HepaCAM基因转染对肾癌细胞侵袭活性的影响

目的:研究肝细胞黏附分子(hepatocyte cell adhesion molecule,hepaCAM)基因转染对肾细胞癌(renal cell carcinoma,RCC)细胞株786-0侵袭能力的影响,并探讨其作用机制。方法:将携带hepaCAM基因的重组质粒hepaCAM-pEGFPN2转染786-0细胞后,用G418筛选形成阳性克隆并扩增培养,以转染了pEGFPN2和未转染的786-0细胞作为对照。采用RT-PCR和实时荧光定量PCR法检测hepaCAM和基质金属蛋白酶(matrixmetalloproteinase,MMP)-2和MMP-9 mRNA的表达,明胶酶谱法检测MMP-2和MMP-9的活性变化,Transwell小室法检测786-0细胞的体外侵袭能力。结果:稳定转染hepaCAM基因后,786-0细胞的hepaCAM mRNA表达水平明显上调(P<0.01),而MMP-2和MMP-9 mRNA的表达和酶活性明显受抑(P<0.05),hepaCAM基因的导入显著削弱了RCC细胞的跨膜侵袭能力(P<0.01)。结论:hepaCAM可能通过下调MMP-2和MMP-9的表达以及抑制明胶酶的活性,进而抑制肾癌细胞786-0的侵袭力。

hepaCAM基因缺失突变体对膀胱癌细胞的生物学影响

目的:探讨hepaCAM基因细胞外结构缺失突变体对膀胱癌细胞的生物学影响。方法:采用脂质体法将hepaCAM缺失突变体转染T24细胞;激光共聚焦显微镜检测突变体蛋白细胞定位;Western印迹法检测蛋白的表达;体外黏附、解离实验及伤口愈合、基质胶侵袭实验研究突变体对T24细胞黏附、活动力的影响;MTT法检测对细胞增殖的改变。结果:突变体蛋白在单个细胞中的分布与野生型hepaCAM蛋白相近,定位于细胞核周边区域,但细胞相互连接后,与野生型hepaCAM蛋白定位不同,突变体蛋白呈现非特异性分布。获得稳定表达突变体蛋白的T24细胞,在细胞黏附、活动力方面明显低于表达野生型hepaCAM蛋白组,细胞增殖与表达野生型hepaCAM蛋白组相比明显增强。结论:缺失细胞外区域对hepaCAM蛋白细胞定位有重要影响,对抑制T24细胞增殖、增强细胞黏附及活动力无明显作用。细胞外区域对hepaCAM基因发挥正常作用是必须的。

HepaCAM基因对人膀胱癌细胞增殖的抑制作用研究

目的:研究hepaCAM基因对人膀胱癌T24细胞增殖的影响。方法:运用脂质体转染方法,将pEGFP-N2-hepaCAM质粒转入T24细胞株,经G418筛选获得稳定表达的细胞株;RT-PCR及Westernblot方法检测目的基因和蛋白表达;MTT法及克隆形成实验研究hepaCAM基因对T24细胞体外生长的作用;流式细胞仪检测细胞周期分布;RT-PCR技术测定周期调控蛋白CyclinD1的mRNA表达变化。结果:RT-PCR和Westernblot方法分别检测到hepaCAM的基因表达和蛋白表达,MTT检测转染hepaCAM基因的细胞生长速度较对照组和空载体组明显减慢(P<0.01),克隆形成率明显小于对照组和空载体组(P<0.01)。细胞周期中G0/G1期比例明显增高(P<0.05),而S期比例减少;CyclinD1 mRNA表达明显下调(P<0.05)。结论:HepaCAM基因通过阻滞细胞于G0/G1期,减少CyclinD1 mRNA表达,抑制T24细胞的增殖。

新基因hepaCAM对膀胱癌细胞体外生物学影响

目的:研究肝细胞粘附分子(Hepatocyte cell adhesion molecule,hepaCAM)对人类膀胱癌T24细胞体外生物学影响。方法:脂质体法转染pEGFP-N2-hepaCAM质粒入T24细胞,激光共聚焦显微镜检测其蛋白定位;筛选稳定表达细胞株;Western blot检测蛋白表达。细胞粘附、基质胶侵袭实验及MTT实验研究该基因对细胞粘附力、活动力及增殖力的影响。结果:hepaCAM在单个细胞中分布在细胞核周边区域;相互连接细胞中主要分布于细胞间相互接触区域。获得稳定表达hepaCAM基因的T24细胞。体外粘附实验、基质胶侵袭实验证明实验组细胞粘附力及活动力明显高于空白组及阴性对照组。MTT法检测转染hepaCAM基因细胞增殖力明显低于空白组及阴性对照组。结论:hepaCAM基因可显著抑制人类膀胱癌T24细胞恶性行为,可能是通过增强细胞-基质间粘附及抑制细胞增殖力从而影响肿瘤细胞的浸润和转移。

一例HEPACAM基因变异致伴皮层下囊肿的巨脑性脑白质病2B型患儿的分析

目的探讨1例伴皮层下囊肿的巨脑性脑白质病(megalencephalic leukoencephalopathy with subcortical cyst,MLC)2B型患儿及其家系的临床特征与HEPACAM基因的变异情况。方法回顾分析1例HEPACAM基因变异导致的MLC2B型患儿的临床、影像资料及患儿母亲、舅舅的生长发育情况并复习相关文献。结果患儿,女,1岁7个月,因抽搐就诊,智力运动发育落后,头围异常增大,头颅磁共振成像提示两侧大脑半球脑白质呈广泛性长T1长T2信号、右前颞囊肿、脑回增宽、脑沟浅平。基因测序提示HEPACAM基因第3外显子存在c.437C>T错义变异,其母携带相同变异,父亲未发现异常。母亲及舅舅幼时有头围增大史,成年后母亲头围正常、舅舅头围仍大于正常成年人。结论该患儿携带HEPACAM基因一个杂合变异,诊断为MLC2B型。上述变异来源于母亲,MLC2B可能存在外显不全。