橙皮甙等桔皮活性成分的提取和抑菌作用研究

本实验从桔皮中提取了数种色素和橙皮甙,再将后者酸解得到桔皮素。其抑菌性能测定确认了醇-水溶色素P2及醇溶色素P4对大肠杆菌、葡萄球菌,醚溶色素P1对青霉的活性。橙皮甙在pH4,浓度为2mg/ml时对大肠杆菌、葡萄球菌、枯草杆菌、青霉、黑曲霉、根霉和毛霉有显著抑制作用,而桔皮素仅对大肠杆菌有微弱活性。此结果揭示了桔皮抑菌防腐的主要有效成分是醇溶性色素以及橙皮甙;抗霉活性主要由醚溶色素负责,但在pH4,橙皮甙在酸协同下将发挥主要抑霉作用,而水解脱去糖甙后活性全无。

藤茶化学成分的研究

目的:对藤茶的化学成分进行研究。方法:经反复硅胶、聚酰胺柱色谱及重结晶等手段进行分离,运用UV、MS、NMR等波谱方法进行结构鉴定。结果:分离鉴定了6个化合物,分别为β-谷甾醇(1)、齐墩果酸(2)、橙皮素(3)、二氢槲皮素(4)、山柰酚(5)、芹菜素(6)。结论:橙皮素、山柰酚、芹菜素为首次从该种植物中分离得到。

橙皮苷及橙皮素清除自由基活性的研究

目的:比较橙皮苷和橙皮素的抗氧化活性。方法:UV-Vis光谱测定橙皮苷和橙皮素对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基(DPPH·)和羟基自由基(·OH)的清除作用。结果:橙皮苷和橙皮素对两种自由基都有较好的清除作用,清除效果随浓度的增大而增大。橙皮素清除DPPH·的能力明显强于橙皮苷,橙皮素清除·OH的能力略强于橙皮苷。结论:橙皮素比橙皮苷的体外抗氧化活性强。

木犀草素的半合成

目的 :半合成具有止咳、祛痰及消炎作用的木犀草素。方法 :从陈皮中提取橙皮苷 ,橙皮苷再经水解、脱甲基、脱氢三步合成木犀草素。结果 :三步总收率为 4 5.9% ,同时还以较好收率合成了双氢黄酮化合物 :橙皮素 2和圣草酚 3。结论 :该工艺原料易得、工艺简单、收率高。

TGF-β1/BMP-4诱导肺动脉血管平滑肌细胞增殖及橙皮素、芍药苷的干预

目的：探讨橙皮素和芍药苷对正常培养及TGF-β1/BMP-4诱导肺动脉血管平滑肌细胞增殖的影响。方法：首先,0、50、100、150、200μg/mL的橙皮素或芍药苷作用于正常培养条件下的人肺动脉血管平滑肌细胞,24 h及48 h检测药物的细胞增殖抑制率。接着,应用均匀设计制订TGF-β1与BMP的剂量组合,诱导细胞增殖,多元线性回归和单因素方差分析确定诱导细胞增殖的TGF-β1与BMP的优化剂量组合;应用该剂量诱导细胞增殖,MTT和Brd U两种方法检测药物对细胞增殖的影响。结果：150、200μg/mL的橙皮素或芍药苷抑制正常培养条件下的细胞增殖（P〈0.05或0.01）。多元回归方程显示：TGF-β1和BMP-4对细胞增殖的影响相互拮抗,7.5 ng/mL TGF-β及20 ng/mL BMP-4显著增加细胞的增殖（P〈0.05）。12.5-100μg/mL的橙皮素不能显著抑制TGF-β1/BMP-4诱导肺动脉血管平滑肌细胞增殖（P〉0.05）;25-100μg/mL的芍药苷显著抑制TGF-β1/BMP-4诱导肺动脉血管平滑肌细胞增殖（P〈0.05或0.01）。结论：橙皮素和芍药苷均抑制正常肺动脉平滑肌细胞的增殖。芍药苷抑制TGF-β1/BMP-4诱导肺动脉血管平滑肌细胞增殖,具有较高的研究与开发价值。

