研究紫草素对人宫颈癌Hela细胞增殖的影响及其作用机制。方法用MTT法检测紫草素对人宫颈癌Hela细胞的增殖抑制作用;通过测定内源性活性氧、线粒体膜电位,探讨紫草素对Hela细胞氧化损伤的作用机制。结果紫草素抑制Hela细胞增殖且呈剂量依赖性。紫草素可剂量依赖性地升高Hela细胞内源性活性氧水平,降低线粒体膜电位,抗氧化剂NAC能显著性的降低紫草素的抗肿瘤活性。结论线粒体膜电位的改变和内源性活性氧的生成是紫草素抑制人宫颈癌Hela细胞增殖的作用机制之一。

黄芪甲苷下调PD-1及PD-L1的表达对宫颈癌Hela细胞侵袭和迁移的抑制作用

目的探究黄芪甲苷(Agal)对宫颈癌Hela细胞侵袭和迁移的作用和机制。方法将细胞随机分为Hela组、Agal(5 mmol/L)组、Agal(10 mmol/L)组和Agal(20 mmol/L)组并分别用0、5、10和20 mmol/L的Agal处理细胞,CCK8检测细胞增殖,Transwell实验和划痕实分别验检测细胞侵袭和迁移能力,ELISA检测培养液中炎性因子白介素4(IL-4)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和干扰素-γ(IFN-γ)的质量浓度。建立宫颈癌裸鼠移植模型,RT-PCR检测血清程序性死亡分子1(PD-1)、程序性死亡受体-配体1(PD-L1)、P38和p-P38的表达。结果与Hela组比较,Agal作用细胞4 d后,Agal(5、10、20 mmol/L)组细胞增殖倍数明显降低,侵袭细胞数明显减少,划痕闭合率明显降低;同时,Agal(5、10、20 mmol/L)组血清PD-1和PD-L1的蛋白表达水平明显降低,p-P38/P38的比值也明显降低;此外,Agal(5、10、20 mmol/L)还能显著降低培养液中IL-4、TNF-α和IFN-γ的质量浓度。结论 Agal能抑制宫颈癌Hela细胞侵袭和迁移与下调PD-1及PD-L1的表达有一定的相关性。

掌叶半夏有效提取物单独或与顺铂联合对体外培养宫颈癌HeLa细胞的作用

目的观察中药掌叶半夏有效提取物(PE)对体外培养宫颈癌HeLa细胞的作用,以及PE对HeLa细胞对顺铂(DDP)敏感性的影响,以期寻找药物治疗宫颈癌更完善的途径。方法体外培养宫颈癌HeLa细胞,分别用PE、DDP及DDP+PE处理细胞;用倒置相差显微镜观察细胞生长及摄影,MTT法检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡。结果PE及DDP对宫颈癌HeLa细胞的生长均表现出明显的抑制作用,低剂量PE可加强DDP对HeLa细胞的抑制作用;流式细胞术检测结果显示PE作用后HeLa细胞呈现出凋亡,且随着作用时间的延长,凋亡细胞的比例明显增加。结论PE对宫颈癌HeLa细胞有明显的抑制生长和促凋亡作用,同时能提高HeLa细胞对顺铂的敏感性。

三棱黄酮抗HeLa宫颈癌:降低分裂期细胞比率诱导细胞凋亡

目的:研究三棱的总黄酮(Rhizoma sparganii flavonoids,RSF)对HeLa宫颈癌细胞的毒理作用及其作用机制。方法:分别检测用含有质量浓度11.7～750μg/mL RSF的DMEM培养基培养时,组间HeLa细胞的增殖活性差异,通过免疫荧光技术、流式细胞术和核型分析方法分析RSF诱导HeLa细胞毒理的机制。结果:RSF含量高于188μg/mL的DMEM培养基可呈剂量性抑制HeLa细胞的增殖活性(P<0.01)、增加细胞凋亡小体的比率(P<0.01);与1%甲醇对照组相比,RSF-375(RSF含量为375μg/mL)与RSF-750(RSF含量为750μg/mL)药物组HeLa细胞的分裂(M)期细胞比率显著下降(P<0.01),细胞间的接触生长状态消失,体积增大;在本次实验中,RSF-375与RSF-750药物组HeLa细胞微管(a-tublin)细胞骨架形态的特异性免疫结果与对照组相比,细胞形态呈显著不规则状改变,微丝突触增多,表现为较高的迁移运动趋势。结论:RSF是三棱抗HeLa宫颈癌的有效成分,在本实验中,RSF可以通过干扰细胞有丝分裂相关的机制显著抑制HeLa细胞的增殖活性(P<0.01)并诱导细胞凋亡(P<0.01)。

