人参皂苷Rg3抗人肝癌细胞株侵袭和转移的实验研究

目的:探讨人参皂苷Rg3抗人肝癌细胞侵袭和转移的作用及其相关机制。方法:选择人类肝癌细胞株SMMC-7721细胞和建株人脐静脉内皮细胞株ECV304作为研究对象,通过细胞抑制实验(MTT法)、细胞粘附试验和免疫组化方法系统地观察人参皂苷Rg3体外对SMMC-7721细胞及ECV304细胞生长的抑制作用、SMMC-7721细胞与纤维粘连蛋白(FN)粘附以及表达nm23、CD44、VEGF基因蛋白的影响。结果:人参皂苷Rg3能够显著地抑制肝癌细胞株SMMC-7721细胞及内皮细胞株ECV304的生长,抑制SMMC-7721细胞与FN粘附及CD44、VEGF的表达,而增强nm23基因的表达。结论:人参皂苷Rg3具有抗人肝癌细胞侵袭和转移的作用,机制可能与其能够抑制肝癌细胞侵袭活力、调节与肝癌细胞侵袭与转移密切相关的基因表达和抗肿瘤血管形成有关。

BC047440基因在肝细胞癌中的表达及其意义

目的探讨肝癌相关的新基因BC 0 4 7 4 4 0在肝细胞癌(HCC)中的表达及其病理学意义。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)半定量检测3 6例HCC及其相应的癌旁肝组织中BC 0 4 7 4 4 0 mRNA的表达,并将该基因在HCC中的表达分为过高表达组及较高表达组,分析其与肿瘤病理变化的关系。结果3 6例HCC中BC 0 4 7 4 4 0基因mRNA的表达较癌旁肝组织高,其平均光密度比值分别为0.2 5 9 4±0.0 9 2 8和0.0 9 4 2±0.0 4 4 3,差异有极显著性意义(P<0.0 1);过高表达组与较高表达组相比较,前者肝癌直径较大,门静脉受侵较严重,差异有显著性(P<0.0 5)。结论BC 0 4 7 4 4 0基因与HCC的发生、发展和侵袭转移有关。

广西新发现肝癌高发点的初步流行病学研究

目的探讨广西少数民族瑶族地区新发现肝癌高发村肝癌高发的危险因素,为对肝癌进行有效防控提供科学依据。方法采用现场和实验流行病学方法相结合,以广西新发现的肝癌高发村及相对低发村原藉居民作为研究对象,对其肝癌发生状况、肝炎病毒感染及复制、生活环境因素进行初步调查。结果肝癌高发村和相对低发村肝癌的粗年平均死亡率分别为104.90/10万和55.76/10万,两村比较无显著性差别(P>0.05);两村居民HBsAg和HBVDNA的阳性率分别为17.8%(11/62)、12.9%(8/62)和9.4%(10/107)、4.7%(5/107),两村比较HBsAg的阳性率无显著性差别(χ2=2.54,P=0.11),但两村HBVDNA阳性率差别有显著性意义(χ2=3.75,P=0.05);两村抗-HBs的阳性率分别为53.2%(33/62)和60.7%(65/107),两村比较无显著性差别(χ2=0.91,P=0.34)。高发村10年前以塘水作为饮用水,而低发村一直以山泉水作为饮用水;两村均未检出丙型肝炎病毒感染者。结论在广西少数民族瑶族地区新发现的肝癌高发村肝癌高发的主要危险因素为HBV感染,尤其是HBV的复制、饮用塘水和遗传因素的共同作用;黄曲霉毒素及丙型肝炎病毒的感染在此地区肝癌的发生中所起的作用不明显。

血清Glypican-3检测在肝癌诊断中的临床意义

目的:探讨血清中Glypican-3(GPC3)检测在肝癌诊断中的临床意义。方法:采用鼠抗GPC3(25-358aa)单克隆抗体和兔抗GPC3(379-393aa)多克隆抗体建立双抗夹心ELISA法,对364例原发性肝细胞肝癌、96例慢性乙型肝炎及106例正常人血清中GPC3进行定量。同时采用放射免疫法检测AFP。结果:原发性肝细胞肝癌患者血清GPC3平均浓度为86.96±422ng/mL;慢性乙型肝炎患者血清GPC3平均浓度为11.7±12.23 ng/mL;正常人血清GPC3平均浓度为6.04±9.21 ng/mL。原发性肝细胞肝癌患者血清GPC3含量与慢性乙型肝炎组和正常组比较差异显著(P<0.001),慢性乙型肝炎组和正常组间差异无统计学意义(P>0.05)。当以30 ng/mL为诊断界值时,GPC3诊断肝癌的敏感性和特异性分别为40%和93%。在151例同时检测AFP和GPC3的HCC血清中,AFP阳性率为49%,GPC3阳性率为40%。AFP联合GPC3检测时,能将HCC的检出率提高至72%。结论:血清GPC3可作为一新的肿瘤标志物用于原发性肝细胞肝癌的临床诊断。

