高GC含量的鳜鱼rRNA基因家族的克隆

动物rRNA基因是一种GC含量较高、结构复杂的重复序列。该研究结合亲缘生物法生物信息学技术,经反复摸索后选用LA PCR法即LA PCR Taq酶结合GC缓冲液来扩增鳜鱼复杂的rRNA基因重复序列,经测序鉴定最终克隆了鳜鱼的3个rRNA基因及其2个间隔序列。分析了鳜鱼与相关动物的rRNA基因序列的同源性和进化关系。探索了克隆复杂DNA序列时引物设计的特别规则、反应体系的改进、DNA聚合酶的选用、循环参数的调整等措施。

PCR重叠延伸法结合分段克隆技术构建高GC含量基因突变载体

目的:构建人类KAP-1基因定点突变载体,为研究该基因的功能奠定基础。方法:综合运用PCR重叠延伸法和分段定向克隆技术。结果:DNA测序结果表明定点突变载体构建成功。结论:成功构建高GC含量(局部高达80.50%),全长为2 500bp的人类KAP-1基因定点突变载体pCMV6-En-try-KAP-1,为全面深入研究KAP-1基因的功能奠定了基础。

GC-MS法对广西莪术不同种质类型高挥发油含量的测定

用水蒸气蒸馏方法提取挥发油,用GC-MS对广西莪术(Curcuma kwangsiensis)不同种质类型高挥发油含量的成分进行分析,测定其所含的挥发油成分与各成分含量。结果表明,广西莪术不同种质类型高挥发油类型既存在共有挥发油成分,又存在特有的挥发油成分,同一成分不同种质类型所得的质量分数各不相同,检出色谱峰的个数差别也较大,共检出31种化合物。经分析得出C-108、D-16、D-11、D-3共4个优良品种,不同含量的挥发油与其所含的化学成分和有效成分存在一定相关性,可为莪术挥发油的质量控制及选育广西莪术优良新品种提供科学依据。

小麦种子过氧化物酶基因wp1的克隆及在大肠杆菌中的表达

【目的】克隆小麦种子过氧化物酶基因wp1,并利用原核系统表达纯化。【方法】通过RT-PCR从小麦未成熟种子中扩增wp1基因cDNA,构建His-tag和MBP融合表达载体,并在大肠杆菌中进行表达。使用直链淀粉亲和层析获得MBP-WP1融合蛋白,并以ABTS为底物检测酶活性。【结果】获得的wp1基因cDNA编码一种358个氨基酸残基的蛋白产物,其序列与大麦BP1相似性高达89%;空间结构预测结果表明,小麦WP1属于第三类过氧化物酶,具有该家族成员典型的血红素和钙离子结合位点;His-Tag融合的WP1主要以包涵体形式存在,而MBP融合的WP1主要以可溶形式存在,表达量分别达到总蛋白的18.2%和34.6%;纯化获得的MBP-WP1融合蛋白可检测到过氧化物酶活性。【结论】使用原核系统可高效表达出可溶性的、具有部分活性的WP1蛋白。

应用复合增强剂扩增人巨细胞病毒pp65全基因

在PCR过程中 ,模板GC含量过高是一个不利因素。如果设计扩增片段较长 ,则进一步增加了PCR扩增的难度。解决这一问题对于以PCR成功获取富含GC的长基因有非常重要的意义。以人巨细胞病毒pp65全基因 (约 1 95 0bp ,GC %为 67%)为例 ,在PCR系统中测试不同添加剂(甘油、乙醇、DMSO、甜菜碱等 )及各种组合 ,摸索扩增目的基因的最佳条件。结果发现 :无或单一的添加剂都不能获得目的基因片段 ,只有当同时使用DMSO和甜菜碱 ,并在适当浓度时才能够获得特异产物。在PCR系统中包含复合增强剂能有助于高GC %、长基因片段的扩增 。

超高压条件下烟叶含水率变化对香味成分的影响

为探讨超高压条件下烟叶含水率对香味成分的影响,将烟叶在500 MPa压力、25℃、烟叶含水率为12%～28%条件下处理20 min后,利用同时蒸馏萃取和毛细管气相色谱法测定烟叶香味成分的变化,并进行了感官质量评价.结果表明：烟叶香味物质总量在烟叶含水率为24%时达到最大值,然后开始下降;酮类物质的变化与香味物质总量的变化趋势相似;而β-苯乙醇、苯甲醇、丁香酚和芳樟醇等香味成分随着含水率的增加而持续增加.感官评价表明：烟叶含水率为24%时品质亦最佳.超高压处理可以明显改善烟叶的内在品质,对烟叶陈化加工具有潜在的应用价值.

沙棘中白雀木醇表征方法及其分布规律

【目的】本论文基于一种高效、准确白雀木醇表征方法,对沙棘资源中的白雀木醇进行准确定量,探究沙棘资源中白雀木醇的含量变化规律,为沙棘中白雀木醇的开发利用提供参考。【方法】对比了气相色谱法(GC)和高效液相色谱法(HPLC)两种测试手段的优缺点,采用较优的液相色谱测试方法对包括沙棘果、沙棘籽、沙棘叶在内的沙棘资源中白雀木醇含量变化进行了研究。【结果】采用液相色谱-蒸发光散射法测定沙棘资源中的白雀木醇,该法呈现良好的线性关系(R2=0.998 5),且精密度高(RSD≤0.53%)、准确度高(RSD≤1.16%)、重复性好(RSD≤1.71%)。研究结果显示,沙棘中不同部位的白雀木醇含量差异显著(P <0.01),其中沙棘叶中白雀木醇含量最高(59.73 mg/g,干叶),其次为沙棘果肉(2.19 mg/g,鲜果肉)和沙棘籽(0.39 mg/g,鲜籽);收集5月份至9月份不同生长阶段的沙棘叶,研究表明,随着叶子生长白雀木醇含量呈现为逐渐升高趋势,且7月份至8月份期间增速最大,9月份含量积累至最高(64.79 mg/g,干叶)。【结论】液相色谱-蒸发光散射法检测白雀木醇含量,操作简便、并且精密度、准确度高、重复性好;沙棘叶中白雀木醇含量较果实丰富,沙棘叶中白雀木醇含量9月份累积至最高,本研究可为沙棘资源中白雀木醇的开发应用提供有效数据支撑。