miR-143对宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响以及对Bcl-2表达的调节

目的研究miR-143对宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响,探讨miR-143对宫颈癌HeLa细胞系Bcl-2蛋白及mRNA表达的调节作用。方法将miR-143,anti-miR-143以及microRNA空对照高表达质粒用脂质体转染进宫颈癌He-La细胞中,MTT法检测宫颈癌HeLa细胞增殖的变化,His-tone/DNA ELISA检测细胞凋亡;Western blot和RT-PCR检测Bcl-2蛋白和mRNA的表达情况;双荧光素酶报告基因法检测miR-143的靶位点。结果 MiR-143抑制HeLa细胞的增殖,促进细胞凋亡,而anti-miR-143促进HeLa细胞增殖,抑制细胞凋亡;高表达的miR-143抑制Bcl-2蛋白的表达,anti-miR-143增加Bcl-2蛋白的表达量,而Bcl-2 mRNA的变化很小;miR-143抑制Bcl-2 3'端的荧光素酶的活性,突变miR-143与Bcl-2的预测结合位点后,荧光素酶的活性恢复。结论 MiR-143至少部分通过打靶Bcl-2抑制宫颈癌HeLa细胞增殖,并且促进HeLa细胞凋亡。

丙泊酚抑制wnt/β-catenin通路对宫颈癌HELA细胞生长和运动能力的调节作用

目的:探究丙泊酚抑制wnt/β-catenin通路对宫颈癌HELA细胞生长和运动能力的作用机制。方法:体外培养人宫颈癌HELA细胞,分别使用0、2.5、5、10μg/ml的丙泊酚预处理后使用CCK8检测细胞增殖情况;使用流式细胞术检测细胞凋亡情况;使用Transwell检测细胞运动能力;使用Western blot检测Ki67、PCNA、Caspase-3、Caspase-9、MMP-9、VEGF表达情况;选取成年雌性Wistar大鼠60只,采用皮下注射宫颈癌HELA细胞悬液,制成宫颈癌移植瘤大鼠动物模型,腹腔注射低剂量(10 mg/kg)、中剂量(20 mg/kg)和高剂量(50 mg/kg)的丙泊酚,30 d后检测肿瘤重量并使用免疫组化检测宫颈癌组织Ki67和VEGF表达情况。结果:相比空白组,丙泊酚预处理组宫颈癌HELA细胞增殖能力、细胞凋亡率、Caspase-3蛋白表达水平、Caspase-9蛋白表达水平显著提高,且高剂量组显著高于中剂量组,中剂量组显著高于低剂量组,差异有统计学意义(P<0.05);细胞迁移能力、Ki67、PCNA、MMP-9、VEGF、wnt1、β-catenin、c-Myc蛋白表达水平、大鼠体内宫颈癌肿瘤质量、Ki67和VEGF表达阳性率显著降低,且高剂量组显著低于中剂量组,中剂量组显著低于低剂量组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:丙泊酚可以通过抑制wnt/β-catenin通路实现抑制宫颈癌HELA细胞生长和运动能力,且在一定范围内呈浓度依赖性。

土荆皮酸诱导宫颈癌细胞系HeLa凋亡的实验研究

目的研究土荆皮酸(PAB)对体外培养的HeLa细胞的生物学效应和作用机制。方法用MTT法、流式细胞术、透射电镜检测体外培养的HeLa细胞在PAB作用下的增殖抑制及凋亡程度,用RT-PCR法检测p53/bcl-2/bax的表达水平。结果(1)PAB对HeLa细胞的增殖抑制作用随浓度升高而明显增强,其IC_(50)约10μmol/L。(2)流式细胞术证实10μmol/L PAB呈时间依赖性改变细胞周期分布,一方面降低G_0/G_1期的细胞比例,另一方面增高G_2/M期细胞的比例。(3)RT-PCR法显示HeLa细胞在10μmol/L PAB作用12、24、48 h均显示bax上调和bcl-2的下调,p53则未检测到表达。结论在体外PAB能抑制HeLa细胞增殖,诱导其凋亡,其诱导凋亡机制可能与bax的上调和bcl-2的下调相关。

