和田羊睾丸支持细胞的体外培养与分离鉴定

【目的】研究和田羊睾丸支持细胞的体外培养特性。【方法】取新生和田羊睾丸组织,利用两步酶消化后,采用差速贴壁法纯化细胞进行体外培养,并通过形态学观察、HE染色、AKP染色、油红O染色、吖啶橙染色、罗丹明123染色、免疫组化染色、RTPCR和MTT法检测细胞活性及纯度。【结果】培养基中加入2.00%血清浓度的DMEM/F-12可提高支持细胞纯度,在体外培养传至20代的和田羊睾丸支持细胞形态和核型均为正常;所培养的细胞内波形蛋白表达及标志基因SCF和GDNF的表达均为阳性。【结论】本试验成功建立了和田羊睾丸支持细胞体外培养模型。

小花棘豆对和田羊血液生化指标影响

将12只和田羊随机分为3组,即对照组、试验Ⅰ组和试验Ⅱ组。试验Ⅰ组和试验Ⅱ组分别按10和20g.kg-1.d-1剂量饲喂小花棘豆干粉,饲喂至典型临床症状出现为止。攻毒前及攻毒后每隔7 d采血1次,检测和田羊血液生化指标变化。结果表明,与正常对照相比,试验组和田羊血清谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、碱性磷酸酶(AKP)、乳酸脱氢酶(LDH)活性极显著上升,α-甘露糖苷酶(AMA)活性极显著下降;血清中尿素氮(BUN)、肌酐(CR)、血糖(GLU)、总胆固醇(TC)含量均高于对照;甘油三酯(TG)和白蛋白(ALB)含量低于对照。结果表明,小花棘豆中毒对和田羊血液生化指标有显著影响,并呈现出一定时间和剂量效应关系,小花棘豆对和田羊心、肝、肾等器官有一定毒害作用。

日粮中添加芦苇对育肥期和田羊生长性能及表观消化率的影响

为分析日粮中添加不同水平的芦苇对育肥期和田羊生长性能及表观消化率的影响,本研究选取75只6月龄、体重为(30.59±3.36)kg的和田羊,采用单因素完全随机试验设计,随机分为0、10%、20%、30%和40%芦苇水平,每组15只,试验期75d。结果发现,20%和40%芦苇添加组的干物质采食量均极显著高于对照组(P<0.01);20%芦苇添加组的日增重显著高于对照组(P<0.05),10%、30%和40%芦苇添加组的日增重分别比对照组高出10.09%、5.64%和10.87%,但差异不显著(P>0.05);20%芦苇添加组的干物质、粗蛋白质、粗脂肪、中性洗涤纤维、酸性洗涤纤维、粗灰分、钙和磷的表观消化率均较高;各组的饲料单位成本与饲料总成本随着芦苇添加量的增加而增加,芦苇添加组的增重收益均高于对照组,10%芦苇添加组的经济效益最高。结果表明,日粮中添加20%芦苇时干物质采食量、日增重及干物质、粗蛋白质、粗脂肪的表观消化率均较好;考虑到饲料投入成本,日粮中添加10%芦苇经济效益最高。

小花棘豆中毒对和田羊血清蛋白和血脂的影响

试验旨在探讨小花棘豆对和田羊血清蛋白和血脂的影响,进一步揭示小花棘豆对和田羊的毒性作用机理。将12只和田羊随机分为3组,即对照组、试验Ⅰ组和试验Ⅱ组,2个试验组分别按照10和20g/kg体重的剂量饲喂小花棘豆,至典型临床症状出现为止。试验前和试验期间每7d取血,检测和田羊血清蛋白与血脂指标,并进行血清蛋白电泳。经过42d的试验,各试验组和田羊的血清总蛋白(TP)、球蛋白(GLO)、α球蛋白和高密度脂蛋白(HDL-C)均无明显变化(P>0.05);β球蛋白、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL-C)和极低密度脂蛋白(VLDL-C)含量升高,白蛋白(ALB)、γ球蛋白和甘油三酯(TG)含量下降,部分组间差异显著或极显著(P<0.05或P<0.01);中毒羊血清白蛋白与球蛋白含量的比值(A/G)在整个试验期间均有降低的趋势。小花棘豆对试验羊的肝脏具有损害作用。

