γ干扰素释放试验在结核病与糖尿病共病中的诊断价值研究

目的:探讨γ干扰素(IFN-γ)释放试验在结核病与糖尿病共病中的诊断价值。方法:选取2021年3月—2022年11月中山市第二人民医院感染科收治的初治肺结核患者92例为研究对象,2021年3月—2021年8月采用结核感染T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)试剂盒检测,2021年9月—2022年11月采用IFN-γ试剂盒(TB-IGRA)检测及糖化血红蛋白(HBA1c)检测。根据HBA1c范围分为A组(4%~6.5%),B组(6.6%~9%),C组(>9%)。分析T-SPOT.TB、TB-IGRA、HBA1c检测结果及T-SPOT.TB、TB-IGRA检测肺结核阳性在各组中占比。结果:HBA1c检测结果,A组27例,B组34例,C组31例;TB-IGRA检测阳性率高于T-SPOT.TB检测阳性率,差异有统计学意义(P=0.024)。A组、B组、C组TB-IGRA检测阳性占比均高于T-SPOT.TB检测阳性占比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:TB-IGRA具有较高的检出率,对诊断肺结核合并糖尿病患者的阳性率影响较小,利于及时控制肺结核的传播。

普通外科患者血红蛋白释放试验的比较研究

目的研究一些普外患者血红蛋白释放试验(HRT)结果的差异,探讨其临床意义。方法普通外科住院患者,取静脉血做HRT,采用3种HRT定点释放技术:等渗室温HRT、等渗37℃HRT、低渗37℃HRT各项处理结束后,进行淀粉-琼脂糖混合凝胶薄层电泳,第一次电泳后,停电一段时间后继续第二次电泳,丽春红、联苯胺染色后观察血红蛋白的释放情况。结果①等渗室温HRT:8例患者中有1例出现阳性结果;②等渗37℃HRT:10例患者中有3例出现阳性结果;③低渗37℃HRT:同上10例患者中有5例出现明显阳性结果。结论各种类型HRT的结果不同,灵敏度有差异,临床意义也有区别,可以提供多种疾病信息。HRT的基本原理是观察不同状态下红细胞膜释放血红蛋白的能力,详细机制有待于进一步研究。

尿毒症患者低渗血红蛋白释放试验的初步结果

目的建立低渗血红蛋白定时释放试验,比较研究慢性肾衰(CRF)患者红细胞中血红蛋白的存在状态,探讨其机制和临床意义。方法用低渗血红蛋白释放试验(HRT)五管法比较研究CRF患者与正常人的血红蛋白释放情况。再用低渗HRT一管法比较研究5例CRF与4例非CRF患者的血红蛋白释放结果。结果与正常对照比较,CRF患者标本出现以下特点:白蛋白前移、血红蛋白A2稍前移、定时释放增多、原点残留和泄漏明显。5例CRF的血红蛋白释放强于4例非CRF患者。结论与正常人或非CRF患者比较,CRF患者血液成分的电泳释放行为变化较大。白蛋白前移可能是它与血中毒素结合有关、血红蛋白释放方面的变化也可能来自毒素对红细胞的影响。

低渗血红蛋白释放试验与慢性肾衰竭

目的建立低渗血红蛋白定时释放试验,比较研究慢性肾衰竭(CRF)患者红细胞中血红蛋白的存在状态,探讨其机制和临床意义。方法用低渗HRT五管法,比较研究CRF患者与正常人的血红蛋白释放情况。再用低渗HRT一管法,比较研究5例CRF与4例非CRF肾病患者的血红蛋白释放结果。用交叉电泳研究CRF患者血浆成分对非CRF肾病患者红细胞的影响。结果与正常对照比较,CRF患者标本出现以下特点:白蛋白前移、血红蛋白A2稍前移、定时释放增多、原点残留和泄漏明显。5例CRF的血红蛋白释放强于4例非CRF肾病患者。交叉电泳结果表明,CRF患者血浆成分对非CRF肾病患者红细胞有一定影响。结论与正常人或非CRF肾病患者比较,CRF患者血液成分的电泳释放行为变化较大。白蛋白前移可能是它与血中毒素结合有关、血红蛋白释放方面的变化也可能来自毒素对红细胞的影响。