抑癌基因PTEN和p16在肝细胞性肝癌中的表达及其意义

目的探讨PTEN和p16基因在肝细胞性肝癌(HCC)中的表达及其意义。方法采用免疫组化技术S-P法检测PTEN蛋白及p16蛋白在43例HCC及其相应癌旁组织中的表达。结果PTEN蛋白在HCC组织中的阴性表达率明显高于在癌旁组织中的阴性表达率(P<0.01);PTEN蛋白表达阴性率与HCC的分化程度、临床分期呈负相关,与AFP值及有无转移、HBV感染相关,与p16蛋白缺失率呈正相关,而与患者年龄、性别、肿瘤直径无关。比较PTEN阴性表达和阳性表达的HCC患者的术后1,3,5年生存率,差异在统计学上有显著性意义。结论PTEN失活部分参与了HCC的发生、发展进程。PTEN基因、p16基因的失活及HBV感染可能在HCC的发生、发展中存在协同关系。PTEN蛋白表达的检测可为HCC患者术后的预后判断提供参考。

扶正抗癌汤对裸鼠接种人肝细胞癌的抑制作用

作者对根据辩证施治法则自拟中药方一扶正抗癌汤进行抗肝癌动物实验。选用人肝细胞癌皮下接种裸鼠模型。预试验：灌胃１０天，停药１０天，抑瘤率为６８．９％。之后再给药１０天，停药１９天，仰瘤率４１．９％。重复试验：用药２０天，停药１０天，抑瘤率为３９．４％。实验组血清ＩｇＧ含量显著高于对照组。作者认为扶正抗癌汤具有抑制裸鼠接种人肝细胞癌生长的作用，其机理可能是提高免疫力及杀抑癌细胞，值得深入研究。

腺病毒介导的肝癌自杀基因疗法的实验研究

本文观察了胞嘧啶脱氨酶(CD)基因／5-氟胞嘧啶（5FC)自杀基因疗法对肝癌模型的治疗作用。以CMV启动子调控CD基因的重组腺病毒载体AdexCMV．CD在体外能有效转染人肝癌细胞株SMMC-7721和HepG2，转染后的细胞体外生长能力无明显变化．对5FC的敏感性明显增高。当以AFP上游调控序列驱动CD基因的重组腺病毒载体AdexAFP．CD分别转染SMMC-7721和HepG2时，CD基因能在HepG2中表达，使HepG2对5FC的敏感性增高，但不能使SMMC-7721的生长受到5FC的抑制．[^3H]TdR掺入法观察体外旁观者效应时发现，当细胞总数中转染细胞数超过20％时，其生长明显被5FC抑制。将Adex CMV．CD直接注射入裸鼠接种SMMC-7721细胞形成的皮下肿瘤中．井全身应用5FC后．与对照组相比．肿瘤大小在开始治疗后第8天约缩小3倍，第18天约缩小4倍，以上结果表明，腺病毒介导的CD／5FC自杀基因系统能在体内．外有效地抑制肝癌的生长。以AFP上游调控序列驱动CD基因的脓病毒载体介导的基因转染能在AFP阳性的肝癌细胞中特异表达。

MR动态增强扫描对结节型肝细胞癌的诊断价值

目的探讨MR动态增强扫描对结节型肝细胞癌的诊断价值。方法原发性结节型肝细胞癌24例,MRI平扫的基础上进行动态增强扫描,选取病灶感兴趣区,描出时间-信号强度曲线,进行分析。结果16例时间-信号强度曲线为速升速降型,7例为速升缓降型;1例未见明显强化。结论MR动态增强扫描能为结节型肝细胞癌的定性诊断提供重要依据。

