光动力疗法治疗鲜红斑痣1216例临床分析

目的 分析比较血啉甲醚 (HMME)与血卟啉衍生物 (HpD)为光敏剂行光动力治疗 (PDT)鲜红斑痣的临床疗效及副反应。材料与方法 鲜红斑痣患者 12 16例 ,粉红型 13 2 % ,紫红型 6 8 3% ,增厚型 18 4%。静脉注射HpD或HMME 3～ 7mg/kg后给予铜蒸气激光、KTD/ 5 32激光或氩离子激光照射 ,功率密度 5 0～ 10 0mW/cm2 ,能量密度 90～ 5 40J/cm2 ,随访观察。结果 HMME PDT和HpD PDT对各型鲜红斑痣均能有效地消除病变颜色 ,所随访的 16 32个病灶在 2个月至 9年的随访期内未见复发。治疗后反应有 :局部水肿 5～ 7天 ,部分患者有结痂或一过性色素沉着 ,皮肤暂时性光过敏反应。HpD PDT组避光期 30～ 90天 ,HMME PDT组避光期 7～ 14天。与HpD PDT相比 ,HMME PDT具有反应轻、愈合快、不良反应少、安全度大、避光期短、色素沉着轻、护理容易、重复治疗间隔期短的特点。结论 HMME PDT与HpD PDT都能有效治疗各型鲜红斑痣 ,但HMME PDT具有不良反应少、安全度大、避光期短、护理容易。

血啉甲醚用于光动力疗法治疗鲜红斑痣的初步临床研究

经六年大量临床验证，光动力疗法已成为具有高度选择性和稳定可靠疗效的无瘢痕治疗鲜红斑痣的新方法。为解决治疗后的较长时间皮肤光敏反应这一主要副作用，本文对２１例志愿鲜红斑痣患者的２６个病灶应用血啉甲醚（ＨＭＭＥ）为光敏剂进行了治疗，对ＨＭＭＥ的作用进行了临床观察，发现ＨＭＭＥ具有良好的疗效、较轻的局部反应、较短的避光期和可行重复治疗的间隔期等优点，值得对其进行深入的研究。

钙在血卟啉单甲醚-光动力学疗法处理后HeLa细胞中的变化及作用

目的了解钙离子在血卟啉单甲醚-光动力学疗法(HMME-PDT)处理后HeLa细胞中的变化和作用。方法Fura-2/AM孵育荧光分光光度计检测细胞质游离钙浓度犤Ca2+犦i的变化,MTT法分析PDT及钙离子对HeLa细胞存活率的影响,Western印迹法分析HMME-PDT后HeLa细胞的肌浆/内质网钙泵(SERCA2)蛋白的降解情况。结果HMME-PDT处理后即刻HeLa细胞内犤Ca2+犦i就开始增高,且与PDT剂量成正相关用,BAPTA/AM拮抗犤Ca2+犦i的升高可增加HeLa细胞的存活率。同时HMME-PDT可引起SERCA2蛋白的降解。结论HMME-PDT处理后HeLa细胞内犤Ca2+犦i可迅速增高,犤Ca2+犦i升高可能与SERCA2蛋白的降解相关,并可促进HeLa细胞的死亡。

血卟啉乙二醇醚类化合物的合成及其光动力抑瘤活性

以氯化血红素为原料经加成、脱铁、醚化及水解合成了７个新的血卟啉乙二醇醚类化合物（１ａ～ｇ），１ａ～ｇ在Ｄ２Ｏ中对ＮＡＤＰＨ光氧化作用的敏化效应均高于ＨｐＤ，１ｂ对小鼠Ｓ１８０肉瘤的光动力损伤作用明显高于ＨｐＤ。