小儿喜食糖浆方煎液澄清工艺的研究

目的 :研究小儿喜食糖浆方的澄清工艺。方法 :通过优选的醇沉工艺与壳聚糖絮凝澄清工艺的条件 ,比较总固体量、橙皮甙含量及澄清度。结果

类黄酮对AM真菌侵染菌丝生长及酶活性的影响

类黄酮(hesperitin)能显著促进AM真菌[Glomus intraradices(G.i)、Acaulospora laevis(A.l)、G.i+A.l]对宿主植物(玉米、棉花)根段的侵染,提高菌丝琥珀酸脱氢酶(Succinate dehydrogenase,SDH)和碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)的活性。当用15 nmol L-11、50 nmol L-1、1.5μmol L-1的类黄酮处理时,第6周取样,G.i对玉米根段的侵染率分别为76.2%、84.5%、75.8%(对照为45.9%),菌丝SDH酶活性分别为68.4%、75.9%、67.4%(对照为40.7%),菌丝ALP酶活性分别为45.8%、51.4%、45.1%(对照为27.1%);G.i对棉花根段的侵染率分别为85.2%8、8.9%8、3.8%(对照为59.8%),菌丝SDH酶活性分别为76.8%、81.2%、75.0%(对照为53.1%),菌丝ALP酶活性分别为51.2%、53.7%4、9.4%(对照为35.2%)。同时,类黄酮能显著增加土壤中AM真菌菌丝的总量,对宿主植物(玉米、棉花)的生物量也有一定的影响。

类黄酮对AM真菌及宿主植物的影响研究

类黄酮[apigenin(4,5,7-trihydroxyflavone,4,5,7-三羟基黄酮)和hesperitin(3?5,7trihydroxy4?methoxyflavanone,3?5,7-三羟-4-甲氧基黄烷酮)]对接种AM真菌的紫云英的生物量、AM真菌侵染率、菌丝ALP(碱性磷酸酶)和SDH(琥珀酸脱氢酶)活性都有显著影响。对于Glomusintraradices侵染的紫云英的生物量,4,5,7-三羟基黄酮处理组第6周有显著差异(生物量分别为6.3g、5.7g和6.5g,而对照为3.0g),3?5,7-三羟-4-甲氧基黄烷酮处理组三次取样都有显著差异;对于Endo-1(一个商业菌剂,由Glomusintraradices和Glomusmosseae组成)侵染的紫云英的生物量,4?5,7-三羟基黄酮处理组第6周1.5mmol/L组和第9周150nmol/L组都有显著差异(生物量分别为7.2g和16.8g,而对照为4.1g和8.1g),3?5,7-三羟-4?甲氧基黄烷酮处理组第6、9周都有显著差异,尤以第9周150nmol/L组差异更大(生物量为14.4g,而对照为8.1g)。对于G.intraradices的侵染率,与对照相比,4?5,7-三羟基黄酮处理组三次取样都有显著差异(第9周对照为36.6%,而处理组分别为71.5%、80.8%和75.9%);3?5,7-三羟-4?甲氧基黄烷酮处理组三次取样也有显著差异,尤以150nmol/L组效果最好(第9周AM真菌侵染率为94.8%,而对照为36.6%);对于Endo-1的侵染率,与对照相比,4,5,7-三羟基黄酮处理组三次取?