影响大肝癌切除术后肝功能代偿不良因素的分析

目的研究影响大肝癌患者接受肝部分切除术后肝功能代偿不良的相关因素。方法回顾性分析2009年12月至2010年12月40例行肝部分切除治疗的大肝癌患者临床资料，以术后肝功能代偿水平分组，分析相关因素的组间差异和意义。结果术后肝功能代偿良好组（n=20）与代偿不良组（n=20）之间的肿瘤直径分别为（6．53±1．52）cm与（8．53±3．31）cm，吲哚氰绿15min滞留率（ICGR-15）分别为（5．82±4．29）％与（12．27±6．36）％，手术时间分别为（191．75±38．53）min与（262．05±58．54）min，第一肝门阻断时间分别为（6．65±7．62）min与（13．30±9．47）min，术中出血量分别为（322．5±214．28）ml与（790±766．33）ml，差异均有统计学意义，P〈0．05；Logistic回归分析示ICGR-15为术后发生肝功能代偿不良的独立危险因素。ICGR-15≤10％者术后代偿不良发生率明显低于ICGR-15〉10％者（33．33％与84．62％，P〈0．05）。结论大肝癌肝切除术后肝功能代偿不良的主要影响因素为ICGR-15、肿瘤直径、手术时间、第一肝门阻断时间和术中出血量；ICGR-15水平是术后肝功能代偿不良的独立危险因素；术前ICGR-15联合肝切除量可预测大肝癌患者肝切除后肝功能代偿不良的风险。

中晚期原发性肝癌的预后因素分析

目的 :探讨有关临床因素对中晚期肝癌预后的影响。方法 :收集 35 0例原发性肝癌患者的诊治信息 ,应用Kaplan -Meier法和COX模型对一些临床因素进行生存及预后因素分析。 结果 :失访率 2 8.6 % ,全组 1,3,5年生存率分别为 38% ,12 .1% ,6 .9%。多因素COX模型分析显示影响中晚期肝癌的临床预后因素为 :临床分期、治疗方法及肝内播散等。结论 :临床分期、治疗方法等临床因素可作为判断中晚期肝癌预后的指标 。

磁共振成像对原发性肝癌碘油栓塞治疗后的随访价值

目的探讨MRI对评判经碘油栓塞治疗后原发性肝癌(HCC)的疗效。方法选择我院收治的42例HCC患者,共49个病灶。在经碘油栓塞(TACE)治疗后,21例行MRI检查及病理切片观察,观察MRI影像表现及检出准确率。结果 MRI平扫表现为肿瘤组织在T1WI和T2WI上信号多样,有高、等、低信号或多种信号复合。切片观察显示,34个病灶中,18个有不同程度的坏死,7个完全坏死,9个无坏死。共有25个病灶MRI检查显示为坏死,6个检查为残留,检查准确率为91.2%(31/34)。结论 MRI在判断HCC碘油栓塞治疗的预后中,检出率高,能有效反映病灶特征,值得推广。

不同年龄段原发性肝癌手术后复发灶经射频消融治疗的疗效分析

目的探讨射频消融(RFA)治疗不同年龄段原发性肝癌(HCC)术后复发灶的治疗效果。方法回顾性分析64例经皮RFA治疗的HCC术后复发病例的临床资料,其中40岁13例,40～60岁28例,60岁23例,对无瘤生存率进行单因素Kaplan-Meier模型分析和Log-rank检验。结果 40岁治疗组的3、5个月无瘤生存率为38.5%、0,40～60岁治疗组的3、5个月无瘤生存率为53.6%、25.0%,60岁治疗组的3、5个月无瘤生存率为60.9%、39.1%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 RFA治疗HCC手术后复发灶,年龄与无瘤生存率相关,年龄约小越容易复发。

Survivin在原发性肝细胞癌中的表达及其与侵袭、转移的关系

目的研究 Survivin 基因在原发性肝细胞癌中的表达水平及其与肝癌侵袭转移的相关性。方法收集4种肝细胞癌细胞株,35例原发性肝癌组织标本及相应的癌旁组织,以逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测 Survivin mRNA 转录情况;Western blot 法检测 Survivin 蛋白表达。结果在 mRNA 水平4株肝癌细胞株随侵袭转移能力升高 Survivin 表达依次升高(P<0.01),HC-CLM6细胞株中 Survivin 表达水平最高。肝癌组织 Survivin mRNA 表达均为阳性,而癌旁组织内无一例阳性表达,Survivin mRNA 的表达水平在肝内转移组(1.082±0.213)显著高于肝内无转移组(0.799±0.324,P<0.05)。Western blot 的结果与 RT-PCR 结果一致,肝内转移组 Survivin 蛋白表达(0.892±0.198)显著高于肝内无转移组(0.342±0.237,P<0.05)。结论 Survivin 在原发性肝细胞癌中表达,且与侵袭转移等肿瘤的恶性生物学行为有关,Survivin 基因高表达可作为判断 HCC 侵袭性和进展的一个潜在重要指标。

