大鼠骨质疏松模型中肝脏Hepcidin基因表达的初步研究

目的研究SD大鼠骨质疏松形成过程中肝脏Hepcidin的变化趋势。方法用70 mg/kg/d维甲酸连续灌胃两周建立大鼠骨质疏松模型,用RT-PCR法测定第3、第8、第13天肝脏Hepcidin基因表达。结果肝组织Hepcidin基因表达在模型第8、第13天出现变化,其在RT-PCR电泳中表达降低。结论模型组肝组织Hepcidin基因的表达降低对于骨质疏松形成过程可能存在直接或间接关系,Hepcidin可能成为骨质矿化异常诊断的新焦点,为进一步研究改变骨质疏松提供新的思路。

重组hepcidin的分离纯化及鉴定

建立了重组hepcidin的分离纯化方法,并鉴定其抗菌活性。经金属螯合初步纯化的重组蛋白在cysteine/cystine氧化还原体系中氧化形成二硫键,用变性条件下的凝胶过滤除去多聚体,稀释复性后用于肠激酶酶切反应,得到重组hepcidin。融合蛋白His-hepcidin经氧化、复性后的总收率为50%,纯度大于95%。酶切后所得重组hepcidin经抑菌圈试验检验,对枯草芽孢杆菌具有抗菌活性。LC-ESI-MS与园二色光谱检测显示重组hepcidin与天然hepcidin相对分子质量相同、二级结构相似。

暗纹东方鲀Hepcidin基因的扩增及序列分析

利用聚合酶链式反应,首次从暗纹东方纯基因组DNA中扩增Hepcidin基因的部分序列,序列分析表明,不同鱼类之间的Hepcidin基因DNA序列之间的遗传距离为0.33～1.08,所获得的Hepcidin序列,为进一步研究暗纹东方纯中Hepcidin基因的作用机制提供了基础。

铁调素及铁离子对人成骨细胞(hFOB1．19)内钙离子转运的影响

目的研究铁调素（Hepcidin）及铁离子对人成骨细胞（hFOB1．19）内Ca^2＋转运的影响。方法成骨细胞34℃培养3—4天至细胞密度为90％，胰蛋白酶消化后分种于12孔培养板（每孔内置一圆形盖玻片）。（1）空白组加入双蒸水，实验组加入不同浓度Hepcidin（双蒸水配制），干预24h后用激光共聚焦扫描显微镜（cLSM）检测；（2）空白组加入双蒸水，实验组加入不同浓度的DFO和FAC，分别干预后立即用激光共聚焦扫描显微镜检测。结果经激光共聚焦扫描显微镜（CLSM）检测发现：（1）随着成骨细胞外Hepcidin浓度的升高，成骨细胞内钙离子的绿色荧光强度增强；（2）随着成骨细胞外DFO浓度的升高，成骨细胞内钙离子的绿色荧光强度增强；相反，随着成骨细胞外FAC浓度的升高，成骨细胞内钙离子的绿色荧光强度减弱。结论（1）Hepcidin可促进成骨细胞内Ca^2＋增加。（2）成骨细胞外Fe^3＋浓度的减少可以增加细胞内的Ca^2＋，而胞外Fe^3＋浓度增加则减少细胞内的Ca^2＋。