酶处理橙皮苷的性质与应用

本文对酶处理橙皮苷的制造方法、性质、特性及其利用进行了论述．

结合密度泛函理论的橙皮素及其包合物的红外和拉曼光谱研究

本文通过密度泛函理论(DFT)结合实验研究了橙皮素的红外和拉曼光谱,采用B3LYP/6-311+G(d,p)基组对其红外和拉曼光谱进行了计算,计算结果和实验结果基本一致。本文还利用红外及拉曼光谱对橙皮素与β-环糊精(β-CD)形成的包合物进行了分析,证明了橙皮素通过氢键作用嵌入β-CD的疏水空腔中而形成包合物,从而验证了拉曼光谱可以作为一种新型的验证包合物形成的方法。该研究为橙皮素及其包合物的鉴定提供了一种简单、快捷、无损测量的优良方法。

橙皮素席夫碱类衍生物的合成及抗氧化作用

从中药陈皮中提取橙皮苷,通过酸水解制备橙皮素,再分别与苯肼类、苯甲酰肼类、苯氨基脲类、苯氨基硫脲类、苯乙酰肼类、苯氧乙酰肼类和苯氨基乙酰肼类化合物缩合得到相应的橙皮素席夫碱类化合物。用紫外、红外、核磁共振氢谱、质谱及元素分析等技术手段对化合物的结构进行了表征。测定并比较了橙皮苷、橙皮素及其席夫碱新化合物清除超氧自由基(O-·2)、羟自由基(·OH)和2,2-二苯基-1-苦味酰基自由基(DPPH·)的活性及总还原能力。结果表明,在1.0 g/L时,这些化合物均具有抗氧化活性,其中部分橙皮素席夫碱化合作用强于橙皮苷和橙皮素。

HPLC测定星油藤饼和蛋白中桑色素、橙皮素、柚皮素和单宁的含量

采用HPLC测定星油藤饼和蛋白中桑色素、柚皮素、橙皮素和单宁的含量。通过对柚皮素和单宁在星油藤饼和蛋白中含量的考察以及Dot值分析,探究单宁和柚皮素对不愉快风味贡献的程度。结果表明:橙皮素、柚皮素、桑色素、单宁分别在0.787~39.344、0.937~46.884、0.997~49.828、1.200~60.010μg/mL范围内与色谱峰面积呈良好的线性关系;橙皮素、柚皮素、桑色素和单宁的检测限分别为1.56、0.86、2.68、3.56μg/mL;星油藤浓缩蛋白中桑色素、橙皮素、柚皮素和单宁的含量比星油藤饼中分别减少了4 258、2 929、1 720、2 602 mg/kg;单宁和柚皮素分别对星油藤饼涩味和苦味贡献显著,醇洗分离法可以有效脱除星油藤饼中的不愉快风味。

7-肉桂酰橙皮素铜配合物的固相合成及清除自由基作用研究

从中药陈皮中提取得到橙皮苷,以其为先导化合物,通过酸水解制备橙皮素,然后与肉桂酰氯反应得到7-肉桂酰橙皮素,该化合物与醋酸铜固相反应得到相应的铜配合物,根据元素分析、IR、1H-NMR、MS、热重分析等图谱对目标化合物的结构进行确证。对橙皮苷、橙皮素、7-肉桂酰橙皮素、7-肉桂酰橙皮素铜配合物进行了清除超氧自由基(O2-·)、羟自由基(·OH)、二苯代苦味肼基自由基(DPPH·)的对比研究,抗自由基试验结果表明,四个化合物均具有清除自由基活性,其中7-肉桂酰橙皮素铜配合物作用较强。

橙皮素对体外培养人牙周膜细胞增殖及骨分化能力的影响

目的探讨在不同浓度橙皮素作用下,人牙周膜细胞增增殖及骨向分化能力的影响。方法体外培养A牙周膜细胞并进行组织来源鉴fuxiziliao定,取第3代细胞进行实验。MTT四唑盐比色法、ALP碱性磷酸酶检测试剂盒、Q-PCR检测成骨相关基因等方法观察不同浓度橙皮素对牙周膜细胞增殖及骨向分化的影响。结果MTT结果显示不同浓度的橙皮素可以促进PDLC增殖,ALP试剂盒检测结果表明橙皮素还可以促进PDLC的ALP活性,且橙皮素浓度为1μM时,PDLC的ALP OD值最高。Q-PCR结果显示橙皮素可上调PDLC内碱性磷酸酶及成骨转录因子mRNA的含量。结论一定浓度的橙皮素对PDLC增殖及成骨分化能力有一定的促进作用,为未来橙皮素应用于临床治疗牙周疾病提供实验室依据。