细胞周期素E的干扰RNA对HeLa细胞增殖的抑制作用

目的利用RNAi技术下调宫颈癌HeLa细胞中cyclin E mRNA水平，研究对HeLa细胞增殖及周期的影响。方法构建针对cyclin E基因的RNAi真核表达载体，脂质体转染HeLa细胞下调细胞中cyclin E mRNA含量。RT-PCR检测抑制效果；MTr检测细胞生长情况；流式细胞仪分析HeLa细胞周期变化。结果成功构建针对cyclin E基因的RNAi真核表达载体，可以特异下调cyclin E mRNA含量，并抑制细胞恶性增殖。细胞周期分析显示干扰使细胞停留在G0-G。期，S期细胞明显减少。结论RNAi能特异地下调HeLa细胞中cyclin E mRNA含量，抑制宫颈癌细胞恶性增殖，提示cyclin E可能成为宫颈癌基因治疗中的一个新的靶点。

大戟苷诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡及其作用机制研究

目的:研究大戟苷对人宫颈癌Hela细胞凋亡的诱导作用及其机制。方法:取Hela细胞分为空白对照组、顺铂组(阳性对照,10 mg/L)和大戟苷低、中、高剂量组(50、100、200 mg/L),分别加入相应药物进行培养。药物作用24、48、72 h后,采用MTT法检测细胞增殖抑制率。药物作用48 h后,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,采用Hoechst 33258染色法检测细胞核的形态变化;采用Western blot法检测细胞色素C(Cyt-C)、Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9和Caspase-10蛋白表达水平。结果:与空白对照组比较,顺铂组和大戟苷各剂量组细胞增殖抑制率和细胞凋亡率均显著升高(P<0.05或P<0.01),细胞核浓染,或有变形、缩小、碎裂,或出现凋亡小体。与空白对照组比较,大戟苷低、中、高剂量组细胞中Cyt-C、Caspase-8和Caspase-9蛋白表达水平均显著升高,Bcl-2蛋白表达水平和Bcl-2/Bax比值均显著降低(P<0.05或P<0.01);大戟苷中、高剂量组细胞中Bax、Caspase-3和Caspase-10蛋白表达水平均显著升高(P<0.05或P<0.01)。结论:大戟苷能显著抑制Hela细胞增殖、促进细胞凋亡,其作用可能是通过激活Caspase依赖的线粒体凋亡途径来实现的。

阿司匹林对宫颈癌Hela细胞的增殖抑制作用

目的探讨阿司匹林对宫颈癌Hela细胞增殖的影响。方法体外培养Hela细胞,分别以不同浓度阿司匹林干预。应用Giemsa染色观察细胞形态学的改变;琼脂糖电泳法观察凋亡细胞DNA Ladder现象;采用MTT法测定细胞增殖抑制率。结果 Giemsa染色后可见阿司匹林组细胞体积缩小,凋亡小体形成,且随着浓度增加,凋亡率也增加;不同浓度阿司匹林作用Hela细胞48 h后,提取DNA电泳,可见明显的DNA裂解带;MTT结果显示,在1.0～10.0 mmol/L浓度区间内,随浓度增加和时间的延长,阿司匹林对细胞的抑制率逐渐增加。结论阿司匹林在体外可抑制人宫颈癌Hela细胞增殖,其机制可能为抑制肿瘤细胞DNA合成有关。

中药复方儿黄散对宫颈癌Hela细胞增殖抑制及Bcl-2蛋白表达的影响

目的:探讨中药复方儿黄散(EHS)对宫颈癌Hela细胞增殖抑制和Bcl-2蛋白表达的影响。方法:体外培养人宫颈癌Hela细胞,采用MTT法检测细胞增殖抑制率,二步法免疫组化检测Bcl-2蛋白表达变化。结果:儿黄散能够抑制Hela细胞增殖,并且使Bcl-2蛋白表达明显下调(P<0.05)。结论:中药复方儿黄散能促进Hela细胞凋亡,其分子机制可能与下调Bcl-2蛋白表达有关。

黄连素对人宫颈癌Hela细胞株的体外作用研究

目的研究黄连素对人宫颈癌Hela细胞株的体外作用,探讨其可能的作用机制。方法采用MTT法测定细胞生长抑制率;原位末端标记技术法(TUNEL)检测细胞凋亡率;免疫细胞化学法检测药物作用前后细胞(COX-2)、Bcl-2蛋白水平表达的变化。结果黄连素在体外能以时间和剂量依赖的方式对宫颈癌Hela细胞产生细胞毒作用并诱导其凋亡;免疫细胞化学法证实黄连素作用Hela细胞后Bcl-2蛋白表达下调,COX-2的表达无明显变化。结论黄连素在体外对宫颈癌Hela细胞具有生长抑制作用,并可诱导细胞凋亡,其诱导凋亡作用可能与Bcl-2蛋白表达下调有关。