IDA患者血清铁调素、铁幼素、膜铁转运蛋白和转铁蛋白受体2的表达特点及意义

目的 研究缺铁性贫血（IDA）患者血清铁调素（hepcidin,Hep）、铁幼素（hemojuvelin,HJV）、膜铁转运蛋白（ferroportin,FPN）和转铁蛋白受体2 （trasferrin-receptor2,TFR2）表达特点,并探讨他们在IDA发病机制中的意义.方法 应用ELISA方法测定28例IDA患者和20例健康对照者的血清Hepcidin,HJV,FPN和TFR2浓度,并进行相关分析.同时还检测了血清铁蛋白（SF）和促红细胞生成素（EPO）.结果 ①IDA组血清铁调素水平为2.04±1.27 ng/ml,明显低于对照组的3.07±1.68 ng/ml（t=2.203 6,P〈0.05）.②IDA组的血清HJV水平为0.65±0.51 ng/ml,明显低于对照组的0.99±0.46 ng/ml（t=2.352 9,P〈0.05）.③IDA组血清TFR2水平为8.15±3.09 ng/ml,明显高于对照组的6.62±1.42 ng/ml（t=2.061 7,P〈0.05）.④IDA组的血清FPN水平为2.69±1.71 ng/ml略高于对照组的2.11±0.58 ng/ml,但差异无统计学意义（P＞0.05）.⑤SF与EPO呈负相关（r=-0.4958,t=2.911 0,P〈0.01）,与HJV和Hepcidin均呈正相关（r=0.5015,t=2.9560,P〈0.01;r=0.515 7,t=3.069 1,P〈0.01）.⑥Hepcidin与HJV呈正相关（r=0.398 3,t= 2.214 1,P〈0.05）.结论 IDA患者高表达TFR2,低表达Hep和HJV.Hep和HJV在IDA的发病中有一定的意义,TFR2对IDA的诊断有重要的意义.联合Hep,HJV和TFR2对IDA与慢性病贫血等疾病的鉴别诊断有重要意义.FPN在IDA中的意义有待于进一步探讨.

铁调素在血液病与恶性肿瘤中的研究进展

铁是机体的重要微量元素,参与血红蛋白的合成等多种重要生理过程。铁调素是铁的关键调节激素,对维持机体铁平衡起着重要作用。研究发现,铁调素的变化导致的铁代谢紊乱是导致多种血液病及恶性肿瘤的重要因素。该文对铁调素在血液病与恶性肿瘤中的相关研究进展进行综述。

海帕西啶与铁代谢

铁是人体必需的微量元素,在体内的含量受着精确的调节以保证机体的正常功能。最近发现的一种含有25个氨基酸的多肽激素海帕西啶是体内铁代谢的重要调节因素之一,在小肠铁吸收、巨噬细胞的铁释放、铁跨胎盘运输等过程中发挥着重要的作用。海帕西啶的过量和不足都会影响铁的内稳态,而发生一系列疾病,随着对海帕西啶调节机制的研究将出现针对一些铁代谢紊乱疾病,如血色素沉着、炎症性贫血等的新治疗方法。

Hepcidin的生物学特性及其研究进展

Hepcidin是一种由肝脏合成的富含半胱氨酸的小分子肽。近几年的研究证实hepcidin对于调节机体铁离子的代谢平衡发挥着重要的作用,其可抑制肠道铁吸收和单核巨噬细胞系统铁释放。此外,除了机体铁状况,感染、炎症、贫血和缺氧等原因也会改变hepcidin的表达水平。通过对hepcidin的分子生物学特点、表达调控及生物活性、医学及药用价值等方面研究进展的概述,对采用基因工程的方法生产hepcidin进行了评述及展望。

干扰素α-2b对丙肝患者血清铁调素的影响

目的:探讨干扰素α-2b(IFNα-2b)对丙肝患者血清铁调素(Hepcidin)的影响及分析其可能机制。方法:(1)按3个月内曾否接受IFNα-2b治疗把37例丙肝患者归为治疗组(n=25)及未治疗组(n=12),分析2组血清Hepcidin的差异。(2)用逐渐增量(0、50、100、200、400μL)的IFNα-2b处理Hep G2及LO2细胞24 h,real-time PCR检测细胞Hepcidin、白细胞介素6(IL-6)、信号转导与转录激活子3(STAT3)的mRNA表达量,Western blot检测细胞STAT3及磷酸化STAT3(pSTAT3)蛋白水平,分析其变化。结果:治疗组血清Hepcidin低于未治疗组(P<0.05)。随IFNα-2b浓度增加,HepG2及LO2细胞Hepcidin mRNA表达逐渐下调(P<0.05),IL-6和STAT3的mRNA变化趋势不明显;pSTAT3蛋白水平逐步下降(P<0.05),STAT3蛋白水平不呈递减改变。结论:丙肝患者接受IFNα-2b治疗后血清Hepcidin浓度降低可能是由于IFNα-2b抑制了肝细胞Hepcidin基因表达,其机制可能与STAT3通路磷酸活化受阻有关。