血啉甲醚对体外培养的类风湿关节炎滑膜细胞光动力杀伤作用的初步研究

目的 探讨血啉甲醚 (hematoporphyrinmonomethylether,HMME)对体外培养的类风湿关节炎患者滑膜细胞的光动力杀伤作用。方法 用四唑盐比色法 (MTT)检测了不同能量的铜蒸气激光、不同浓度的HMME对体外培养的类风湿关节炎滑膜细胞的杀伤效应 ,并与血卟啉衍生物 (hematoporphyrinderivative,HpD)进行比较。结果 (1)单纯照光及单加HMME、HpD对细胞存活率均无明显抑制作用。 (2 )各种浓度的HMME在不同剂量的激光作用下对细胞均有杀伤作用 ,浓度越高其杀伤作用越明显 ;HMME浓度一定 ,随着照光剂量的增大杀伤作用增强 ;不同浓度HMME介导的光动力杀伤作用所能产生的最大抑制率不同 ,此时所需的光剂量也不同。 (3)HMME介导的光动力效应对滑膜细胞的杀伤作用受照光前孵育时间的影响。 (4 )相同浓度的HMME介导的光动力杀伤效应较HpD更强。结论 HMME介导的光动力效应对滑膜细胞的杀伤作用受光敏剂的浓度及照光能量密度的影响 ,且明显强于HpD 。

光动力疗法诱导增生滑膜细胞凋亡的初步研究

目的 :观察光动力疗法 (PDT)诱导类风湿性关节炎 (RA)动物模型的增生滑膜细胞的凋亡情况。方法 :兔AIA模型在关节炎出现第七天进行PDT治疗 ,随机治疗一侧膝关节 ,另一侧作自身对照。免耳静脉注入HMME10mg Kg,2 0分钟后 ,膝关节用金蒸气激光照射 ,激光波长 6 2 7.8nm ,功率密度 10 0mW cm2 ,能量密度 10 0J cm2 。 2 4小时后取膝关节滑膜作病理检查 ,并用脱氧核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法 (TUNEL)原位检测凋亡细胞。结果 :PDT治疗组凋亡阳性细胞较对照组明显增多 ,图像分析结果单位视野内阳性细胞数和面密度PDT治疗组高于对照组 ,统计学检验差异有显著性。凋亡细胞核直径PDT治疗组较小 ,与对照组相比 ,统计学检验差异有显著性。结论 :PDT有可能通过诱发滑膜细胞的凋亡 。

HMME-PDT治疗鲜红斑痣238例临床疗效分析

目的:对鲜红斑痣患者HMME-PDT治疗后的临床疗效进行分析并探讨其有关影响因素。方法:对238例鲜红斑痣患者共计296个红斑区给予HMME-PDTT治疗。观察治疗区术后反应并判定其疗效。结果:治疗后红斑区出现水肿、结痂和脱痂等光敏反应。治疗总有效率达100％,其中疗效达Ⅰ级者占8.8％(26/296),Ⅱ级者占36.5％(10/296),Ⅲ级者占48.0％(142/296),Ⅳ级者占6.8％(20/296)。粉红型患者Ⅰ级疗效率(26.3％)明显高于紫红型(8.8％)和增厚型(5.9％)。结论:HMME-PDT治疗鲜红斑痣效果明显,安全可靠。

HMME-PDT对兔耳增生性瘢痕块成纤维细胞增殖能力及其超微结构的影响

目的观察血卟啉单甲醚(hematoporphyrin monomethyl ether,HMME)-光动力学疗法(photodynamie therapy,PDT)对兔耳增生性瘢痕块中成纤维细胞增殖能力及细胞超微结构的影响。方法建立兔耳增生性瘢痕模型后,将24个瘢痕块随机分为HMME-PDT治疗组和对照组(n=12)。造模后28 d取材行银染色,计算瘢痕成纤维细胞核内AgNORs颗粒数,并在透射电镜下观察细胞超微结构改变,分析HMME-PDT对瘢痕的影响。结果HMME-PDT治疗后,银染成纤维细胞核内AgNORs颗粒数显著下降,细胞内粗面内质网萎缩且数量减少;核糖体脱颗粒、解聚;线粒体肿胀,嵴溶解;并出现部分细胞凋亡现象。结论在瘢痕形成早期,HMME-PDT能够抑制兔耳瘢痕成纤维细胞的增殖能力,破坏前胶原蛋白合成的场所,减少胶原蛋白的合成与分泌,并能诱导部分成纤维细胞进入凋亡途径,HMME-PDT有可能成为瘢痕防治的有效方法。