和田羊小花棘豆中毒与血液生化指标的相关性研究

为了探讨和田羊血清生化指标与小花棘豆中毒(OxytropisglabraDCPoisoning,OgP)的关系,为和田羊小花棘豆中毒的诊治提供依据。分别以6只小花棘豆中毒和田羊与8只正常和田羊为研究对象,检测血清中谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、碱性磷酸酶(AKP)、乳酸脱氢酶(LDH)、α-甘露糖苷酶(AMA)活性以及尿素氮(BUN)、肌酐(CR)、血糖(GLU)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLO)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)和极低密度脂蛋白(VLDL-C)含量。采用t检验对2组资料进行差异显著性比较后,再采用简单相关分析方法对各指标与小花棘豆中毒的关系进行分析。结果表明:与正常对照相比,小花棘豆中毒家兔血清的AST、ALT、AKP、LDH、BUN、CR、GLU、TC、GLO、LDL-C和VLDL-C值升高,AMA、TG、ALB值下降,部分组间差异显著或极显著(P<0.05或P<0.01),TP和HDL-C含量差异不显著(P>0.05)。与小花棘豆中毒相关的主要因素有AMA、GLU、LDH、AKP、TG、CR,并建立回归方程:OgP=0.681-0.073AMA+0.055GLU+0.036LDH+0.041AKP。血清AMA、GLU、LDH、AKP、TG和CR对和田羊小花棘豆中毒的早期诊断、治疗、疗效观察和转归判断具有重要意义。

小花棘豆中毒对和田羊卵巢损伤的研究

以小花棘豆(Oxytropis glabra DC)中毒和田羊母羊为研究对象,通过复制和田羊小花棘豆亚慢性中毒模型,对其卵巢的病理变化和超微结构变化进行观察,检测其氧化应激和细胞凋亡情况,Real-Time q PCR法检测繁殖基因mRNA的表达量,Western Blot检测其蛋白表达量。结果发现,小花棘豆中毒和田羊卵巢指数极显著升高(P<0.01),而且卵巢表面卵泡数极显著下降(P<0.01),镜检表明中毒和田羊卵巢中初级卵母细胞溶解、消失,间质血管扩张,原位末端标记(TUNEL)发现中毒和田羊卵巢细胞和卵泡颗粒细胞发生凋亡,中毒和田羊卵巢Bax基因mRNA表达量极显著升高(P<0.01),Bcl-2基因mRNA表达量极显著下降(P<0.01)。小花棘豆中毒和田羊血清和卵巢组织中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和过氧化氢酶(CAT)活性极显著下降(P<0.01),丙二醛(MDA)含量极显著升高(P<0.01);血清中雌二醇(E2)和孕酮(P4)含量均极显著下降(P<0.01)。卵巢中FSHR和LHR mRNA表达量均极显著下降(P<0.01),其蛋白表达量均显著下降(P<0.05)。研究结果表明,小花棘豆中毒可导致和田羊卵巢病理性损伤,抑制相关繁殖基因表达,促使细胞凋亡,从而抑制和田羊机体生殖功能。

小花棘豆中毒对和田羊血液学指标的影响

将12只和田羊随机分为3组,即对照组、试验Ⅰ组和试验Ⅱ组。试验Ⅰ组和试验Ⅱ组每天分别按10g/kg和20g/kg的剂量饲喂小花棘豆干粉,饲喂至典型临床症状出现为止。攻毒前及攻毒后每隔7d采血1次,检测和田羊血液学指标的变化。结果显示,与正常对照相比,试验组和田羊血液中嗜酸性粒细胞百分比(EOS%)、嗜碱性粒细胞百分比(BASO%)、淋巴细胞百分比(LYM%)、红细胞数密度(RBC)、红细胞压积(HCT)、血红蛋白(HGB)、平均红细胞体积(MCV)、平均红细胞血红蛋白质量(MCH)、血小板数密度(PLT)、血小板平均体积(MPV)和血小板压积(PCT)下降;白细胞数密度(WBC)、单核细胞百分比(MONO%)、嗜中性粒细胞百分比(NEU%)和红细胞分布宽度(RDW)升高,部分组间差异显著或极显著(P<0.05或P<0.01);平均红细胞血红蛋白质量浓度(MCHC)和血小板平均分布宽度(PDW)与对照差异不显著(P>0.05)。中毒羊淋巴细胞出现空泡和蓝黑色颗粒,红细胞大小不均和异形改变。结果表明,小花棘豆中毒对和田羊血液学指标有显著影响,可引起羊贫血及机体免疫力下降。