睾酮对慢性肾功能衰竭大鼠肾性贫血的影响及其作用机制

目的研究睾酮对慢性肾功能衰竭大鼠肾性贫血的治疗效果并探讨其作用机制。方法 24只雄性Wistar大鼠采用随机单位组设计组法分为:对照组(NC)、正常大鼠睾酮干预组(NT)、慢性肾功能衰竭大鼠组(CD)、慢性肾功能衰竭大鼠睾酮治疗组(CT)。CD、CT两组建立慢性肾功能衰竭大鼠模型,造模成功后NT、CT两组给予丙酸睾酮皮下注射,8周后处死大鼠,检测贫血指标及铁调素,促红细胞生成素(EPO)表达情况。结果睾酮能显著升高慢性肾功能衰竭大鼠血红蛋白(Hb),血清铁(SI),总铁蛋白结合力(TIBC)表达,同时增加肾脏EPO的表达,降低肝脏内铁调素表达。结论睾酮能显著纠正慢性肾功能衰竭大鼠肾性贫血,其机制可能与上调EPO表达、减弱铁调素作用相关。

促红细胞生成素抑制正常及缺铁性贫血大鼠铁调素的表达

目的:探讨促红细胞生成素(EPO)在缺铁性贫血(IDA)大鼠模型中对铁调素(hepcidin)表达的影响。方法:通过反复放血和饲喂低铁饲料,建立IDA大鼠动物模型,比较药物干预组(EPO)与非干预组及正常对照组与正常给药组(EPO)大鼠血清hepcidin表达的差异。Western blot检测肝脏内信号因子CCAAT/增强子结合蛋白α(C/EBPα)含量。结果:IDA模型组腹腔注射EPO后,血清hepcidin和肝脏C/EBPα含量显著降低。EPO对正常大鼠hepcidin表达也有显著抑制作用(P<0.05)。结论:hepcidin可能参与了IDA的发生,在正常大鼠和IDA大鼠中,EPO能通过下调C/EBPα阻碍其激活hepcidin启动子最终抑制hepcidin的表达。

肥胖对小鼠肝脏GDF-15、TMPRSS6、Hepcidin表达的影响

目的观察肥胖小鼠肝组织中铁代谢相关调控因子铁调素(hepcidin)mRNA,生长分化因子-15(GDF-15)和跨膜丝氨酸蛋白酶6(TMPRSS6)蛋白表达的变化,及血液和肝组织57Fe的相对含量及其意义。方法 4-6周雄性C57BL/6J小鼠20只被随机分为肥胖模型组和正常对照组,每组10只。肥胖模型组和对照组分别给予高脂饲料和普通饲料。饲喂至15周,肥胖模型建模成功。建模成功后,以0.1 ml/10 g的计量标准,对全部小鼠经口一次性灌注^(57)FeSO_4溶液。1 h后,取小鼠心脏血液及肝脏。免疫组化法检测肝脏中GDF-15、TMPRSS6的相对表达量,real-time PCR法检测肝脏hepcidin mRNA,ICP-MS法测定血液及肝脏中^(57)Fe的相对含量。结果与对照组相比,肥胖组小鼠肝脏中hepcidin表达增加(0.282±0.109 vs 0.494±0.139,P<0.01),GDF-15表达减少(0.097±0.005 vs 0.035±0.006,P<0.01),血液^(57)Fe表达减少[(22.970±4.492)μg/ml vs(15.647±1.629)μg/ml,P<0.05)],肝脏^(57)Fe表达减少[(603.103±35.511)μg/g vs(226.073±12.124)μg/mg,P<0.05],而TMPRSS6的表达尚不能认为差异有统计学意义(0.068±0.009 vs 0.085 3±0.027,P>0.05)。结论机体TMPRSS6表达量的变化不受肥胖因素影响。但肥胖可以下调机体GDF-15的表达,并由此升高肝脏hepcidin的表达,最终导致肝脏及血液铁含量减少。

