蒽醌对HBV稳定产毒细胞株HepAD38HBV DNA复制的抑制作用

目的对掌叶大黄乙醇提取物中天然成份-蒽醌类化合物的抑制乙肝病毒(HBV)的活性进行检测。方法制备掌叶大黄乙醇提取物(RPE)并从中分离提取有效成份,荧光定量PCR法和ELISA法检测PRE及其各成份对Hep-AD38细胞中HBV表达及复制的作用;同时用MTT法检测细胞毒性。结果从掌叶大黄乙醇提取物中分离得到的大黄酚-8-O-β-D-葡萄糖甙对HBV DNA复制以及抗原表达均有明显的抑制活性。同时MTT法检测显示大黄酚-8-O-β-D-葡萄糖甙没有明显毒副作用。结论大黄酚-8-O-β-D-葡萄糖甙可以有效抑制HBV DNA复制及HBsAg表达,对其进一步的研究将有助于在此化合物基础上开发出新的抗HBV药物。

灵猫方对HepG2.2.15和HepAD38细胞La蛋白表达的影响

目的研究灵猫方对HepG2.2.15和HepAD38细胞cccDNA、pgRNA、sRNA和La-mRNA抑制作用,探讨灵猫方抗乙肝病毒(HBV)的作用机制。方法制备灵猫方水提物,500 mg/L和1 000 mg/L灵猫方水提物分别干预HepG2.2.15和HepAD38细胞,以0.9%Na Cl溶液作为空白对照组,6 d后收集培养液上清,ELISA法检测HBsAg和HBeAg水平;收集细胞提取总RNA,RT-PCR法检测细胞内cccDNA、pgRNA、sRNA和LamRNA表达水平。结果与空白对照组比较,灵猫方组的HepG2.2.15和HepAD38细胞的HBsAg和HBeAg分泌水平明显降低,细胞内cccDNA、pgRNA、sRNA和LamRNA表达水平明显降低(P<0.01)。结论灵猫方可能通过抑制HepG2.2.15和HepAD38细胞内La蛋白的表达而促进pgRNA、sRNA和cccDNA的降解,从而抑制HBV的复制。

DC-CIK与CIK体外培养对包含HBV基因的HepAD38细胞的杀伤效果研究

目的:研究乙型肝炎病毒抗原致敏的树突状细胞(DC)和CIK细胞共同培养后对Hep AD38细胞(含整合HBV基因组)的杀伤作用。方法:从乙肝患者外周血中提取外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC),平均分为两组,研究组培养DC,培养DC第5天加入乙肝抗原并收获DC,然后加入CIK细胞,培养出DC-CIK细胞;对照组单独培养CIK细胞。两组在培养15 d后分别收获DC-CIK细胞与CIK细胞,同时作为效应细胞,把含有乙肝病毒的Hep AD38细胞作为靶细胞,分别在5∶1、10∶1的效靶比时进行杀伤试验,使用LDH释放法测定杀伤活性,并用荧光扩增法检测杀伤试验后培养基内HBV-DNA水平。结果:研究组的DC-CIK细胞的5∶1效靶比时的平均杀伤率为(54.4±6.3)%、10∶1效靶比时的平均杀伤率为(71.5±4.5)%,均明显高于对照组CIK细胞的(42.4±3.0)%、(59.4±4.5)%,差异均有统计学意义(P<0.05)。研究组的DC-CIK细胞5∶1效靶比时的培养基内的HBV-DNA平均为(1.20±0.30)×106/m L、10:1效靶比时的培养基内的HBV-DNA平均为(1.64±0.60)×107/m L,均明显高于对照组CIK细胞的(0.90±0.23)×106/m L、(1.28±0.23)×107/m L,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:CIK细胞与DC-CIK细胞对Hep AD38细胞均具有杀伤效果,而且随着效靶比的升高,杀伤效果增强。同时,乙肝抗原致敏的DC诱导出的特异性CIK细胞(DC-CIK细胞),能够有效提高CIK细胞对乙肝病毒感染的Hep AD38细胞的杀伤作用,其杀伤作用可能与DC被乙肝抗原致敏后诱导出特异性CIK,增强各自疗效有关。

