雷公藤红素逆转宫颈癌细胞顺铂耐药性实验研究

目的研究中药活性成分雷公藤红素逆转耐药宫颈癌细胞株Hela/R对顺铂的耐药性,并探讨其机制。方法采用顺铂梯度暴露法构建顺铂耐药宫颈癌细胞株Hela/R;采用MTT法检测雷公藤红素是否能增强顺铂对Hela/R的杀伤活性;Western blot试验检测常规Hela细胞及Hela/R细胞抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-w及Bcl-xl表达水平;流式细胞术检测雷公藤红素联合顺铂对Hela/R细胞的凋亡诱导效应及对线粒体膜电位的影响。结果 1、2、4、8、16、32、64μmol/L顺铂对Hela及Hela/R细胞的细胞活力抑制率分别为:(18.6±1.5)%(Hela),(1.9±1.0)%(Hela/R);(23.9±2.4)%(Hela),(3.1±1.2)%(Hela/R);(47.8±3.9)%(Hela),(6.8±1.5)%(Hela/R);(63.4±5.4)%(Hela),(11.6±1.8)%(Hela/R);(72.7±5.9)%(Hela),(20.4±2.0)%(Hela/R),(85.7±6.7)%(Hela),(41.2±3.3)%(Hela/R);(91.8±7.9)%(Hela),(55.8±4.3)%(Hela/R),两组比较,P均<0.05。2μmol/L雷公藤红素对Hela/R细胞的细胞活力抑制率为(6.6±1.1)%;2μmol/L雷公藤红素分别加10、20、40μmol/L顺铂组Hela/R细胞的细胞活力抑制率优于单用10、20、40μmol/L顺铂组[(57.2±3.9)%比(12.4±1.2)%、(71.4±5.1)%比(27.8±1.9)%、(84.8±6.8)%比(45.2±3.1)%,P<0.05]。Hela/R细胞Bcl-w/β-actin表达水平高于Hela细胞[(70.9±4.9)比(22.1±1.3),P<0.05],Bcl-2/β-actin与Bcl-xl/β-actin表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组比较,雷公藤红素可明显抑制Hela/R细胞Bcl-w/β-actin的表达[(29.3±2.6)比(68.9±4.5),P<0.05]。雷公藤红素增强顺铂对Hela/R细胞线粒体膜电位的损伤,促进细胞色素C的释放,而诱导Hela/R细胞发生凋亡。结论雷公藤红素体外能提高顺铂对耐药宫颈癌细胞的杀伤活性,其机制可能为通过抑制Bcl-w表达,提高促凋亡蛋白的活性,进而促进耐药宫颈癌细胞发生线粒体途径的凋亡。

miR-21抑制剂对细胞增殖和MMP2蛋白表达的影响

目的探讨miR-21抑制剂对He La细胞增殖、凋亡以及基因表达的影响,为研究宫颈癌发病机制和治疗方法提供新的思路和实验依据。方法将miR-21抑制剂以及miRNA对照转染至Hela细胞,细胞活力检测试剂盒测定细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,并用ELISA方法检测miR-21抑制剂对MMP2蛋白表达的影响。结果100n MmiR-21抑制剂转染显著降低了HeLa细胞的增殖,显著下调了MMP2蛋白表达水平。50n MmiR-21抑制剂转染组凋亡细胞有所增加,但无统计学显著意义。结论 miR-21抑制剂可以有效抑制HeLa细胞增殖,降低MMP2蛋白表达。miR-21抑制剂有望应用于抑制宫颈癌细胞的增殖,并促进其凋亡。

沙眼衣原体感染对HeLa细胞MHCⅠ、Ⅱ类分子表达的影响

目的 探讨沙眼衣原体 (Chlamydiatrachomatis ,Ct)K型感染对HeLa细胞MHCⅠ、Ⅱ类分子表达的影响。方法 用免疫荧光法和流式细胞术等方法 ,对Ct感染和未感染的HeLa细胞MHCⅠ类分子表达水平和IFN γ诱导的HeLa细胞MHCⅡ类分子表达水平进行检测 ,同时对IL 10抗体的影响也作了研究。结果 Ct感染细胞MHCⅠ类分子表达水平和IFN γ诱导的感染细胞MHCⅡ类分子表达水平 ,随Ct感染剂量增加和感染时间延长而下降 ,与正常未感染细胞比较上述差异均具有统计学意义 (P <0 .0 1)。IL 10抗体能部分抑制感染细胞MHCⅠ类分子表达下调 ,但对IFN γ诱导的感染细胞MHCⅡ类分子表达下调无显著影响。结论 Ct感染可下调感染细胞MHCⅠ类分子和IFN γ诱导的细胞MHCⅡ类分子表达水平 ,这可能是造成衣原体持续感染的重要原因。感染过程中分泌的IL 10在下调感染细胞MHCⅠ类分子表达过程中起一定作用 ,而对IFN