光动力疗法防治损伤性血管内膜增生的实验研究

目的 :观察光动力疗法 (PDT)防治损伤性血管内膜增生的近期疗效 ,并筛选PDT参数。方法 :首先筛选PDT参数。兔 2 4只 ,按L4 ( 2 3)正交实验方案分为四组 ,处理因素为血啉甲醚 5或 10mg/kg、功率密度 30或 90mw/cm2 、照射时间 15或 30min。球囊法损伤髂总动脉内膜 ,随后进行PDT处理 ,2 1天后取材 ,以中膜与内膜面积的比值为指标分析各处理因素的作用。其次观察PDT疗效。兔 2 4只 ,随机分成 4组 :( 1)单纯损伤组 ;( 2 )PDT对照组 ,内膜损伤后先激光照射 ,后注射血啉甲醚 ;( 3)低PDT剂量组 ,内膜损伤后先注射血啉甲醚 5.0mg/kg ,然后以 30mw/cm2 照射 15min ;( 4 )高PDT剂量组 ,以 90mw/cm2 照射 ,其余同低剂量组。以内膜与中膜面积的比值为指标分析PDT疗效。结果 :预选参数的最优搭配为 :功率密度为 30mw/cm2 ,照射时间为 15min ,血啉甲醚剂量为 5mg/kg。低剂量组与高剂量组的S1/S2 比值分别比单纯损伤组低 71.9% (P <0 .0 1)和 59.4 % (P <0 .0 5) ,比PDT对照组低 63.1% (P <0 .0 1)和 4 6.5% (P <0 .0 5)。结论 :经皮血管内光动力疗法可能成为防治损伤性血管内膜增生的有效方法。

光动力药物血卟啉单甲醚HPLC-荧光检测法的建立及其药代动力学研究

目的建立测定血浆中血卟啉单甲醚(HMME)的HPLC-荧光检测法,并用以进行HMME在犬体内的药代动力学研究.方法血浆中的HMME采用乙酸乙酯液-液萃取,荧光素为内标.选用C18柱(4.6 mm×150 mm,5 μm),0.02 mol/L 醋酸钠(用冰醋酸调pH 6.0)-四氢呋喃(60∶40)组成为流动相,荧光检测器激发波长为 395 nm,发射波长为 613 nm.结果 HMME血药浓度的范围为0.025～5.000 μg/mL,采用两条标准曲线定量的方法,两条标准曲线的线性范围分别为:0.025～0.500 μg/ml(r=0.9973)和0.25～5.00 μg/ml(r=0.9999),提取回收率92.1%～99.2%,日内、日间RSD分别为3.3%～8.4%和3.8%～8.5%. 静脉给药后,HMME在犬体内的药代动力学符合开放二房室模型.其主要药代动力学参数:T1/2α(分布半衰期) =(0.18±0.16)h,T1/2β(消除半衰期) =(14.24±3.41)h, Vd(中央室表观分布容积)=(6.37±3.70)L/g,CL(清除率) =(0.31±0.17)L·kg-1·L-1,AUC(0-tn)(血药浓度-时间曲线下面积)=(27.40±11.72)mg·h-1L·-1.结论 HPLC-荧光检测法准确、灵敏,适用于HMME药代动力学研究.HMME在犬体内的药代动力学过程符合开放二室模型,其在犬体内可以迅速消除,可很好地消除光动力学疗法的主要副作用--正常组织的持久光毒反应.

