慢性HBV相关肝病患者HBV基因型和耐药突变位点与疾病进展的关系

目的探讨慢性HBV相关肝病患者HBV基因型和耐药突变位点检测与疾病进展的关系。方法选取230例经核苷(酸)类似物(NAs)治疗的慢性HBV相关肝病患者作为研究对象,检测其外周血HBV基因型和RT区氨基酸序列耐药突变情况。结果 230例慢性HBV相关肝病患者中100例(43.47%)检出NAs耐药突变,以LAM/LdT耐药最多见(30.00%,69/230)、ADV耐药次之(7.83%,18/230)、ETV耐药最少(5.65%,13/230),比较差异有统计学意义(χ^(2)=67.392,P<0.01)。在LAM/LdT耐药中,单点耐药55例(79.71%),以rtM204V/I突变多见(17.39%,40/230);多点耐药14例(20.29%),以rtL180M+rtM204V/I突变多见(5.65%,13/230)。在ADV耐药中,以单点耐药为主(11例,占61.11%),rtA181T是其主要突变位点(3.91%,9/230)。在ETV耐药中,均为多点耐药,以rtM204V/I+rtA181T+rtS202G/I突变为主(突变率为3.04%,7/230)。230例慢性HBV相关肝病患者均为B基因型和C基因型,未检测到A、D、E、F、G、H、J基因型,其中B基因型患者162例(70.43%);C基因型患者68例(29.57%)。HBV B基因型和C基因型在rt180突变率和rt181突变率上比较,差异均有统计学意义(χ^(2)=11.545、4.845,均P<0.05),但在其他位点突变上差异无统计学意义(P>0.05)。慢性乙型肝炎组、乙型肝炎相关肝硬化组HBV基因型分布差异有统计学意义(χ^(2)=25.012,P<0.01)。慢性乙型肝炎组、乙型肝炎相关肝硬化组和乙型肝炎相关肝癌组rt204耐药位点突变率比较,差异有统计学意义(P=0.015),但其他位点突变率差异无统计学意义(P>0.05)。结论本地区慢性HBV相关肝病患者基因型以B型和C型为主,NAs主要耐药突变点检出率较高,其中不同基因型疾病进展情况和耐药突变情况存在差异,而在不同疾病阶段rt204耐药位点突变率亦存在差异。

细胞免疫功能对乙型肝炎病毒复制及抗病毒治疗的意义

目的分析乙型肝炎病毒(HBV)复制、转归及变异与细胞免疫功能的关系。方法检测37例慢性乙型肝炎(乙肝)患者(慢性乙肝组)、20例HBV携带者(无症状携带组)、36例乙肝肝硬化患者(乙肝肝硬化组)及24例健康体检者(正常对照组)的外周血T细胞亚群,分析HBV不同感染状况者T细胞亚群的差异;用实时荧光定量PCR法检测HBV感染者HBV-DNA水平和拉米夫定相关变异(YMDD)。结果 (1)与正常对照组比较,无症状携带组和慢性乙肝组的CD3+、CD4+T细胞的百分比和计数均显著降低(P<0.05),无症状携带者的CD8+T细胞计数亦显著低于正常对照组(P<0.05),而两组的CD8+T细胞百分比及CD4+/CD8+比值与正常对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05);乙肝肝硬化组CD4+T细胞百分比与正常对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05),但CD4+/CD8+比值显著高于正常对照组,CD3+、CD4+、CD8+T细胞计数均显著低于其他各组,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)HVB感染者HBV-DNA水平与外周血CD3+、CD4+、CD8+T细胞及CD4+/CD8+比值无相关性(P>0.05)。(3)抗病毒治疗6个月后HBV-DNA水平小于检测低限组的外周血CD3+、CD4+、CD8+T细胞计数显著高于治疗12个月后转归及无转归组,而CD4+/CD8+比值显著低于治疗12个月后无转归组,差异均有统计学意义(P<0.05)。(4)拉米夫定相关变异型和野生型HBV感染者外周血CD3+、CD4+、CD8+T细胞及CD4+/CD8+比值间差异无统计学意义(P>0.05)。结论慢性HBV感染者体内存在T细胞亚群失衡和细胞免疫功能紊乱,可能是HBV感染后慢性化的重要原因;T细胞亚群检测可作为抗病毒治疗效果和疾病转归的预测指标;T细胞亚群计数较百分比更能反映患者的细胞免疫状况。

对慢性乙型肝炎及肝硬化患者的核苷(酸)类药物耐药位点的分析

目的 研究接受核苷（酸）类似物抗病毒治疗、出现病毒学突破后的慢性乙型肝炎、肝硬化患者血清乙型肝炎病毒（HBV）P区基因序列突变率,突变形式及用药情况,为评估病情进展和实施下一步抗病毒治疗方案提供较为全面的信息.方法 选取浙江中医药大学附属第六医院2009年3月～2012年10月447例接受核苷（酸）类似物抗病毒治疗、出现病毒学突破后的慢性乙型肝炎、肝硬化患者为研究对象,采用基因直接测序法,对其血清HBV P区基因PCR扩增产物进行测序,分析各个耐药位点,同时搜集相关用药史进行回顾性分析.结果 在447例病例中存在位点突变者227例（50.8％）,共存在30种变异形式,变异形式以M204I、L180M＋ M204V、L180M＋ M204I三者居多.其余种类复杂多样,大多以联合突变形式出现;耐药药物的使用及产生的耐药位点基本一致;主要的变异位点集中发生在M204I和L180M,余均较为分散.且经统计分析,乙型肝炎及肝硬化两总体的突变率有统计学差异.结论 对核苷（酸）类似物抗病毒治疗中出现病毒学突破的慢性乙型肝炎及肝硬化患者血清中HBVP区基因耐药位点的分析研究对合理用药以及发生耐药后及时调整治疗方案有重要的作用.

核苷（酸）类似物治疗乙型肝炎肝硬化患者发生肝细胞癌的危险因素分析

目的分析核苷（酸）类似物有效抗病毒治疗过程中乙型肝炎肝硬化患者发生肝细胞癌（HCC）的高风险因素。方法所有患者均来自一项前瞻性多中心对照随机开放试验。2007年6月至2009年2月，8家医院的乙型肝炎代偿性肝硬化患者接受初始拉米夫定（LAM）或阿德福韦酯（ADV）单药治疗，并根据治疗过程中的应答状况最终转为两药联合治疗的抗病毒方案，随访至192周。观察患者的基线状态、病毒学应答、病毒耐药变异，探讨HCC发生的相关危险因素。采用秩和检验、Fisher确切概率法、Log—rank检验和Cox回归。结果207例患者在192周随访中，14例（6．76％）发生HCC的患者为HCC组，未发生HCC者中有123例留存有完整血清可进行耐药位点检测，为非HCC组。患者性别、基线生物化学指标、病毒学特征，以及治疗中的HBsAg定量水平和病毒学应答均与HCC的发生无显著相关。HCC患者较非HCC患者发生更多rtM204V／I变异（64．29％比29．27％，P=0．014）。Cox回归分析发现，起始治疗时年龄≥50岁和发生rtM204V／I变异是发生HCC的风险因子（年龄：HR-1．093，95％CI：1．024～1．166；发生rtM204V／I变异：HR=4．28，95％CI：1．394～13．133）。结论年龄≥50岁和存在rtM204V／I变异是核苷（酸）类似物有效抗病毒治疗过程中乙型肝炎肝硬化患者发生HCC的危险因素。