橙皮素衍生物对肝癌细胞SMMC-7721的促凋亡作用

目的以橙皮素为原型,合成了新型化合物HY-12,研究其体外对SMMC-7721细胞的促凋亡作用及机制。方法在3个时间点(24、48、72 h)采用MTT比色法观察不同浓度HY-12对肝癌细胞、肝细胞增殖的影响,计算半数抑制率(IC50)。根据结果选取了24 h,12.5×10-6,25×10-6,50×10-6mol/L 3个浓度进行下述实验。通过Annexin V/PI双染,流式细胞仪检测细胞凋亡率;制备细胞爬片,Hoechst 33342染色,在荧光倒置显微镜下观察细胞凋亡的形态学改变;采用Western blot法检测细胞凋亡相关因子Bcl-2、Bax蛋白水平的表达情况。结果 (1)MTT法显示在对肝细胞活性无显著影响的前提下,HY-12在体外可抑制SMMC-7721细胞的增殖,且具有剂量-时间依赖性;(2)流式细胞仪检测显示HY-12作用后,SMMC-7721细胞凋亡率增加,且呈浓度依赖性趋势;(3)经Hoechst 33342染色,药物处理后细胞核皱缩断裂呈现亮蓝色新月状;(4)Western blot结果显示药物处理可以使Bax蛋白表达上调,相反地Bcl-2蛋白表达下调。结论橙皮素衍生物HY-12有明显抑制肝癌细胞SMMC-7721增殖作用。其机制可能是通过调节Bcl-2、Bax表达以诱导细胞凋亡。HY-12可能成为治疗肝癌的有效化疗药物。

雪腐镰刀菌和酱油曲霉转化橙皮苷生成橙皮素单葡萄糖苷效果

为比较单一菌种与混合菌种在30℃、160 r/min条件下转化橙皮苷生成橙皮素单葡萄糖苷的效果,以橙皮苷为原料,雪腐镰刀菌和酱油曲霉为生产菌种进行液体深层发酵,采用高效液相色谱法和超高效液相色谱-质谱联用仪对单一菌种(雪腐镰刀菌、酱油曲霉)和混合菌种(雪腐镰刀菌-酱油曲霉1∶1)不同时间段发酵液中发酵产物、α-L-鼠李糖苷酶活力以及发酵液pH值进行分析。结果表明:混合菌种与单一菌种转化橙皮苷生成橙皮素单葡萄糖苷差异显著(P<0.05),混合菌种发酵产生最大酶活力(104.81 U/mL)明显高于单一菌种(24.73、26.17 U/mL),二者发酵均在酸性条件(pH 4~6)下完成。混合菌种较优的发酵效果可为综合开发橙皮提供又一途径,充分利用柑橘加工副产物的同时避免了环境污染等问题的发生。