不同浓度过氧化氢处理红细胞对血红蛋白释放的影响

为观察不同浓度过氧化氢处理红细胞对血红蛋白(Hb)释放的影响,分别用8%、4%、2%、1%、0.5%、0.25%和0.125%的过氧化氢溶液处理等体积的红细胞悬液,然后测定红细胞相对溶解度及上清液中丙二醛的含量,并利用血红蛋白释放试验(HRT)比较不同浓度过氧化氢处理红细胞后血红蛋白释放的差异。结果表明,随着过氧化氢浓度逐渐增高,血红蛋白的释放逐渐增多,但继续增高过氧化氢的浓度,可使血红蛋白释放减少。说明不同浓度过氧化氢对血红蛋白释放影响不同。

血红蛋白释放试验与血液流变学检测结果相关性的研究

目的:研究血红蛋白释放试验(HRT)与血液流变学检测结果之间的相关性,探讨有关机制和临床意义。方法:对48例门诊随机标本配对做低渗37℃HRT。将血液流变学测试报告中的3项全血黏度(低切、中切、高切)值与HRT测定值进行比较,分析两者的相关性。结果:HRT与血液流变学结果呈一定的正相关,其与各种黏度值的相关系数分别为:低切r=0.642(P<0.001),中切r=0.636(P<0.001),高切r=0.641(P<0.001)。结论:HRT的反应机制中,至少有一部分与血液黏度增加有关。

红细胞血红蛋白释放实验与免疫共沉淀联用分析人红细胞内血红蛋白与其他蛋白的相互作用

目的:通过红细胞血红蛋白电泳释放实验(ERT)与免疫共沉淀,寻找红细胞内与血红蛋白(hemoglobin,Hb)相互作用的蛋白。方法:首先将正常成人新鲜抗凝全血制备成红细胞悬液和溶血液,通过电泳释放实验分别分离并得到红细胞Hb A(RA)和溶血液Hb A(HA),将此区带从凝胶中分别切出,经过反复冻融后,将上清吸出并进行浓缩,然后用hemoglobinβantibody(37-8)AC通过免疫共沉淀的方法,分别从红细胞裂解液、RA和HA中捕获血红蛋白复合物,然后利用5%-12%的SDS-PAGE分离上述复合物,并用Q-TOF质谱对目的区带进行鉴定。结果:Hb A成分经hemoglobinβantibody(37-8)AC免疫共沉淀捕获的复合物包含有16、20、22、28、50 k D 5条明显的区带,经质谱鉴定分别为血红蛋白、Band 3蛋白、硫氧还蛋白过氧化物酶2(Prx2)、Band 3蛋白和β-actin蛋白、Band 3蛋白。结论:在人红细胞内,血红蛋白Hb A可能与Prx-2、Band 3蛋白、β-actin蛋白之间存在相互作用,并形成复合体。

肝硬化患者血红蛋白释放试验明显异常

目的利用血红蛋白释放试验对肝硬化患者血液标本进行比较研究。方法对化验室38例检测凝血酶原的全血标本进行筛查,发现一例反常标本,回查大生化全项,发现它是肝功多项异常的肝硬化、腹水标本。在此基础上,从上述38个标本中取一例肝功正常的标本,对比之下做等低渗全程试验和双向双层对角线电泳。结果与对照标本相比,肝硬化标本的等低渗全程试验和双向双层对角线电泳明显不同。结论肝硬化患者血液标本的血红蛋白释放试验结果明显异常。

应用血红蛋白释放试验研究维生素C对红细胞氧化损伤的保护作用

为了研究维生素C对氧化损伤红细胞的保护作用,用终浓度为0、2.5、5、10、20、40mL/L的过氧化氢(H2O2)溶液处理等体积维生素C作用后红细胞悬液(维生素C保护组)和维生素C未作用红细胞悬液(对照组),测定红细胞相对溶解度和高铁血红蛋白(MetHb)含量,并用血红蛋白释放试验比较血红蛋白(Hb)释放差异。结果表明,维生素C保护组Hb释放量和相对溶解度均明显低于对照组(P<0.001),MetHb含量虽然低于对照组(P<0.05),但与H2O2浓度无相关性。说明维生素C对红细胞膜氧化损伤具有保护作用,并能减弱Hb释放和MetHb的生成量。

红细胞血红蛋白释放试验的临床研究进展

研究组在2007年发现并创建了红细胞内血红蛋白电泳释放试验技术,该技术具有操作简单,费用低和效率高的优点。近年来,研究组将此技术不断发展,并应用于临床多种疾病患者的红细胞血红蛋白研究,发现了血液成分及红细胞自身变化均会导致血红蛋白释放的明显差异,提示了血红蛋白释放技术的临床应用价值。目前对血红蛋白释放的分子机制的研究已经取得了一些进展,但仍有很多尚待解决的问题,需要进行更加深入的研究。