不同熬煮方法对鸡骨汤风味物质的影响

本文分析了常压和高压两种不同的熬煮方法对鸡骨汤氨基酸含量的影响,并采用顶空固相微萃取结合气相色谱-质谱联用技术(SPME-GC-MC)测定分析了常压和高压两种不同熬煮方法对鸡骨汤中挥发性风味物质的影响。结果表明:高压熬煮所得鸡骨汤中的总氨基酸和游离氨基酸含量均显著高于常压熬煮的鸡骨汤(p<0.05);利用SPMEGC-MS检测技术在高压熬煮及常压熬煮鸡骨汤中分别检测到62和54种挥发性风味物质;两种熬煮方法得到的鸡骨汤风味物质构成总类基本相同,但是含量分布存在差异;两种熬煮方式感官评分差异不显著(p<0.05);高压熬煮是一种可行的熬煮方法。

索氏提取-气相色谱法测定高含水率土壤中21种酚类化合物

高含水率土壤样品与无水硫酸钠混合均匀后,以二氯甲烷-正己烷(2+1)混合液为提取剂进行索氏提取,提取液经氢氧化钠溶液净化,再经酸化后由二氯甲烷-乙酸乙酯(4+1)混合液提取,最后进行浓缩,采用气相色谱法测定浓缩液中21种酚类化合物的含量。用HP-5色谱柱(30m×0.25mm,0.25μm)分离,氢火焰离子化检测器检测。21种酚类化合物的质量浓度均在1.0~100.0mg·L^-1内与其对应的峰面积呈线性关系,检出限为0.01~0.07mg·kg^-1。以空白样品为基体进行加标回收试验,所得回收率为71.4%~95.1%,测定值的相对标准偏差(n=6)为1.0%~11%。

高灵敏测定市售饮料酒中的矿物油污染物

采用液液萃取和高效液相色谱-气相色谱联用建立了白酒、啤酒和葡萄酒中微量饱和烃矿物油(mineral oil saturated hydrocarbons,MOSH)和芳香烃矿物油(mineral oil aromatic hydrocarbons,MOAH)的高灵敏度测定方法,方法的定量限为0.05 mg/L,加标回收率为87%~107%,相对标准偏差为1.9%~4.9%。应用该方法调查了市售17个饮料酒(其中白酒9个,啤酒和葡萄酒各4个)中的矿物油污染情况。结果表明:所有啤酒和葡萄酒样品均未检出矿物油,但有5个白酒被检出MOSH,质量浓度为0.06~2.74 mg/L;其中2个检出MOAH,分别为0.11和1.24 mg/L;这些阳性样品的矿物油含量与酒精度呈正相关,其部分污染可能来自包装金属罐。

高GC含量基因NADK2的扩增及其真核表达载体的构建

在构建线粒体烟酰胺腺嘌呤二核苷酸激酶(mitochondrial nicotinamide adenine dinucleotide kinase,NADK2)真核表达载体时,该文发现,使用Ex Taq DNA聚合酶扩增无法得到其编码区域全长,5′端缺失一段DNA片段。对其cDNA序列进行分析发现,NADK2编码区GC含量不均衡。起始密码子附近GC含量最高可达92.5%,而3′端终止密码子附近GC含量最低只有27.5%。之后,使用LA Taq及GC缓冲液进行扩增,得到了NADK2基因ORF(open reading frame)全长,并克隆入真核表达载体。该文结果对类似高GC含量DNA片段的PCR扩增有一定的提示作用。

一种新的用于提高lea3基因扩增特异性和产量的增强剂(英文)

在对目的DNA序列尤其是高GC含量的片段进行PCR扩增的时候,经常需要对一些试验条件进行优化。在一定条件下,二甲基亚砜、甲酰胺、甘油、NP-40和Tween20等可以在某种程度上提高PCR的特异性和效率。我们在对禾本科lea3基因进行分离克隆时发现了一种新的可以提高PCR产量和特异性的物质——极高热稳定单链结合蛋白(ETSSB),研究发现在每50μlPCR反应体系中加入200ng的ETSSB,可以有效地抑制DNA片段的非特异性条带的产生,并可以提高目的片段的产量。

不同气氛下高硫焦热解过程硫形态研究

在He气氛和CO_2气氛下,研究高硫焦的热解行为。采用TG-IR-GC/MS联用仪分析了热解过程中气体的硫元素形态变化,同时研究了热解过程中硫含量的变化。结果表明:热解过程以400℃和700℃为分界点,主要分为3个阶段,热解过程中有H_2O、CO_2、CH_4等小分子气体以及脂肪族分子逸出。部分噻吩会被氧化为砜基逸出,高温状态下还会被氧化成磺酸、亚磺酸类物质。CO_2气氛能促进硫的释放,并使开始热解温度提前,其包含的含硫化合物主要是磺酸和砜类有机硫化物。升温至1 000℃时,与He气氛相比,CO_2气氛下硫逸出百分比和失重百分比都较高。