光动力治癌新药血卟啉单甲醚(HMME)的研究

本文报道了一种单体卟啉血卟啉单甲醚的合成及其光敏化力、人癌细胞光灭活作用、动物移植瘤光动力疗效和有关的临床前药理毒理学研究资料。实验结果表明,与临床应用的混合卟啉制剂血卟啉衍生物(HpD)相比,HMME具有光敏化力强、肿瘤选择性摄入率高、光动力效应强、毒性低、无致突变和致畸胎作用等优点,是一种较理想的光动力治癌新药。

光动力学疗法辅助显微技术治疗脑胶质瘤

目的观察血卟啉单甲醚光动力学疗法辅助手术治疗脑胶质瘤的近期疗效和随访效果。方法1999～2001年,应用光动力学疗法辅助手术治疗脑胶质瘤34例。术中暴露肿瘤前,静脉推注血卟啉单甲醚5mg/kg,显微镜下切除肿瘤后,以能量密度200J/cm2He-Ne激光照射肿瘤残腔。术后避光3d,观察近期临床表现,出院后定期随访2～4年。结果大部分患者术后临床症状缓解或消失;出院时Karnofsky记分升高者28例,无变化者6例,改善率82.4%(28/34);全部病例无皮肤光敏反应;术后1年生存率为76.5%(26/34);术后2年生存率为52.9%。结论激光光动力学疗法是一种有效的脑胶质瘤辅助治疗方法,近期临床效果满意,有利于提高生存率和生存质量,延长患者生命。

不同活性氧成分在血卟啉单甲醚-PDT诱导HeLa细胞死亡中的作用

目的探讨不同活性氧成分在血卟啉单甲醚(HMME)-PDT诱导HeLa细胞死亡中的作用。方法将接种人宫颈癌HeLa细胞的培养皿随机分成单纯HMME-PDT组、HMME-PDT加叠氮钠(单线态氧淬灭剂)与HMME-PDT加甘露醇(羟自由基淬灭剂)组。以功率密度为15mW/cm2,能量密度为5.4J/cm2、波长为510.6mm的激光照射。用膜联蛋白(annexin)V-碘化丙啶(PI)双染法检测激光照射后第6和24h三组中HeLa细胞的凋亡率和坏死率。结果PDT后第6小时,单纯HMME-PDT组和HMME-PDT加入叠氮钠组的坏死率17.68%±1.05%和4.15%±2.19%(P=0.0006),单纯HMME-PDT组和HMME-PDT加D-甘露醇组的HeLa细胞凋亡率分别为11.48%±3.42%和3.19%±1.01%(P=0.0158)。PDT后第24小时,单纯HMME-PDT组的HeLa细胞凋亡率和坏死率分别为48.51%±2.85%和19.26%±1.57%,加入叠氮钠组为40.45%±3.56%和13.12%±2.75%,加入D-甘露醇组为39.43%±4.37%和21.00%±4.31%。结论HMME-PDT产生的单线态氧以导致HeLa细胞坏死为主,而羟自由基则以导致细胞凋亡为主。

线粒体在血卟啉单甲醚-PDT诱导HeLa细胞凋亡中的作用

目的探讨线粒体在血卟啉单甲醚(HMME)-PDT诱导HeLa细胞凋亡中的作用。方法膜联蛋白(annexin)V-PI双染法检测HMME-PDT处理后6hHeLa细胞的凋亡率和坏死率。Rh123染色法检测PDT后2h内HeLa细胞的线粒体膜电位(△Ψm)变化。Western杂交法检测PDT后6h内细胞质内细胞色素C(CytC)的含量变化。结果HMME-PDT后6hHeLa细胞的凋亡率和坏死率分别为11.48%±3.42%和17.68%±1.05%。PDT后2h内△Ψm无显著改变。PDT后即刻(0h)细胞质内未检测到CytC,而在PDT后2、4和6h均可检测到CytC,且含量有增高的趋势。结论线粒体内的CytC转位于细胞质,是HMME-PDT导致HeLa细胞凋亡的机制之一。