维生素C对红细胞氧化损伤保护作用研究

为了利用血红蛋白释放试验(HRT)检测生理浓度维生素C(VC)对生理浓度过氧化氢(H2O2)氧化损伤后红细胞的保护作用,用终浓度为0、0.15、0.3、0.4、0.6、0.7、0.85mmol/L的VC溶液处理红细胞悬液并进行HRT。再分别用0、1.25、2.50、3.75、5.00mL/L的H2O2溶液处理0.4mmol/L VC作用后红细胞悬液(VC保护组)和VC未作用的红细胞悬液(对照组),测定红细胞相对溶解度。结果表明,VC达到生理浓度时,血红蛋白再释放量逐渐减弱;VC保护组红细胞相对溶解度与对照组差别不大。说明生理浓度的VC能减弱HRT的血红蛋白再释放,降低红细胞破膜率,但不能显著降低H2O2对细胞膜的氧化损伤。

不同浓度戊二醛对红细胞血红蛋白释放的影响

为研究不同浓度戊二醛对红细胞细胞膜脆性及血红蛋白(Hb)释放的影响,用0.25、0.125、0.01、0.075、0.05、0.025mL/L的戊二醛溶液处理等体积的红细胞悬液,对照组用等体积的生理盐水处理,然后测定红细胞膜的渗透脆性,并利用血红蛋白释放试验(HRT)比较不同浓度戊二醛处理红细胞后血红蛋白释放的差异。结果表明,随着戊二醛浓度逐渐增高,红细胞渗透脆性变化不明显,但血红蛋白的释放逐渐减少。说明戊二醛可明显减弱红细胞血红蛋白释放。

肿瘤患者红细胞的血红蛋白释放实验初步研究

目的在已建立"血红蛋白释放试验HRT"的基础上,研究肿瘤患者的HRT情况。方法同时比较研究全血中红细胞和从中分离出来红细胞的HRT(简称"两种红细胞的HRT"),做淀粉-琼脂糖混合凝胶电泳。第1次电泳后停电一段时间,再进行第2次或更多次电泳。观察红细胞中血红蛋白的释放情况,同时加入了定量因素。结果各种肿瘤标本都有"两种红细胞的HRT",梯带强度可有不同。本次标本中,游离红细胞梯带相对最强的是肝癌、胰腺癌、胃癌,最弱的是鼻咽癌、甲状腺癌、皮肤癌。全血红细胞的梯带强度普遍较弱,变化相对较小。结论肿瘤患者标本中的血浆因素可能影响全血中红细胞的梯带释放。不同肿瘤其血浆因素可能不一样,具体机制有待深入研究。

应用血红蛋白释放试验研究红细胞保存液甘露醇腺嘌呤磷酸二氢钠对红细胞的保护作用

为了研究红细胞保存液甘露醇腺嘌呤磷酸二氢钠(mannitol adenine sodium dihydrogen phosphate,MAP)对红细胞的保护作用,将红细胞悬液分为对照组和MAP组,将对照组加入等体积生理盐水和红细胞悬液,将MAP组加入等体积MAP液和红细胞悬液,4℃保存。取作用不同时间的两组反应液,利用血红蛋白释放试验(hemoglobin releasing test,HRT)比较血红蛋白释放差异,并测定相对溶解度。结果显示,相同时间MAP组的Hb释放量明显弱于对照组,红细胞的相对溶解度也较对照组显著降低。说明红细胞保存液能减弱Hb再释放,降低红细胞破膜率,保护红细胞。

血型对正常成人红细胞血红蛋白释放的影响

目的:观察不同血型(ABO血型系统)对正常成人红细胞血红蛋白释放的影响。方法:利用红细胞血红蛋白释放试验(HRT),研究比较不同血型的正常成人血红蛋白释放情况。结果:不同血型的正常成人血红蛋白释放量基本相同。结论:血型糖蛋白对红细胞血红蛋白释放没有明显的影响。

剖宫产前后血红蛋白释放试验的连续观察

目的观察剖宫产手术前后红细胞释放血红蛋白情况。方法 1例剖宫产孕妇,分别于剖宫产术前、术后1、5、13 d采血,对这4份血液标本进行双向多层电泳,对其中术后5天的血液标本进行等低渗全程电泳,再对术后1天和5天的标本的血浆进行单向电泳试验。结果剖宫产术后5 d标本血红蛋白释放的变化较大。即在血红蛋白A1前方出现快泳联苯胺阳性成分,血浆中也有此联苯胺阳性成分,在白蛋白前出现丽春红阳性物质,涉及急性期反应蛋白。结论剖宫产手术前后血红蛋白释放结果有差异。

