miR-363下调HepG2细胞Mcl-1蛋白的表达并诱导其凋亡

目的:探讨微小RNA-363(microRNA-363,miR-363)的作用靶点及其对Hep G2细胞的抑制作用。方法:通过生物信息学分析预测Mcl-1基因是否受microRNA调控。实时荧光定量PCR检测正常肝细胞系LO2及肝癌细胞系Hep G2、Huh7、PLC的miR-363和Mcl-1的表达水平。将miR-363转染人Hep G2细胞,检测miR-363对Mcl-1表达水平的影响。MTT法检测Hep G2细胞在转染miR-363后的相对细胞活力,Annexin V/PI染色法检测miR-363转染对Hep G2细胞凋亡的影响。结果:Mcl-1 mRNA 3’-非翻译区(3’-UTR)存在miR-363的假定结合位点,在肝癌细胞中转染miR-363后Mcl-1的表达下降。转染miR-363可抑制Hep G2细胞的活力并诱导其发生凋亡。结论:miR-363过表达可显著抑制Hep G2细胞的活力并诱导其发生凋亡,其机制可能与miR-363能下调Hep G2细胞Mcl-1蛋白的表达有关。

季德胜蛇药含药血清对人肝癌细胞Hep-G2增殖和凋亡的影响

目的:探讨季德胜蛇药含药血清对人肝癌细胞Hep-G2增殖和凋亡的影响。方法:采用Hep-G2作为细胞模型。以季德胜蛇药给中国大耳白兔灌胃制备含药血清,以不同浓度的含药兔血清培养Hep-G2,并同时设相应浓度的正常兔血清对照组。应用CCK-8(Cell counting kit-8)法检测Hep-G2增殖状况,应用膜联蛋白(Annexin V)/碘化丙啶(PI)双标记流式细胞术检测Hep-G2的凋亡情况。结果:12.5%和15%的含药血清作用于细胞12小时和24小时后,对Hep-G2的增殖均有抑制作用(P<0.05),10%和12.5%的药物血清组作用于Hep-G2细胞12小时后,细胞凋亡率均明显高于相应的正常对照组(P<0.01),12.5%含药血清组的凋亡率明显高于10%的含药血清组(P<0.01)。结论:季德胜蛇药血清可抑制Hep-G2细胞增殖,诱导其凋亡。

草苁蓉多糖对过氧化氢损伤HepG2细胞NF-κB表达的影响

目的探讨草苁蓉多糖(BRPS)对过氧化氢(H_2O_2)损伤的Hep G2细胞核转录因子(NF)-κB表达的影响。方法以Hep G2细胞为研究对象,通过H_2O_2诱导细胞氧化应激损伤模型,采用蛋白印迹法检测NF-κB、诱导型一氧化氮合酶(i NOS)、血红素氧合酶(HO)-1、环氧化酶(COX)-2以及核因子-E2相关因子2(Nrf2)的蛋白表达。结果 H_2O_2损伤Hep G2细胞后,NF-κB p65和Nrf2蛋白水平升高,i NOS、HO-1、COX-2蛋白水平升高。BRPS处理可降低Hep G2细胞NF-κB p65水平,对Nrf2蛋白水平无显著影响。BRPS同时降低i NOS、HO-1蛋白水平,但对COX-2蛋白水平无影响。结论 BRPS降低H_2O_2损伤的Hep G2细胞i NOS、HO-1蛋白水平,这可能与降低NF-κB活化有关。