小花棘豆中毒对和田羊脑组织α-甘露糖苷酶的影响

探讨小花棘豆中毒对和田羊脑组织α-甘露糖苷酶(AMA)的影响,进一步揭示小花棘豆的毒性作用机理。将12只和田羊随机分为3组,即对照组、试验Ⅰ组和试验Ⅱ组。试验组每日分别按每千克体质量10 g和20 g的剂量饲喂小花棘豆,饲喂至典型中毒症状出现为止。试验第35天屠宰后每组采集试验羊的全脑,检测和田羊不同脑区AMA活性及表达的变化。结果显示和田羊脑组织中高尔基体α-甘露糖苷酶Ⅱ(AMA1)和溶酶体α-甘露糖苷酶(AMA2)均有表达,但各试验组表达转录水平与对照组差异显著,试验Ⅰ组和田羊各脑区的AMA2的表达均与对照组差异不显著(P>0.05),试验Ⅱ组和田羊小脑AMA2的表达显著低于对照(P<0.05),其余脑区AMA2的表达均与对照组差异不显著(P>0.05);试验Ⅱ组和田羊小脑和丘脑AMA1的表达极显著低于对照(P<0.01),大脑AMA1的表达显著低于对照(P﹤0.05);试验Ⅰ组和田羊小脑AMA1的表达显著低于对照(P<0.05),其余脑区AMA1的表达均与对照组差异不显著(P>0.05)。结果表明不同剂量小花棘豆均可降低和田羊脑组织AMA活性及其mRNA表达量,小脑、大脑和丘脑是其主要作用的靶区,小花棘豆毒性成分可通过影响AMA活性导致和田羊发生中毒反应。

小花棘豆中毒对和田羊瘤胃溶纤维丁酸弧菌的影响

通过研究小花棘豆(Oxytropis glabra DC)对和田羊瘤胃溶纤维丁酸弧菌数量的影响,探讨小花棘豆中毒对绵羊纤维素降解效率的影响。将12只和田羊随机分为对照组、试验Ⅰ组和试验Ⅱ组。试验组分别按10g/kg和20g/kg的剂量饲喂小花棘豆,至典型临床症状出现为止。攻毒前及攻毒后每隔7d取瘤胃液,利用巢式PCR技术检测瘤胃液中溶纤维丁酸弧菌数量的变化,并检测甘油三酯消失率和纤维素降解率。结果显示,与对照组相比,试验羊瘤胃液中溶纤维丁酸弧菌数、甘油三酯消失率和纤维素降解率均极显著下降。试验表明,小花棘豆中毒可显著影响和田羊瘤胃溶纤维丁酸弧菌数量和纤维素降解能力,且具有一定的时间和剂量效应关系。

和田羊品种资源现状与保护利用措施

和田羊是我国优良的地毯毛用品种羊,因个体小、产量低,加之羊毛市场价格低等原因造成和田羊品种逐年退化,牧民养殖和田羊的积极性下降。通过调查分析和田羊发展现状、存在的问题,提出和田羊品种保护开发利用措施。

新疆4种绵羊羊毛氨基酸含量测定

为了研究遗传及环境对羊毛生产性状的影响,利用高效液相色谱法测定了新疆地区和田羊、卡拉库尔羊、多浪羊、中国美利奴羊4个绵羊品种羊毛中的17种氨基酸含量,探索不同品种绵羊间和同一品种不同品系绵羊间羊毛氨基酸含量的差异。结果表明,和田羊羊毛的氨基酸总含量显著高于多浪羊羊毛,差异显著(P<0.05);其他品种间氨基酸总量差异不显著。多浪羊羊毛中的Asp、Ser、Glu、Arg、Thr、Ala、Pro、Val、Lys、Ile、Leu、Phe等氨基酸含量均低于其他品种;卡拉库尔羊羊毛只有Cys含量高于其他品种,Ser、Gly、Thr、Pro、Tyr等氨基酸含量均低于其他品种。各品种羊毛的螺旋比值(促螺旋氨基酸含量/阻螺旋氨基酸含量),中国美利奴为0.90,卡拉库尔羊为0.79,和田羊为0.77,多浪羊为0.75。结果表明,和田羊氨基酸总含量高于其他品种,中国美利奴螺旋比值高于其他品种,卡拉库尔羊Cys含量高于其他品种。