肝病患者胰高血糖素、糖化血红蛋白检测及胰岛素和C肽释放试验的临床意义

目的:探讨肝病患者糖代谢紊乱与糖尿病之间的鉴别诊断及临床意义。方法:应用放射免疫法研究46例肝病患者和39例糖尿病患者的(?)高血糖素(IRG)、糖化血红蛋白(GHb)及胰岛素(IRI)和C肽释放试验。结果:慢性肝炎肝硬变、肝原性糖尿病、糖尿病有不同程度的高IRG血症,各型糖尿病有不同程度的高GHb血症。胰岛素和C肽释放试验:慢性肝炎肝硬变呈高峰延迟型,肝原性糖尿病呈高反应型,普通糖尿病呈低反应型,它们之间有极显著性差异,结论:高糖化血红蛋白血症与血管并发症的发生有一定关系。高胰高血糖素血症是糖尿病原发的、始动的发病因素。利用胰岛素和C肽释放试验,对慢性肝炎肝硬变的糖代谢紊乱、肝原性糖尿病、胰岛素依赖型糖尿病、非胰岛素依赖型糖尿病可进行鉴别诊断,有助于临床药物的应用。

血浆代用品的血红蛋白释放研究

目的:应用血红蛋白释放试验研究血浆代用品对红细胞是否产生影响。方法:将红细胞悬液分为三组,分别加入等体积生理盐水(normal saline,NS)、羟乙基淀粉(hydroxyethyl starch,HES)和右旋糖酐,保存2 h。利用血红蛋白释放试验(hemoglobin releasing test,HRT)比较血红蛋白(hemoglobin,Hb)释放差异,并测定相对溶解度。结果:HES组HRT电泳图谱呈现拖尾,右旋糖酐组的Hb释放量与生理盐水组比较,没有明显改变,三组的红细胞相对溶解度没有显著变化。结论:血浆代用品没有减弱Hb再释放,也没有降低红细胞破膜率。

人红细胞内血红蛋白与硫氧还蛋白过氧化物酶2的相互作用

目的研究人红细胞内硫氧还蛋白过氧化物酶2(Prx2)与血红蛋白(Hb)的相互作用。方法首先利用红细胞Hb再释放试验分离红细胞和溶血液电泳释放的4个区带,即Hb A、Hb A2、Hb A与Hb A2之间(Hb A-A2)及再释放Hb,将这些区带分别切下,通过反复冻融获得各区带所含蛋白;用葡聚糖G-25浓缩后再利用SDS-PAGE分离各区带所含蛋白组分,并用抗-Prx2做免疫印迹分析;最后用微量热泳动试验(MST)分别检测Prx2蛋白与Hb A和Hb A2之间的结合常数。结果红细胞电泳释放的区带Hb A、Hb A2、Hb A-A2及再释放Hb中均有Prx2;而溶血液电泳释放的Hb区带中,除Hb A2外其余各Hb区带中均有Prx2。MST检测显示,Prx2蛋白与Hb A的结合常数(Kd值)为(14±1.08)μmol/L,而与Hb A2之间的Kd值未被检测到。结论 Prx2与Hb A之间存在相互作用,但与Hb A2之间可能没有相互作用。

遗传性球形红细胞增多症患者红细胞内快泳血红蛋白缺失

目的:利用我室创建的血红蛋白释放试验,研究遗传性球形红细胞增多症患者红细胞释放血红蛋白情况。方法:采用一系列血红蛋白释放试验:单向释放电泳、双向释放电泳、全血多组分电泳和等低渗全程释放电泳(室温、37℃),比较研究患者与正常人红细胞的差异。结果:患者红细胞经单向电泳释放出的血红蛋白快泳部分缺失或明显减少。双向电泳结果,患者红细胞除快泳血红蛋白减少或缺失外,还可见红细胞及全血Hb A2沿对角线分布,而且全血出现高铁血红素白蛋白。全血多组分实验中可见,患者红细胞及全血均无再释放。等低渗全程电泳显示,患者红细胞及全血的再释放都明显减弱或消失。结论:从电泳释放角度证明患者的红细胞明显异常,发现患者红细胞内快泳血红蛋白明显减少或缺失。