淫羊藿素对人肝癌Hep-G2细胞增殖、凋亡的影响及作用机制

目的探讨淫羊藿素对人肝癌Hep-G2细胞增殖、凋亡的影响及作用机制。方法体外培养人肝癌Hep-G2细胞;采用MTT比色法检测淫羊藿素对人肝癌Hep-G2细胞增殖的影响;将Hep-G2细胞分为:空白对照(Control)组、低剂量(2.5μM/L)组、中剂量(5μM/L)组和高剂量(10μM/L)组;蛋白质印记检测增殖、凋亡相关蛋白Ki-67、Bcl-2、Bax、caspase-3蛋白表达情况;克隆形成实验检测各组肝癌细胞增殖情况;流式细胞仪检测Hep-G2细胞凋亡情况。结果MTT结果显示淫羊藿素对肝癌Hep-G2细胞的IC_(50)为5.38μM/L;与空白对照组相比,低剂量组肝癌Hep-G2细胞Ki-67蛋白相对表达量、细胞克隆形成率、Bcl-2蛋白相对表达水平显著降低,细胞凋亡率、Bax蛋白相对表达量、Caspase-3蛋白相对表达量显著升高(均P<0.05);与低剂量组相比,中剂量组肝癌Hep-G2细胞Ki-67蛋白相对表达量、细胞克隆形成率、Bcl-2蛋白相对表达水平显著降低,细胞凋亡率、Bax蛋白相对表达量、Caspase-3蛋白相对表达量显著升高(均P<0.05);与中剂量组相比,高剂量组肝癌Hep-G2细胞Ki-67蛋白相对表达量、细胞克隆形成率、Bcl-2蛋白相对表达水平显著降低,细胞凋亡率、Bax蛋白相对表达量、Caspase-3蛋白相对表达量显著升高(均P<0.05)。结论淫羊藿素可以抑制肝癌Hep-G2细胞增殖并促进其凋亡,其作用机制可能与下调Bcl-2蛋白和上调Bax蛋白的表达以及增强caspase-3的活性相关。

富硒青钱柳多糖对α-葡萄糖苷酶及HepG2细胞葡萄糖消耗的影响

以α-葡萄糖苷酶和Hep G2细胞作为体外受体模型,研究富硒青钱柳多糖(Se-CPP)体外降血糖活性,并与青钱柳多糖(CPP)、CPP+硒酵母、CPP+亚硒酸钠复配物比较。结果表明,Se-CPP对α-葡萄糖苷酶活性具有良好的抑制效果且呈现明显的剂量依赖性,其半抑制浓度(IC50)为0.054 mg/m L,低于阿卡波糖、CPP、CPP+硒酵母、CPP+亚硒酸钠复配物。适宜浓度的Se-CPP可促进胰岛素抵抗状态Hep G2细胞对葡萄糖的消耗,效果显著优于CPP、CPP+硒酵母、CPP+亚硒酸钠复配物(p<0.05)。

人参皂苷CK诱导人肝癌HepG-2细胞凋亡的研究

目的探讨人参皂苷CK对人肝癌HepG-2细胞凋亡的作用及机制。方法采用MTT法测定不同浓度(30,60,90μmol/L)人参皂苷CK对人肝癌HepG-2细胞的增殖抑制作用;通过HE染色、AO/EB染色观察人参皂苷CK诱导人肝癌HepG-2细胞凋亡的形态学变化;WesternBlotting检测凋亡相关蛋白P53、Bax和Bcl-2的表达情况。结果人参皂苷CK可明显抑制人肝癌HepG-2细胞的增殖,且呈剂量依赖性和时间依赖性。随着人参皂苷CK给药浓度的增加,出现典型凋亡形态特征的细胞逐渐增多,抗凋亡蛋白Bcl-2和P53表达量逐渐下降,而促凋亡蛋白Bax的表达逐渐升高,Bcl-2/Bax比例明显降低。结论人参皂苷CK可诱导人肝癌HepG-2细胞凋亡,其作用机制可能与下调P53蛋白表达和降低Bcl-2/Bax比例有关。

NS-398对肝癌细胞HepG2增殖和凋亡的影响

目的 :探讨选择性环氧合酶II(COX - 2 )抑制剂NS - 398对人肝癌细胞HepG2增殖和凋亡的影响。方法 :应用MTT法研究不同浓度NS - 398对HepG2细胞增殖的影响 ,DNA梯状电泳 (DNAladder)检测凋亡的发生 ,流式细胞仪检测细胞周期的改变及凋亡百分率的变化 ,竞争性RT -PCR检测环氧合酶IICOX - 2mRNA及抑凋亡基因bcl- 2mRNA表达的改变。结果 :NS - 398呈剂量依赖性抑制HepG2细胞增殖 ,并诱导其凋亡 ,细胞周期分析表明随着浓度增大S期细胞明显减少 ,有G0 /G1期细胞累积现象 ,并伴有Bcl- 2mRNA表达的下调 ,而对COX - 2mRNA表达改变无明显影响 ,且COX - 2表达改变与NS - 398引起的HepG2细胞的增殖和凋亡均无相关性 (相关系数分别为 :r=0 0 5 6 ,P >0 0 5和r=0 119,P >0 0 5 )。结论 :NS - 398能明显抑制HepG2细胞增殖并诱导其凋亡 ,与细胞G0 /G1期阻滞以及bcl- 2基因表达下调有关 ,而非依赖于抑制COX -