共焦荧光显微定量研究血卟啉单甲醚亚细胞定位

目的 :研究血卟啉单甲醚 (HMME)在鼠肺毛细血管内皮细胞内的亚细胞定位 ;方法 :孵育时间分别为 2小时、2 4小时 ,四种荧光探针标记四种细胞器。激光扫描共聚焦显微镜 (LSCM)探测HMME和探针荧光图像。定性比较两种荧光分布模式 ,并定量计算高探针荧光区域与细胞内HMME荧光均量比I2 /I1 ;结果 :两种孵育时间下 ,HMME荧光均呈胞浆弥散分布 ,且在核周附近的高尔基体灰度较高 ,细胞核几乎无荧光分布。I2 /I1 高低顺序 2小时组 :高尔基体 >内质网 >溶酶体 线粒体 ;2 4小时组 :高尔基体 >线粒体 内质网 >溶酶体 ,且高尔基体组显著下降伴随线粒体组大幅上升 ;结论 :此定量分析方法能有效用于光敏剂亚细胞定位研究 ,对弥散分布光敏剂尤其适合 ;两种孵育时间下 ,高尔基体为HMME主要定位点 ,内质网有一定分布 ,溶酶体分布很少 ,细胞核几乎无分布 ;短孵育时间线粒体分布很少 。

风湿性关节炎动物模型中血啉甲醚荧光强度的同步检测研究

光动力疗法的疗效依赖于治疗过程中靶组织中光敏剂的含量或浓度 ,而药物在组织中的分布特性是受动物机体调控的 ,因此 ,同一个体不同组织对光敏剂吸收的时间特性需要同时进行检测才能排除个体之间的差异。建立了一套空间三通道激光诱导荧光同步检测装置 ,并用该装置研究了活体大耳白兔风湿性关节炎模型滑膜、软骨和皮肤对血啉甲醚吸收的时间特性。研究结果表明 ,炎性滑膜组织对血啉甲醚的吸收量远大于软骨和皮肤 ,这一差别在静脉给药即刻就很明显 ,在静脉给药后 2 0min内 ,滑膜中的光敏剂药物含量约为软骨和皮肤中的 6倍。因此 ,对于借助血啉甲醚 ,用光动力疗法治疗风湿性关节炎并采用体外照射治疗方案时 ,从注药即刻开始 ,前 2 0min左右进行光照治疗可能是较好的选择。

光动力疗法封闭兔耳缘静脉的实验研究

目的 探讨光动力疗法封闭小静脉所需光敏剂和激光照射的剂量 ,为临床应用光动力疗法封闭小静脉提供依据。方法 以兔耳缘静脉为研究对象。实验动物注射血啉甲醚或竹红菌乙素后用铜蒸气激光照射耳缘静脉。选择不同的功率密度、照射时间、光敏剂及其剂量 ,比较各组兔耳缘静脉血栓形成比率。结果 在血啉甲醚剂量为 10mg kg时 ,15 0mW cm2 激光照射 40min(能量密度为 3 60J cm2 )的血兔耳缘静脉血栓形成比率高于180J cm2 和 2 40J cm2 (P =0 0 40 ,P =0 167)。 180J cm2 激光照射剂量时 ,3 0mg kg血啉甲醚组血栓形成比率高于 10mg kg和2 0mg kg(P =0 0 14,P =0 2 14)。功率密度同为 15 0mW cm2 ,血啉甲醚剂量为 3 0mg kg激光照射 2 0min与 10mg kg激光照射40min的血栓形成比率相当 (P =0 5 5 6)。功率密度为 15 0mW cm2 激光照射时 ,竹红菌乙素剂量为 1mg kg激光照射 5min ,与血啉甲醚剂量为 10mg kg激光照射 40min的血栓形成比率相当 (P =0 714)。结论 在一定范围内局部激光照射能量越高、光敏剂的剂量越大 ,越容易形成血栓。光动力疗法封闭小静脉形成血栓比较合适的条件是血啉甲醚剂量 10mg kg ,功率密度 15 0mW cm2 ,照射时间 40min。光动力疗法对小静脉的封闭作用使之有可能成为治疗食管。