新型血清标志物应用于细菌性肝脓肿诊断中的前瞻性研究

目的对血清标志物铁调素、可溶性CD14亚型的应用进行前瞻性研究,评价其单独或联合应用于细菌性肝脓肿诊断的价值。方法选取哈尔滨医科大学附属第一-医院2019年6月至12月期间住院治疗的细菌性肝脓肿患者30名作为研究组,同期招募健康志愿者共40人作为对照组,分别采集血清样本,检测其中铁调素、可溶性CD14亚型及其他相关指标,.使用统计软件SPSS25进行分析。结果铁调素、可溶性CD14亚型在患者组样本中的浓度显著高于对照组,以受试者工作特征(ROC)曲线分析,分别取截断值为52.56ng/mL.5.50ng/mL,此时诊断敏感度为92%.73%,特异度为91%.97%,以二元Logistic回归分析二者联合因子,可达敏感度95%、特异度97%。以序贯性器官功能衰竭评分作为严重程度指标,各标志物均无显著相关性;针对病程中的不良事件进行分组,组间无显著差异性。结论单独或联合应用铁调素索与可溶性CD14亚型对于细菌性肝脓肿的临床诊疗有辅助诊断价值。

慢性肾衰患者应用促红细胞生成素对铁调素的影响

目的探讨慢性肾衰患者应用促红细胞生成素对铁调素的影响。方法选取30例慢性肾衰的患者,分别检测、比较治疗前后铁代谢综合指标包括血清铁、铁蛋白、总铁结合力及血红蛋白等,同时采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定促红细胞生成素治疗前后患者血清铁调素和白细胞介素6(IL-6)水平。结果应用促红细胞生成素后患者铁调素为(154.28±31.37)μg/L,治疗前(208.67±40.34)μg/L,治疗后明显下降(P<0.05);血红蛋白治疗前为(82.31±12.41)g/L,治疗后为(99.43±11.82)g/L,治疗后明显升高(P<0.05);同时治疗后的血清铁、转铁蛋白、总铁结合力均升高,差异有统计学意义(P<0.05),铁蛋白降低,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后SCr无明显变化;hs-CRP治疗前为(4.53±2.11)mg/L,治疗后为(2.84±0.92)mg/L,治疗后明显降低(P<0.05);IL-6治疗前为(51.23±12.44)ng/L,治疗后为(49.95±13.56)ng/L,治疗前后无明显变化。结论促红细胞生成素能调节慢性肾衰患者体内铁调素水平而纠正贫血。

慢性肾脏病铁稳态的研究及治疗进展

铁是几乎所有生物存活所必须的微量元素。铁在氧气运输中起到重要作用,铁缺乏会导致贫血,影响氧的供给。在慢性肾脏病中会出现铁代谢的紊乱,使调节铁代谢的细胞因子水平发生变化。慢性肾脏病导致的铁代谢紊乱主要为铁元素缺乏,而补充铁剂的治疗,会导致一系列的氧化应激反应,此为目前临床治疗的难点。认识铁元素在慢性肾脏病中的调节机制是实现铁剂精准治疗的重要前提,本文将从慢性肾脏病中的铁稳态失衡入手,从精准治疗的角度进行综述,以期深入分析铁稳态与慢性肾脏病间的联系,为优化铁剂补充方式提供参考,从而达到减少不良反应的目的。

红细胞生成素对人单核细胞hepcidin的影响及其机制

目的探讨红细胞生成素（EPO）对单核细胞hepcidin的影响及典分子学机制.方法采用实时定量PCR和Western blot方法检测hepcidin及信号分子C／EBPα、Smadl／5／8、磷酸化（p）-Smadl／5／8和p-STAT3的表达水平。采用IL-6或脂多糖（LPS）刺激人单核细胞系THP-1细胞，脱祭EPO对THP-1细胞hepcidin及信号分子表达的影响。加入EPO受体（EPOR）的抗体，观察其对EPO的拮抗作用以及对信号分子的影响。结果EPO能抑制由20ng／ml IL-6或1μg/ml LPS诱导的THp-1单核细胞hepcidin mRNA表达，作用呈时间和浓度限制性，EPO2U／ml（降低56％或64％）、作用6h（降低53％或66％）抑制作用最明显。在20ng／mlIL-6诱导作用下，EPO还町抑制hepcidin蛋白表达，EPO2U／ml作用6hhepcidin蛋白表达明显降低。同时信号分子C／EBPα、p-Smadl／5／8和p-STAT3表达也受抑制，EPOR抗体能够拮抗EPO对hepcidin以及上述信号分子的抑制作用。结论EPO可以抑制IL-6或LPS诱导的单核细胞hepcidin表达；在体外，EPO可能足通过下测C／EBPα、p-SmadI／5／8和p-STAT3进而抑制单核细胞hepcidin表达。