135Hz极低频电磁场对Hep G-2细胞生长及凋亡的影响

目的观察135Hz极低频电磁场(ELF)照射对HepG-2细胞生长及凋亡的影响.方法用MTT比色法、流式细胞仪,检测经135Hz ELF照射6,12,24h后相应时间点细胞的活性、细胞周期、凋亡细胞的比例,并用扫描电镜以及透射电镜观察细胞超微结构变化.结果ELF磁场暴露后,与相应对照组相比其A值均下降(P<0.01),细胞活性随照射时间延长而下降(P<0.01);使Hep G-2细胞G1期阻滞,凋亡率随照射时间延长逐渐增高.扫描电镜以及透射电镜观察到实验组细胞几种特殊的形态学特征凋亡细胞收缩,出泡,质膜及细胞器保持完整.染色质浓缩于核膜,最后,细胞解离成凋亡小体.结论135Hz的ELF照射抑制Hep G-2细胞生长并促进其凋亡.

白细胞介素-6对HepG2细胞铁调素表达的影响

目的研究白细胞介素-6(IL-6)对Hep G2细胞铁调素(Hepcidin)表达的影响及其可能的分子机制。方法应用不同浓度的IL-6诱导Hep G2细胞12 h,按IL-6的浓度分为对照组、实验A组、实验B组。对照组:仅加入1 m L细胞培养液。实验A组:加入0.85 m L细胞培养液及0.15 m L 1 g/m L IL-6培养液,IL-6总浓度为50μg/m L。实验B组:加入0.7 m L细胞培养液及0.3 m L IL-6培养液,IL-6总浓度为100μg/m L。逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测3组细胞Hepcidin mRNA表达,Western blot检测信号转导子与转录激活3(STAT3)及磷酸化STAT3(p STAT3)蛋白的表达。比较3组Hep G2细胞Hepcidin mRNA、STAT3及p STAT3表达的差异。结果与对照组相比,实验A组和实验B组Hepcidin mRNA、p STAT3表达均明显增加(P<0.05),实验B组Hepcidin mRNA、p STAT3表达比实验A组更高(P<0.05)。3组的STAT3蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论 IL-6显著上调Hep G2细胞Hepcidin mRNA表达,且Hep G2细胞Hepcidin mRNA表达水平随IL-6浓度上升伴随性增高。其机制可能与IL-6刺激肝细胞内信号分子p STAT3升高有关。

5-氨基乙酰丙酸介导声动力诱导Hep G2细胞体外凋亡的机制研究

目的研究5-氨基乙酰丙酸(5-ALA)介导的声动力疗法(SDT)对人肝癌Hep G2细胞的促凋亡作用及机制。方法取对数期生长Hep G2细胞,通过CCK-8法检测5-ALA和超声干预对细胞存活率的影响,优化出声动力治疗最佳5-ALA药物浓度及超声辐照强度。取对照组(未处理细胞)、5-ALA组、超声组和SDT组Hep G2细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡率、坏死率及线粒体膜电位(MMP)的改变,荧光探针DCFH-DA检测活性氧类(ROS)的产生,Western blotting检测凋亡蛋白caspase-3、caspase-9和细胞色素C(Cyt-C)的表达,透射电镜观察细胞超微结构的改变。结果与对照组、5-ALA组和超声组比较,SDT组Hep G2细胞存活率较低,细胞凋亡率升高,ROS的产生增加,MMP降低,caspase-3、caspase-9和Cyt-C高表达。透射电镜观察发现SDT组Hep G2细胞表面微绒毛减少、内质网和线粒体肿胀、凋亡小体产生。结论 5-ALA介导的SDT诱导Hep G2细胞凋亡以内源性线粒体凋亡为主要途径。