全蝎和蜈蚣的多肽粗提物对肝癌细胞中HBV的抑制作用

目的:研究全蝎尾部多肽粗提物(peptide extract from scorpion tail,PEST)与蜈蚣头部多肽粗提物(peptide extract from centipede head,PECH)对肝癌细胞乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)合成的影响及其可能机制。方法:超滤法提取PEST与PECH。选取肝癌HepAD38和HepG2细胞,将其分组:对照组,用含10%胎牛血清的培养基培养;PEST组,不同浓度PEST(0.125、0.250、0.500和1.000 mg/mL)处理;PECH组,不同浓度PECH(0.125、0.250、0.500和1.000 mg/mL)处理;阳性对照组,拉米夫定或恩替卡韦或四环素处理。MTT法检测细胞活力,qRT-PCR检测HepAD38细胞上清液HBV DNA含量。另取HepAD38细胞,分为PEST组(1 mg/mL PEST处理)、PECH组(1 mg/mL PECH处理)、对照组、阳性对照组和阴性对照组;ELISA法检测细胞上清液中HBsAg和HBeAg含量,qRT-PCR检测HBV X、S、preC、P mRNA表达量,蛋白印迹法检测HBV核心蛋白(HBV core protein,HBc)表达。结果:PEST或PECH处理的肝癌细胞HepG2和HepAD38细胞活力均在70%以上;与对照组相比,PEST组(0.250、0.500和1.000 mg/mL)和PECH组(0.125、0.500和1.000 mg/mL)HBV DNA拷贝数明显降低(P均<0.05);与对照组相比,PEST组和PECH组HBsAg和HBeAg含量明显降低(P均<0.05),HBV P mRNA相对表达明显降低(P均<0.05),PEST组HBc表达几乎无差异,而PECH组HBc表达减少。结论:PEST和PECH在HepAD38细胞株中表现出抗HBV作用,可能与其抑制HBV P mRNA合成有关。

顺铂通过CREB1诱导乙肝病毒再激活的实验研究

目的:探索顺铂诱导乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)再激活的机制。方法:将稳定表达HBV的肝癌细胞系HepAD38分为2组,即磷酸盐缓冲液(phosphate buffered saline,PBS)对照组及顺铂(Cisplatin)处理组,分别检测cAMP应答元件结合蛋白质-1(cAMP responsive element binding protein 1,CREB1)、乙肝病毒蛋白表达(HBsAg、HBcAg)及病毒复制水平(HBV DNA、HBV mRNA);同样在成功构建稳定敲低CREB1(shCREB1)的HepAD38细胞中,同正常表达HBV的肝癌细胞系HepAD38进行对照,检测经顺铂处理后的HBV复制水平(HBV DNA、HBV m RNA)及蛋白表达水平(HBsAg、HBcAg)。结果:稳定表达HBV的肝癌细胞系HepAD38中,Western blot检测显示,与PBS对照组相比,Cisplatin处理组中CREB1相对表达量为1.355±0.049(P=0.010);HBsAg蛋白相对表达量为1.679±0.060(P=0.003);HBcAg蛋白相对表达量为1.488±0.047(P=0.005)。qRTPCR结果显示经顺铂处理后,HBV DNA绝对表达量为249.600±54.400(P=0.006);HBV m RNA相对表达量为3.084±0.256(P=0.000);以上结果表明在HepAD38细胞中乙肝病毒蛋白表达水平以及病毒复制水平较PBS对照组明显上调,均具有统计学差异;与此同时,选择转入shCREB1质粒的HepAD38细胞,即shCREB1细胞,以及转入对照质粒且能正常表达CREB1的HepAD38细胞,即shControl细胞,2种细胞组内均设置PBS对照组和Cisplatin处理组,分别检测乙肝病毒蛋白表达以及病毒复制水平。qRT-PCR结果显示,HBV DNA在shControl细胞的Cisplatin处理组相对表达量为518.300±3.458;而在shCREB1细胞的Cisplatin处理组相对表达量为265.300±3.125 (P=0.000);HBV m RNA在shControl细胞的Cisplatin处理组相对表达量为2.713±0.318;而在shCREB1细胞的Cisplatin处理组相对表达量为1.263±0.056(P=0.000)。Western blot分析显示shControl细胞的Cisplatin处理组中的HBsAg、HBcAg相对表达量分别为1.254±0.001、2.238±0.041;而在shCREB1细胞的Cisplatin处理组中的HBsAg、HBcAg相对表达量分别为1.121±0.036(P=0.021)、1.681±0.015(P=0.000)。结论:顺铂可以通过CREB1促进乙肝病毒复制水平以及蛋白表达水平上调。

Inhibition of Hepatitis B Virus Replication by Rheum palmatum L. Ethanol Extract in a Stable HBV-producing Cell Line