基于指纹图谱和UPLC-MS/MS定量测定对不同产地陈皮的质量评价研究

目的 采用HPLC指纹图谱与化学计量学相结合、UPLC-MS/MS测定多黄酮成分含量的方法,测定不同产地陈皮质量,为其鉴别和质量控制提供依据。方法 采用HPLC-DAD指纹图谱检测并结合“中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012A版)”建立6个产区,49个不同批次陈皮药材(S1~S49)指纹图谱,并进行相似度评价和共有峰确认,结合聚类分析(hierarchical clustering analysis,HCA)、主成分分析(principal component analysis,PCA)、正交偏最小二乘法-判别分析(orthogonal partial least-squares discrimination analysis,OPLS-DA)等化学计量学综合分析。采用UPLC-MS/MS法建立了8个黄酮类成分柚皮素、柚皮苷、木犀草苷、川陈皮素、橙皮素、橙皮苷、橘皮素和芸香柚皮苷的含量测定方法对60批7个产地陈皮药材进行评价。结果 建立了49批不同产地陈皮药材的指纹图谱,相似度为0.864~0.999,共标定了11个共有峰,HCA分析49批陈皮明显分为4类;PCA得到5个主成分的累积方差贡献率为92.748%;OPLS-DA表明8、7、10和11号峰可能是影响陈皮药材质量的差异标志物;含量测定结果表明不同产地陈皮中黄酮类含量存在显著差异,广东新会以川陈皮素和橘皮素为主要标志成分,四川荷花池以木犀草苷为差异性成分,江西樟树以柚皮素和柚皮苷为差异性成分,广西玉林则以橙皮素、橙皮苷和芸香柚皮苷为主,重庆云阳以川陈皮素和橙皮苷为主。结论 建立了稳定性强的不同产地陈皮HPLC指纹图谱和8个黄酮类UPLC-MS/MS定量测定方法,结合化学计量学可用于陈皮药材综合评价和质量控制。

N-亚苄基橙皮素腙及类似物的合成与细胞活性

以天然橙皮素（1）为原料, 与水合肼反应得到了橙皮素腙（2）. 2分别与各种取代的芳香醛反应首次合成了8个N-亚苄基橙皮素腙3～10及6个类似物11～16. 所合成产物通过NMR, IR, HR-ESI-MS方法进行了结构确证. MTT（噻唑蓝）蛋白染色法体外抑制肿瘤增值活性测试发现化合物5, 7, 10, 16对胃癌细胞SGC-7901有显著的抑制活性.

浊点萃取联合高效液相色谱法测定血浆中的橙皮素

目的:建立浊点萃取联合高效液相色谱法测定血浆中橙皮素的方法。方法:利用非离子型表面活性剂Triton X-114胶束水溶液萃取富集橙皮素,以甲醇-0.1%磷酸水溶液(80∶20)为流动相进行洗脱,Kromasil C18为色谱柱,柱温25℃,检测波长283 nm。结果:Triton X-114浓度5%、对照品溶液加入量10μL,调pH5,萃取温度50℃,萃取3次,每次30 min,超声5min,所得萃取率最高,为86.6%;橙皮素在0.34~10.80μg·mL-1内进样量与峰面积线性关系良好,Y=94.715 X+4.328 5(r=0.999 4)。结论:浊点萃取和液相色谱联用来测定血浆橙皮素,不使用有机试剂,绿色环保,简便。

Comparative pharmacokinetics of naringin and neohesperidin after oral administration of flavonoid glycosides from Aurantii Fructus Immaturus in normal and gastrointestinal motility disorders mice

Objective: To compare the pharmacokinetics of naringin and neohesperidin after oral administration of Zhishi total flavonoid glycosides(ZSTFG) extracted from Aurantii Fructus Immaturus in normal and gastrointestinal motility disorders(GMD) mice.Methods: ZSTFG was orally given to normal and GMD mice induced by atropine or dopamine. The plasma samples were incubated with β-glucuronidase/sulfatase, the total(free + conjugated) naringenin and hesperitin were extracted with acetonitrile. The validated HPLC-MS/MS method was successfully applied to the pharmacokinetic study.Results: The results showed that, compared with the normal group, AUC0–∞, AUC0–tand Cmaxfor total naringenin and hesperitin were significantly higher(P < 0.01 or P < 0.05), while CLZ/F for total naringenin and hesperitin was significantly lower(P < 0.01) in the GMD group. Tmax, t1/2 z, MRT0-t, and MRT0-∞for naringenin were longer(P < 0.01) in the GMD group than those in the normal group.Conclusion: The results showed that there were significant differences in pharmacokinetic parameters of naringenin and hesperitin between normal and GMD groups. It was suggested that the absorption of naringenin and hesperitin was increased, and the elimination processes of naringenin and hesperitin were slower in the GMD group than the normal group. The data are of value for further pharmacological studies of ZSTFG and would be useful to provide a reference for improving the therapeutic regimen of ZSTFG in clinical trials.