HBx基因对HepG2.2.15细胞MICA-A5.1表达及侵袭、迁移的影响

目的探究HBx基因对HepG2.2.15细胞侵袭、迁移及主要组织相容性复合体(MHC)Ⅰ类链相关基因A(MICA)-A5.1表达的影响。方法体外培养HepG2.2.15细胞系(插入HBV全基因组并持续表达的HepG2细胞),随机分为对照组、HBx过表达质粒组、HBx空载质粒组、HBx siRNA组、HBx siRNA阴性对照组,分别转染质粒及siRNA后,以CKK-8法分别检测24 h、48 h后细胞增殖情况,筛选合适药物作用时间;以Transwell侵袭实验和细胞划痕实验检测各组细胞侵袭迁移能力;以免疫印记法检测HBx、MICA-A5.1蛋白和上皮间质转化标志蛋白E-cadherin、Vimentin的表达;以酶联免疫吸附法检测各组细胞培养基中sMICA水平。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用SNK q检验。结果与对照组比较,24 h后,HBx过表达质粒组细胞活力升高,HBx siRNA组细胞活力降低,差异均有统计学意义(q值分别为8.268、4.365,P值分别为<0.001、0.036);48 h后,HBx过表达质粒组细胞活力升高,HBx siRNA组细胞活力降低,差异均有统计学意义(q值分别为12.680、7.523,P值均<0.001)。与对照组比较,HBx过表达质粒组细胞HBx、MICA及Vimentin蛋白表达、细胞培养基中sMICA水平、迁移细胞数目、侵出Transwell小室的细胞数目均升高,E-cadherin表达降低(q值分别为9.427、6.697、10.500、5.042、22.740、15.720、5.258,P值均<0.05);HBx siRNA组细胞HBx、MICA及Vimentin蛋白表达、细胞培养基中sMICA水平、迁移细胞数目、侵出Transwell小室的细胞数目均降低,E-cadherin表达升高(q值分别为8.133、8.828、7.616、7.673、5.391、7.694、6.226,P值均<0.05)。结论HBx基因调控HepG2.2.15细胞MICA-A5.1表达及侵袭、迁移,上调该基因可促进MICA-A5.1表达,增强HepG2.2.15细胞侵袭转移能力。

TLR9激动剂CpG-ODN对HepG2肝癌细胞增殖及侵袭的影响

目的探讨Toll样受体9(TLR9)激动剂未甲基化的胞嘧啶-鸟嘌呤核苷酸序列(Cp G-ODN)对Hep G2肝癌细胞增殖及侵袭的影响。方法应用不同浓度的Cp G-ODN作用于肝癌细胞株Hep G2不同时间,采用实时荧光定量PCR法检测Hep G2中TLR9mRNA表达情况,MTT法检测Hep G2细胞的增殖变化,Transwell法检测其侵袭能力变化。结果 Cp G-ODN组(4、16μg·m L-1)与阴性对照组比较可增加Hep G2细胞中TLR9mRNA的表达;Cp G-ODN(1、4、16μg·m L-1)激动TLR9后可促进Hep G2细胞增殖,且以48h最为显著,并存在剂量依赖关系;Cp G-ODN(4、16μg·m L-1)激动TLR9可增强Hep G2细胞的侵袭能力(P均<0.05)。结论 TLR9表达上调可促进肝癌细胞增殖和侵袭。

汉黄芩素与氟尿嘧啶联用抗人肝癌细胞Hep-G2作用的拮抗效应研究

目的探讨汉黄芩素(wogonin)联合氟尿嘧啶(5-FU)对人肝癌细胞Hep-G2生长活性的影响。方法实验分汉黄芩素组、5-FU组、汉黄芩素+5-FU组和空白对照组,采用MTT法观察药物对肿瘤细胞体外生长活性的影响,采用流式细胞仪分析肿瘤细胞凋亡率的变化。结果 MTT实验结果显示汉黄芩素(5、10、20、40μmol/L)作用24、48h后对肿瘤细胞具有一定的增殖抑制作用(P<0.05);5-FU(5、10、20、40 mg/L)作用24、48h后对肿瘤细胞增殖有明显的抑制作用(P<0.05);与单用组对肿瘤细胞的抑制作用相比,汉黄芩素联合5-FU组的抗肿瘤作用呈相互拮抗作用(P<0.05);汉黄芩素联合5-FU给药48h后,联合指数CI值呈现剂量依赖性,CI值随汉黄芩素浓度的加大而增大,说明随汉黄芩素浓度的加大,其拮抗5-FU抗肿瘤效应的作用也越来越明显(P<0.05)。结论汉黄芩素具有一定的抗肿瘤作用,但可拮抗5-FU的抗肿瘤作用,具体机制有待进一步研究。