短发夹RNA/MDR1逆转肝细胞癌多药耐药

目的探讨短发夹 RNA/MDR1(shRNA/MDR1)干扰技术能否体内逆转肝细胞癌多药耐药。方法建立肝细胞癌耐药细胞株 HepG2/MDR1和敏感细胞株 HepG2裸鼠移植瘤模型,分腹腔注射组和瘤体内注射组,以表达载体 pSUPER-shRNA/MDR1转染,阴性对照组以阴性载体pSUPER 转染,72 h 后行腹腔内阿霉素化疗试验,每周2次,共2周,然后处死动物,测量化疗前后肿瘤体积差,瘤体制成细胞悬液和组织切片,分别以流式细胞术和免疫组织化学检测细胞膜 P-gp 表达。结果成瘤率100%,HepG2/MDR1组和 HepG2组成瘤时间和化疗前肿瘤体积差异无统计学意义,HepG2/MDR1组化疗前后肿瘤体积差(mm^3)与阴性对照组比较差异有统计学意义(700.14±25.61比1659.70±152.54,P<0.01);腹腔注射组和瘤内注射组差异无统计学意义。流式细胞术检测发现治疗组细胞膜蛋白 P-gp 表达率(%)较阴性对照组明显下调(65.1%比94.1%,P<0.05),腹腔注射组和瘤内注射组差异无统计学意义(94.1%比92.8%,P>0.05)。瘤体组织病理切片和免疫组织化学分析也有同样的结果。结论表达载体 pSUPER-shRNA/MDR1体内转染可以逆转肝细胞癌多药耐药。

长链非编码RNA在肝细胞肝癌组织中的表达及临床意义

目的探讨长链非编码RNA（LncRNA）在肝细胞肝癌（以下简称肝癌）组织中的表达及其临床意义。方法采用实时定量聚合酶链反应（Real-timePCR）法检测7种与肿瘤相关LncRNA[B细胞整合簇基因（BIC）、淋巴细胞白血病中删除基因1（DLEU1）、小核RNA看家基因5（SNHG5）、反义胰岛素样生长因子2（IGF2AS）、前列腺癌基因3（PCA3）、α-缺氧诱导因子（HIF-α）、前列腺癌基因表达标记1（PCGEM1）]在肝癌组织和癌旁组织中（n=40）的表达。结果SNHG5、IGF2AS、PCA3、HIF-α在肝癌组织和癌旁组织中的表达差异有统计学意义（P〈0．01）；其中IGF2AS为表达差异最显著的LncRNA[肝癌：10．910±1．775）比癌旁组织（13．517±3．077）]，且在肝癌组织中的表达与肿瘤数目（P〈0．05）和微血管侵犯（P〈0．01）密切相关。Cox多因素分析显示，IGF2AS存肿瘤组织中的表达是肝癌患者无瘤生存的独立预后因素。结论新的LncRNA如IGF2AS在肝癌发生发展及预后中的重要作用值得进一步研究。

RNA干扰对肝癌细胞巨噬细胞移动抑制因子基因表达的抑制作用

目的观察特异性小干扰RNA（siRNA）对肝癌细胞巨噬细胞移动抑制因子（MIF）基因表达的抑制作用。方法脂质体方法将siRNA转染肝癌细胞PLC、Hep3B。定量RT-PCR、Western blot检测MIF mRNA和蛋白、MAPK信号分子的表达。噻唑蓝（MTT）比色法、体外细胞侵袭实验检测细胞增殖和对重组基底膜（matrigel）穿透能力。结果100nmol／L的MIF siRNA使MIF mRNA表达下调81．3％和89．1％，蛋白水平降低69．50％、72．31％，与对照组比较其差异有统计学意义（P均〈0．01）。细胞增殖率下降16．79％和47．14％（P均〈0．05）。穿透matrigel的细胞数为51．00±11．27和18．56±4．72，与对照组比较差异有统计学意义（P均〈0．05）。磷酸化MAPK下调。结论MIF siRNA有效抑制MIF表达及肝癌细胞增殖和迁移，可能部分通过抑制MAPK磷酸化起作用。