不同参数HMME-PDT对兔耳增生性瘢痕的生物效应

目的观察不同参数的血卟啉单甲醚-光动力学疗法(HMME-PDT)对兔耳增生性瘢痕的生物学效应,为临床应用HMME—PDT防治增生性瘢痕提供实验依据。方法建立兔耳增生性瘢痕模型后,将150个增生性瘢痕块随机分为HMME-PDT治疗组和对照组。PDT治疗组给予HMME10mg/kg,分别在给药后即刻、30 min、1和3h行半导体激光照射,波长630nm,能量密度分别为5、10和20 J/cm^2。观察瘢痕生长情况,术后28d取材行常规HE染色,计算各组瘢痕增生指数,分析HMME-PDT对瘢痕的影响。结果静脉注射HMME 10mg/kg后,以功率密度为20 mW/cm^2,能量密度为5J/cm^2的半导体激光在给药后即刻和30min照光时能对瘢痕增生块产生抑制效应,其中以时间间隔为30min时的作用更加显著,而能量密度为20J/cm^2的激光照射瘢痕增生指数仍然较高,甚至超过空白对照组。结论HMME—PDT对兔耳增生性瘢痕的生物学效应与光敏剂的剂量和激光照光时间、给药后至照光的时间间隔和能量密度密切相关。

光动力疗法对大鼠类风湿性关节炎治疗作用的观察

目的 观察以血啉甲醚 (HMME)为光敏剂的光动力效应对类风湿性关节炎动物模型的治疗作用。方法 LEW大鼠 30只 ,随机分为正常对照组 5只、关节炎组 10只、治疗组 15只。关节炎组和治疗组用Ⅱ型胶原蛋白诱发关节炎 (CIA)。治疗组在大鼠出现踝关节红肿后 1周 ,炎症达到高峰时进行光动力治疗 (PDT)。随机治疗大鼠一侧的踝关节 ,对侧作为单纯HMME对照。治疗方法是大鼠麻醉后尾静脉注入HMME 10mg kg ,2 0min后踝关节照光 ,激光波长 6 2 7 8nm ,功率密度 10 0mW cm2 ,照射时间 10 0 0s,能量密度 10 0J cm2 。治疗后 2周取关节进行病理评分。结果 关节炎组滑膜细胞增生 ,血管翳形成 ,并侵蚀和破坏软骨和骨 ;治疗组滑膜细胞增生不明显 ,软骨和骨完整。病理评分治疗组滑膜增生、血管翳形成及软骨破坏、骨破坏和总分较关节炎组和HMME组低 ,统计学检验差异有显著意义 (P <0 0 1)。结论 在HMME 10mg kg,激光功率密度 10 0mW cm2 、能量密度 10 0J cm2 的条件下 ,光动力疗法能够有效地减轻CIA的滑膜细胞增生 ,减轻血管翳的形成及对软骨和骨的破坏 ,起到保护软骨和骨的作用。

血卟啉单甲醚-光动力学疗法对兔移植静脉再狭窄的抑制作用

目的探讨局部灌注血卟啉单甲醚(HMME)结合血管外激光照射的方法对移植静脉吻合口处内膜增生的抑制作用。方法采用兔颈外静脉颈总动脉移植模型,将实验动物随机分为光动力学治疗组、单纯激光照射组、单纯光敏剂灌注组、空白对照组,每组4只兔。光动力学治疗组局部应用血卟啉单甲醚HMME(15μg/ml)溶液充盈在移植静脉段,再以532nm波长半导体激光器在吻合口(每只兔2处吻合口)附近进行血管外照射5min,功率密度100mW/cm2,能量密度30J/cm2;单纯激光照射组以生理盐水充盈移植静脉段,再用激光照射;单纯光敏剂灌注组仅用HMME(15μg/ml)溶液充盈移植静脉段5min;空白对照组应用生理盐水充盈移植静脉段5min。术后第4周于各实验组移植静脉的动静脉连接部及其两侧0.5cm处的动脉端、静脉端取材,常规石蜡包埋切片HE染色,组织病理观察,采用IMAGE-ProPlus生物医学图像分析系统,观察不同处理组内膜增生程度的差异。结果在移植静脉吻合口的动静脉连接部、动脉端及静脉端,光动力学治疗组与其他各组相比内膜增生程度明显减低。结论光动力学疗法对移植静脉早期阶段的再狭窄有明显的抑制效应。