牛膝多糖对HepG-2荷瘤小鼠肿瘤微环境T细胞亚群、VEGF和TGF-β_1的影响

目的研究牛膝多糖(ABPS)对Hep G-2荷瘤小鼠肿瘤微环境T细胞亚群、血管内皮生长因子(VEGF)和肿瘤生长转化因子-β1(TGF-β1)的影响。方法用ABPS给Hep G-2荷瘤小鼠灌胃,连续2周后,测定肿瘤重量,并计算抑瘤率,采用流式细胞术检查肿瘤浸润T淋巴细胞亚群的数量,同时采用免疫组化法测肿瘤微环境中VEGF和TGF-β1的表达变化。结果 ABPS可明显抑制肿瘤细胞的生长,提高CD4+、CD8+T淋巴细胞的百分率,降低VEGF和TGF-β1的阳性细胞表达率。结论 ABPS有一定抗肿瘤活性作用。

茶多酚对Hep-G2细胞活性及形态的影响

大量研究表明,长期饮茶尤其绿茶者,可大大降低各种癌变的发病率,而且对多种体内外肿瘤具有直接杀伤作用.作者通过采用不同浓度的茶多酚作用于体外培养的肝癌细胞株Hep-G2细胞,初步探讨茶多酚对Hep-G2细胞的凋亡作用.采用MTT法(噻唑蓝比色法)和AO-PI(吖啶橙-碘化丙啶)双重荧光染色法研究了茶多酚诱导Hep-G2细胞株的凋亡作用.MTT法研究结果表明,在一定的浓度范围内,茶多酚对Hep-G2细胞有明显的抑制作用,且存在良好的剂量效应关系,随着茶多酚浓度的升高,其对Hep-G2细胞的抑制率也升高.Hep-G2细胞经茶多酚作用后,细胞形态发生明显的变化,可见凋亡小体,荧光强度增强,细胞呈现凋亡现象.茶多酚在体外对Hep-G2细胞的增殖具有抑制作用,诱导其发生凋亡.研究结果为茶多酚的进一步开发应用奠定理论基础.

17-丙烯胺-17-去甲氧格尔德霉素对人肝癌HepG2细胞凋亡的影响

目的观察17-丙烯胺-17-去甲氧格尔德霉素(17-AAG)对肝癌Hep G2细胞增凋亡的影响,并探讨其机制。方法采用吖啶橙/溴乙锭(AO/EB)荧光染色,通过荧光显微镜观察Hep G2细胞凋亡情况;采用流式细胞仪分析细胞凋亡率的变化;逆转录聚合酶链反应检测17-AAG处理肝癌Hep G2细胞前后bax和bcl-2的mRNA蛋白表达。结果 AO/EB荧光染色结果显示对照组呈均匀绿色荧光,实验组随着药物浓度的增加,呈红色荧光凋亡细胞逐渐增多;流式细胞仪结果显示17-AAG促进肝癌Hep G2细胞凋亡;RT-PCR结果显示17-AAG能使bax的mRNA蛋白表达水平升高、bcl-2的mRNA蛋白表达水平下降,其作用呈剂量效应关系。结论 17-AAG具有促进肝癌Hep G2凋亡作用,其机制可能与其上调bax、下调bcl-2蛋白表达有关。

原多甲藻酸(AZA1)对Hep-G2细胞毒理作用的研究

为了研究原多甲藻酸(AZA1)的毒理作用,试验以Hep-G2细胞为作用对象,采用CCK-8细胞增殖-毒性检测试剂盒测定吸光度值,对不同浓度原多甲藻酸的毒理作用进行测定。结果表明:当原多甲藻酸浓度达到40 nmol/L时,对细胞毒理作用显现;当浓度达到60 nmol/L时,对细胞毒理作用显著。说明双壳贝类中一定量的原多甲藻酸会对人类健康产生影响。