和田羊mtDNAD-loop区遗传多样性研究

为研究和田羊的遗传多样性,应用PCR扩增和测序技术,对民丰、于田、策勒、洛浦4个县和田羊群体的mtDNA D-loop序列进行了研究,并用DNAMAN软件对4个县和田羊进行了聚类分析。结果表明:民丰、于田两县和田羊mtDNA D-loop序列长度为1 184 bp,策勒、洛浦两县和田羊mtDNA D-loop序列长度为1 190 bp,4个县和田羊mtDNA D-loop均存在4个75 bp的重复序列;民丰县、于田县和田羊遗传距离较近,洛浦县、策勒县和田羊遗传距离较近,初步认为和田地区4个县和田羊可分为2类群体。

多浪羊与和田羊初情期启动过程中生殖激素的变化规律

【目的】检测多浪羊与和田羊初情期启动过程中血清4种生殖激素(E2,FSH、LH、P4)的变化规律,为研究绵羊的初情期启动机制提供理论依据。【方法】利用公羊试情等方法对40只多浪羊与40只和田羊初情期年龄进行了鉴定;利用放射免疫分析技术对这2种绵羊2月龄、3月龄、初情期前、初情期(早期、中期、后期)、初情期后血清4种生殖激素的变化规律进行测定。【结果】多浪羊达到初情期的年龄约在4月龄,和田羊达到初情期的年龄约在8月龄。在幼年期至初情期的发育过程中,2种绵羊4种生殖激素变化趋势相似。多浪羊2月龄、3月龄血清E2浓度均显著高于和田羊(P<0.05);多浪羊3月龄(初情期前)、初情期早期、中期血清FSH浓度均显著高于和田羊(P<0.05),初情期后期血清P4浓度显著高于和田羊(P<0.05)。多浪羊初情期后血清FSH、LH、P4浓度均显著高于和田羊(P<0.05)。【结论】多浪羊初情期前高水平的E2、FSH可能与其初情期启动早相关,初情期后高水平的FSH浓度可能与其排卵数多、多胎性相关。

小花棘豆中毒对和田羊母羊繁殖器官的影响

试验旨在探讨小花棘豆(Oxytropis glabra DC)中毒对和田羊母羊繁殖器官指数、性激素水平和相关基因mRNA表达量的影响。以小花棘豆中毒和田羊母羊为研究对象,采集血清后屠宰,采集试验羊的丘脑、垂体和卵巢组织,测定其脏器系数,检测血清中促性腺激素释放激素(GnRH)、促卵泡素(FSH)、促黄体素(LH)、雌二醇(E2)和孕酮(P4)含量的变化,并检测各组织中相关繁殖基因的表达。结果显示,小花棘豆中毒和田羊母羊丘脑、垂体和卵巢指数均极显著升高(P<0.01),且卵巢表面卵泡数显著下降(P<0.05),HE染色表明丘脑神经元细胞固缩、浓染;垂体中细胞核变形、浓染,胞浆减少;卵巢中初级卵母细胞溶解、消失,间质血管扩张。小花棘豆中毒和田羊母羊血清中GnRH、FSH、LH、E2和P4含量均极显著下降(P<0.01),丘脑中Kiss-1、GPR54、ERαmRNA,垂体中GnRHR mRNA和卵巢中FSHR、LHR mRNA表达量均极显著下降(P<0.01)。结果表明,小花棘豆毒性成分可通过丘脑—垂体—性腺轴影响和田羊母羊的生殖系统。

新疆和田羊小花棘豆中毒实验室检测

为深入研究小花棘豆对绵羊的影响,收购自然放牧条件下中毒的和田羊2只,进行临床症状、血液项目、酶类含量、微量元素及组织病理学切片等方面实验研究,并与正常和田羊进行对比。结果表明,中毒和田羊与正常和田羊相比,红细胞数量减少;天冬氨酸转氨酶(AST)和碱性磷酸酶(AKP)含量升高;Cu、Mn含量差异显著(P<0.05),Fe、Zn含量差异不显著(P>0.05);各组织器官形态病变显著。

和田羊和小尾寒羊尾脂的显微和超微结构比较

试验旨在探究不同品种羊尾脂的显微、超微结构特点,并比较其各自特点和异同,从而分析不同品种羊尾脂沉积规律的差异,探究羊尾部脂肪形成基因调控网络的结构基础。试验采集15月龄成年雄性和田羊的尾部脂肪、小尾寒羊的尾部脂肪,通过电子显微镜和光学显微镜相结合的研究方法,观察并比较其显微、超微结构。结果表明,和田羊尾脂脂肪细胞较小,内质网呈螺旋状,线粒体分布于细胞内边缘,膜外有"绒毛状"结构和散在的黑色颗粒;小尾寒羊尾脂脂肪细胞体积大,细胞间质较宽,胞内有丰富散在的小脂滴,内质网片状结构清晰,线粒体散在分布。研究显示,和田羊和小尾寒羊尾脂脂肪细胞显微、超微结构具有显著差异。