肝炎 B 病毒(HBV ) 感染是在世界上的一个严重健康问题。然而，仍然为 HBV 感染没有令人满意的治疗学的策略。到为有更高的功效和更少的副作用的新 anti-HBV 代理人的搜索，繁体中文药感冒 palmatum L 的禁止的活动。对 HBV 复制的乙醇摘录(RPE ) 在这研究被调查。量的即时聚合酶链反应(PCR ) 被采用在稳定的生产 HBV 房间线 HepAD38 对 HBV-DNA 复制分析 RPE 的禁止的活动；HBV 表面抗原(HBsAg ) 和 e 抗原(HBeAg ) 的表示层次被酶也决定在 RPE 处理以后的连接 immunosorbent 试金(ELISA ) 。RPE 能 dose-dependently 禁止 HBV-DNA 和 HBsAg 的生产。50% 抑制(IC50 ) 的集中在 209.63 点被计算， 252.53 渭 g /mL， respectivel y。然而，它对 HBeAg 表示的禁止的活动甚至在高集中是细微的。RPE 在 HepAD38 房间上有弱细胞毒素的效果(CC50 = 1 640 渭 g /mL ) 并且选择索引(SI ) 在 7.82 点被计算。与二 anthraquinone 衍生物 emodin 和 rhein 相比， RPE 显示出 anti-HBV 和更弱的 cytotoxicity 的更高的能力。那么感冒 palmatum L。可能拥有能有效地禁止 HBV-DNA 复制和 HBsAg 表示的另外的功能的代理人。他们改进功效并且减少的结构的活跃代理人，鉴定和修正的进一步的纯化 cytotoxicity 被要求。关键词肝炎 B 病毒(HBV )- 抗病毒 - 感冒 palmatum L.ethanol 摘录(RPE )- HepAD38 房间 CLC 数字 R373 同等地相应的作者。

Dopamine Inhibits the Expression of Hepatitis B Virus Surface and e Antigens by Activating the JAK/STAT Pathway and Upregulating Interferon-stimulated Gene 15 Expression

Background and Aims:Hepatitis B virus(HBV)infection is a major risk factor for cirrhosis and liver cancer,and its treatment continues to be difficult.We previously demonstrated that a dopamine analog inhibited the packaging of pregenomic RNA into capsids.The present study aimed to determine the effect of dopamine on the expressions of hepatitis B virus surface and e antigens(HBsAg and HBeAg,respectively)and to elucidate the underlying mechanism.Methods:We used dopamine-treated HBVinfected HepG2.2.15 and NTCP-G2 cells to monitor HBsAg and HBeAg expression levels.We analyzed interferon-stimulated gene 15(ISG15)expression in dopamine-treated cells.We knocked down ISG15 and then monitored HBsAg and HBeAg expression levels.We analyzed the expression of Janus kinase(JAK)/signal transducer and activator of transcription(STAT)pathway factors in dopamine-treated cells.We used dopamine hydrochloride-treated adeno-associated virus/HBV-infected mouse model to evaluate HBV DNA,HBsAg,and HBeAg expression.HBV virus was collected from HepAD38.7 cell culture medium.Results:Dopamine inhibited HBsAg and HBeAg expression and upregulated ISG15 expression in HepG2.2.15 and HepG2-NTCP cell lines.ISG15 knockdown increased HBsAg and HBeAg expression in HepG2.2.15 cells.Dopamine-treated cells activated the JAK/STAT pathway,which upregulated ISG15 expression.In the adeno-associated virus-HBV murine infection model,dopamine downregulated HBsAg and HBeAg expression and activated the JAK-STAT/ISG15 axis.Conclusions:Dopamine inhibits the expression of HBsAg and HBeAg by activating the JAK/STAT pathway and upregulating ISG15 expression.

Repurposing of Antazoline Hydrochloride as an Inhibitor of Hepatitis B Virus DNA Secretion

Hepatitis B virus(HBV) belongs to Hepadnaviridae family and mainly infects hepatocytes, which can cause acute or chronic hepatitis. Currently, two types of antiviral drugs are approved for chronic infection clinically: interferons and nucleos(t)ide analogues. However, the clinical cure for chronic infection is still rare, and it is a huge challenge for all researchers to develop high-efficiency, safe, non-tolerant, and low-toxicity anti-HBV drugs. Antazoline hydrochloride is a first-generation antihistamine with anticholinergic properties, and it is commonly used to relieve nasal congestion and in eye drops. Recently, an in vitro high-throughput evaluation system was constructed to screen nearly 800 compounds from the Food and Drug Administration(FDA)-approved Drug Library. We found that arbidol hydrochloride and antazoline hydrochloride can effectively reduce HBV DNA in the extracellular supernatant in a dose-dependent manner, with EC_(50) of4.321 lmol/L and 2.910 lmol/L in HepAD38 cells, respectively. Moreover, the antiviral effects and potential mechanism of action of antazoline hydrochloride were studied in different HBV replication systems. The results indicate that antazoline hydrochloride also has a significant inhibitory effect on HBV DNA in the extracellular supernatant of Huh7 cells,with an EC_(50) of 2.349 lmol/L. These findings provide new ideas for screening and research related to HBV agents.