ShRNA抑制gankyrin基因在肝癌细胞中表达的研究

目的构建靶向癌基因gankyrin的短发夹状RNA(shRNA),观察其在肝癌细胞株HepG2中对gankyrin基因表达的抑制作用。方法设计、合成三对针对gankyrin的shRNA序列,连接到带有人U6启动子的载体质粒pGenesil-1中,构建重组质粒pGenesil-1-Gankyrin1、pGenesil-1-Gankyrin2、pGenesil-1-Gankyrin3,稳定转染HepG2细胞,采用RT-PCR及W estern b lot检测对gankyrin表达的抑制效果。结果酶切分析和测序证实pGenesil-1-Gankyrin1、pGenesil-1-Gankyrin2、pGenesil-1-Gankyrin3构建成功;其中pGenesil-1-Gankyrin2、pGenesil-1-Gankyrin3对gankyrin的表达有明显的抑制作用。结论构建的pGenesil-1-Gankyrin重组质粒能有效抑制gankyrin基因在肝癌细胞株HepG2中的表达。

X盒结合蛋白1、免疫球蛋白结合蛋白在肝癌组织中的表达及意义

目的检测x盒结合蛋白1（XBP1）、免疫球蛋白结合蛋白（Bip）在肝癌组织中的表达，探讨其在肝癌生长中的作用机制。方法采用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）法检测术中所取的42例肝癌标本、15例同个体癌旁1．0cm肝组织和15例正常肝组织中XBP1、Bip的mRNA表达。应用Westernblot法验证57例肝癌组织和正常肝组织标本中XBP1、Bip在蛋白水平的表达。结果肝癌组织、癌旁肝组织、正常肝组织中XBP1mRNA相对表达量分别为0．4396±0．0241、0．4152±0．0252、0．4095±0．0149，XBP1mRNA在3组之间的表达呈下降趋势（P〈0．05）；肝癌组织、癌旁肝组织、正常肝组织中BipmRNA相对表达量分别为0．4772±0．0401、0．4332±0．0488、0．4301±0．0398，BipmRNA在3组之间的表达呈下降趋势（P〈0．05）。实验对肝癌组织和正常肝组织中XBP1和Bip的蛋白表达进行了定性验证：在肝癌组织和正常肝组织中均有两种蛋白的表达，但肝癌组织中的表达明显高于正常肝组织。结论在肝癌的生长过程中存在未折叠蛋白反应（UPR）的激活。在肝癌组织中XBP1、BipmRNA和蛋白的表达一致，均呈高表达。这些基因和蛋白表达的改变可能与肝癌的发生、生长及转移密切相关。

干细胞转录因子Nanog在肝细胞癌中的表达及意义

对2007年8月至2011年4月在我院行手术治疗的40例肝细胞癌（HCC）患者肝癌组织及其中10例患者的HCC癌旁组织、10例肝血管瘤的肝组织及5例精原细胞瘤组织，采用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法，行干细胞转录因子Nanog蛋白表达的检测。各类组织中Nanog蛋白表达的比例分别为42％（17／40）、1／10、0／10和5／5；Nanog蛋白表达与性别、年龄、血清AFP水平、HBsAg阳性、肿瘤分化情况、Child分级及TNM分期，无明显相关性（P〉0．05）。Nanog蛋白可作为HCC干细胞的表面标志物。

HSPA9在肝细胞肝癌的表达和临床意义

目的探讨热休克蛋白A9(HSPA9)在肝细胞肝癌中的表达情况及其与临床病理特征和生存预后的关系。方法回顾性分析该院2006年1月至2010年1月外科手术切除治疗49例肝细胞肝癌患者临床及随访资料,免疫组织化学检测上述肝细胞肝癌及癌旁组织中HSPA9的表达情况,统计分析HSPA9表达与临床病理特征及预后的关系。结果肿瘤组织中HSPA9表达较癌旁组织高(t=6.601,P<0.01),并且过表达的HSPA9与淋巴结转移(P=0.005)、TNM分期(P=0.015)、肿瘤分化(P=0.033)、微血管侵犯(P=0.009)及有无复发(P=0.047)密切相关;在生存分析结果中过表达的HSPA9总体生存率更低(P=0.002),术后累计复发率更高(P=0.003);单因素总体生存率和累计复发率分析结果示TNM分期、微血管侵犯、淋巴结转移、肿瘤分化及HSPA9染色可预测患者预后(P<0.05)。结论 HSPA9在肝细胞肝癌中过表达,过表达的HSPA9与侵袭转移病理特征密切相关,并可作为预测肝细胞肝癌的独立预后危险因素。