埋植褪黑激素对非繁殖季节和田羊胚胎移植效果的影响

为了探究外源性褪黑激素对非繁殖季节和田羊胚胎移植效果的影响,采取随机区组设计试验,选择30只和田羊成年母羊随机分为6组(供体羊和受体羊各3组),5只和田羊成年公羊单独为1组做为配种公羊,分别给予3组供体羊和3组受体羊褪黑激素埋植、孕激素海绵栓结合促性腺激素、褪黑激素埋植结合孕激素海绵栓和促性腺激素处理。结果表明:褪黑激素埋植结合孕激素海绵栓和促性腺激素处理显著提高了非繁殖季节和田羊母羊的排卵率(P>0.05),单纯埋植褪黑激素并未提高非繁殖季节和田羊母羊的排卵率。说明外源性的褪黑激素能够协同孕激素海绵栓和促性腺激素处理促进非繁殖季节和田羊母羊的排卵。

新疆南部和田羊、卡拉库尔羊、多浪羊MSTN基因的真核表达

旨在构建新疆南部4个地方品种(品系)绵羊,即平原型和田羊(HP)、山区型和田羊(HS)、卡拉库尔羊(KL)和多浪羊(DL)的肌生成抑制素(myostatin,MSTN)基因与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的融合表达质粒并在真核细胞中表达。从4种绵羊骨骼肌中提取总RNA,逆转录获得c DNA,PCR扩增MSTN后与p MD18-T载体连接构建重组质粒并测序分析,然后将MSTN(HP、HS、DL和KL)基因插入到融合表达载体p EGFP-N1中,构建真核融合表达重组质粒p EGFP-N1-MSTN,在细胞铺满80%时用脂质体法转染到CHO中,观察EGFP与MSTN蛋白在CHO细胞内融合表达的绿色荧光。结果显示,平原型和田羊、山区型和田羊、卡拉库尔羊和多浪羊MSTN的ORF序列都是1 125 bp(不含终止密码子),编码375个氨基酸;与Gen Bank中MSTN序列比较,与田羊(HS、HP)没有差异;卡拉库尔羊有2个碱基差异,造成2个氨基酸变异;多浪羊有6个碱基的差异,造成4个氨基酸变异。成功构建EFGP和MSTN共表达重组质粒并在真核细胞CHO中得以表达。

和田羊体重体尺、血液生理生化指标及其相关

【目的】从血液生理生化方面研究和田羊品种的特性,探讨和田羊血液生理生化指标与体重体尺性状的关系。【方法】测定7月龄、10月龄和田羊体重体尺及血液生理生化指标,并对其相关性进行分析。【结果】研究表明,和田羊7月龄与10月龄时,体高与体重,体高与胸围呈显著正相关(P<0.05)。性别、年龄对某些血液生理生化指标的影响显著,7月龄、10月龄公羊的红细胞压积(HCT)均显著高于母羊(P<0.05),7月龄与10月龄公羊的碱性磷酸酶(ALP)均高于母羊,但没有达到显著水平(P>0.05);10月龄时,体重与总胆固醇(TC)、体高与谷草转氨酶(AST)、总胆红素(TC)呈显著正相关(P<0.05),管围与甘油三酯(TG)、碱性磷酸酶(ALP)呈显著负相关(P<0.05)。【结论】和田羊体重、体尺及血液生理生化指标之间有一定的相关性,可为和田羊饲养管理及早期选种提供参考。

和田羊KRT31基因遗传多态性相关分析

为探讨KRT31基因是否是影响和田羊羊毛细度的候选基因,试验以随机采集的400只和田羊个体的血样为材料,利用PCR-SSCP、DNA测序等技术研究了和田羊KRT31基因的多态性及其与羊毛细度的关联性。结果表明:和田羊KRT31基因具有多态性,存在3种基因型:EE、EF和FF,且处于Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05),多态信息含量(PIC)为0.369 8,属于中度多态(0.5>PIC>0.25)。KRT31基因编码区片段在碱基序列52 bp(C→T)处发生突变。关联分析表明:和田羊不同基因型之间的羊毛细度差异均不显著(P>0.05)。