分子伴侣4-苯基丁酸对HepG2脂肪变模型中细胞损伤的影响

目的观察人肝癌Hep G2细胞脂肪变模型中内质网应激发生的情况,探讨分子伴侣4-苯基丁酸(4-PBA)对该脂肪变模型中内质网应激、氧化应激和凋亡的影响。方法使用0.5、1.0 mmol/L的混合脂肪酸分别干预Hep G2细胞,在不同时间点采用Real-time PCR方法检测内质网应激相关蛋白CHOP和葡萄糖调节蛋白78(GRP78)mRNA的表达水平。以2 mmol/L的4-PBA干预脂肪变性Hep G2细胞,在不同时间点检测CHOP和GRP78 mRNA的表达,氧化应激指标丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)和还原型谷胱甘肽(GSH)水平,以及凋亡相关蛋白Caspase-3活性的变化。结果与对照组比较,混合脂肪酸干预组Hep G2细胞内CHOP、GRP78 mRNA的表达水平显著升高(P<0.05)。4-PBA干预可使脂肪变性Hep G2细胞内CHOP和GRP78 mRNA的表达水平下调(P<0.05),MDA含量明显下降,SOD和GSH水平显著升高(P<0.05),Caspase-3活性减低(P<0.05)。结论 Hep G2细胞脂肪变性时发生明显的内质网应激。分子伴侣4-PBA能减轻氧化应激和内质网应激,下调脂肪变性Hep G2细胞Caspase-3活性,减轻细胞损伤。

7-甲氧基-1-四氢萘酮对人肝癌HepG2增殖、凋亡、迁移的影响及其免疫学作用

目的探讨化合物7-甲氧基-1-四氢萘酮(7-methoxy-1-tetralone)对体外培养的人肝癌细胞系Hep G2增殖、凋亡、迁移与体内动物水平免疫因子的影响。方法细胞实验分组为空白对照组(未加药组)、不同浓度给药组和分别给予0、40、100、250μmol/L的7-甲氧基-1-四氢萘酮处理肝癌Hep G2细胞,通过MTT实验、流式细胞术、划痕实验检测Hep G2细胞增殖、凋亡、迁移情况;动物实验分组为生理盐水组、给药组、阳性对照组和联合用药组。小鼠灌胃处理后检测肝、脾重比;ELISA实验检测动物血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)因子的变化。结果随着加药浓度的升高,Hep G2细胞的增殖抑制显示出明显的剂量-效应(P<0.05),与空白对照组相比,细胞凋亡率增高,迁移抑制现象较明显(P<0.05),动物免疫器官肝、脾重比显示出上升的趋势(P<0.05),免疫因子TNF-α水平有所升高(P>0.05)。结论 7-甲氧基-1-四氢萘酮能够抑制体外肝癌细胞的增殖和迁移运动性,同时具有提高机体免疫器官应答性和免疫因子调节作用。

H_2O_2对人肝癌细胞Hep-G2凋亡的影响

探讨不同浓度H2O2对人肝癌细胞株Hep-G2细胞凋亡的影响.使用不同浓度(0.01、0.05、0.10、0.20、0.50mmol/L)的H2O2作用于Hep-G2细胞12h,通过丫啶橙-碘化丙啶(AO/PI)双重荧光染色法对Hep-G2细胞的形态变化进行观察;再进行DNA的提取和琼脂糖凝胶电泳观察DNA断裂情况.结果表明:不同浓度的H2O2处理后在荧光显微镜下可以区分正常对照细胞(0mmol/L)、染色质凝聚的早期凋亡细胞(0.01、0.05mmol/L)、细胞质皱缩和细胞核解体的晚期凋亡细胞(0.10、0.20mmol/L)和降解细胞(0.50mmol/L),在一定时间内随H2O2浓度的增加而增大,呈现浓度依赖性.DNA电泳结果显示发生凋亡的细胞基因组DNA形成弥散条带,从而表现出体外细胞凋亡的特征.因此,H2O2可以诱导Hep-G2细胞凋亡.