基于GFP观察鼠伤寒沙门氏菌HilD介导ssrAB表达的初探

目的以绿色荧光蛋白(GFP)标记的鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium,S.Typhi)为研究对象,秀丽隐杆线虫为模式生物,初步探究体内环境下HilD对ssrAB表达的调控作用。方法通过基因工程技术分别构建携带gfp基因的亲本株S.Typhi(ssrAB-gfp+pcDNA3.1)、hilD基因缺失株S.Typhi(ΔhilD+ssrAB-gfp+pcDNA3.1)和hilD基因回补株S.Typhi(ΔhilD+ssrAB-gfp+pcDNA3.1-hilD)标记菌。利用荧光显微技术,观察3株标记菌在饲喂感染秀丽隐杆线虫体内外的GFP表达状况及其定殖分布,并通过ImegJ软件进行荧光强度的比较。结果成功构建的3株标记菌在秀丽隐杆线虫体内外均呈现绿色荧光,荧光强度为S.Typhi(ssrAB-gfp+pcDNA3.1)高于S.Typhi(ΔhilD+ssrAB-gfp+pcDNA3.1-hilD)和S.Typhi(ΔhilD+ssr AB-gfp+pcDNA3.1),S.Typhi(ΔhilD+ssrAB-gfp+pcDNA3.1-hilD)高于S.Typhi(ΔhilD+ssrAB-gfp+pcDNA3.1);3株标记菌在线虫体内主要定殖分布于口咽部和肠道中,荧光强度为口咽部较肠道高。结论GFP在鼠伤寒沙门氏菌中得到稳定表达,感染秀丽隐杆线虫后同样获得GFP的稳定表达,且在线虫的口咽部和肠道具有良好的定殖分布,首次初步证明体内环境下HilD介导ssrAB表达,但并非为单一的调控作用。

HILDE LYSIAK 热爱凶杀现场的9岁萝莉

儿童节又到了。当然,我很清楚,正在阅读这篇文章的你只能扮成长不大的巨婴,喊一声＂我就是宝宝,宝宝要过儿童节!＂提醒你一下,别因为失去了过节的权利,就把童年的某些重要的事儿一键删除了。比如那篇人人都写过的经典作文《我的理想》,你在那篇文章中写下了怎样的理想呢？Hilde Lysiak,生活在美国宾夕法尼亚州的不知名小镇上,是一名9岁的小萝莉。她的理想是成为一名记者。事实上,她在7岁那年就创办了自己的新闻网站,8岁创办实体报纸,同时掌握了一批为她所用的＂线人＂。

An interview with Hilde Hasselgard

University of Oslo, Norway13:30-15:15, 27 June, 2018(XLX: Xiuling Xu;HH: Hilde Hasselg?rd)XLX: When did you initially know about corpora and corpus linguistics?HH: I had Stig Johansson as my teacher already when I was a master student in the late 1980 s.

鼠伤寒沙门菌转录调控因子HilD的蛋白纯化及与hilA启动子DNA复合物晶体培养

目的本研究将获取鼠伤寒沙门菌毒力转录调控因子HilD的蛋白,培养HilD蛋白晶体,为进一步分析HilD功能机制和靶向胞内沙门菌药物研发奠定基础。方法以鼠伤寒沙门菌转录调控因子HilD生物信息学分析为基础,使用鼠伤寒沙门菌14028S菌株作为模板进行分子克隆,构建hilD-pGl01重组质粒,使用原核体系表达HilD,通过镍柱亲和层析柱和透析获取纯化蛋白。EMSA实验验证HilD活性。使用晶体培养试剂盒进行晶体培养。结果成功构建了HilD原核表达系统,HilD是一种碱性蛋白,在蛋白提取过程中需要将缓冲液的pH值维持在7.0左右以维持HilD蛋白的稳定性,还需添加2%甘油和2%蔗糖进行保护。hilA能够稳定HilD蛋白,有利于晶体的生长。结论成功获取HilD纯化蛋白,实验证明具有生物活性,培养出HilD与hilA启动子DNA的复合物晶体,复合物的培养为HilD结构解析奠定了基础。

肠炎沙门氏菌ssrAB、hilA、hilD基因缺失菌株的构建及其生物学特性

【背景】沙门氏菌(Salmonella)是重要的人畜共患病原菌,由于耐药菌株的不断出现,新型防治方法的研究迫在眉睫。【目的】探究ssrAB、hilA、hilD基因对肠炎沙门氏菌致病作用的影响,筛选安全可靠的沙门氏菌减毒活疫苗或载体用菌株。【方法】采用自杀性质粒介导的同源重组技术,分别构建ssrAB、hilA、hilD单基因缺失株(ΔssrAB、ΔhilA、ΔhilD)、双基因缺失株(ΔssrABhilA、ΔssrABhilD、ΔhilAhilD)和三基因缺失株(ΔssrABhilAhilD),并比较上述缺失菌株与亲本菌株间生物学特性的差异。【结果】基因缺失后菌株的生长速率无显著变化(P>0.05);除ΔhilD生物膜形成能力最强外,其他基因缺失菌株生物膜形成能力变化不显著(P>0.05);ΔssrABhilAhilD和ΔssrABhilA的LD50值最高,ΔssrAB、ΔhilA、ΔhilD次之;亲本菌株引起的小鼠十二指肠的病变程度较所有缺失菌株明显严重;在所有缺失菌株中,ΔssrABhilAhilD对HeLa细胞的黏附力最低,ΔhilD在小鼠体内的定殖率最高;而机体分泌IL-1、IL-18、IFN-γ的能力与沙门氏菌ssrAB、hilA、hilD基因无显著相关性(P>0.05)。【结论】构建的7株基因缺失株中,ΔssrAB、ΔhilA、ΔhilD、ΔssrABhilA和ΔssrABhilAhilD有致病力低、生长速率良好、能有效刺激细胞因子产生等特性,具备作为沙门氏菌减毒活疫苗或载体的潜质。

急性阑尾炎腹腔镜手术患儿遵医行为现状及影响因素分析

目的 探讨急性阑尾炎(acute appendicitis, AA)腹腔镜手术患儿遵医行为现状及影响因素。方法 选取2021年1月-2023年9月在南京医科大学附属儿童医院行AA腹腔镜手术的763例患儿及家长为研究对象。采用一般情况调查表、遵医行为量表、社会支持评定量表(Social Support Rating Scale, SSRS)对患儿及家长进行调查,根据患儿遵医行为量表评分,将患儿分为遵医行为良好组和遵医行为不良组,采用单因素和多因素Logistic回归分析影响患儿遵医行为的因素。结果 研究样本共有763例患儿及家长,实际调查有效例数为680例;680例患儿中,有197例遵医行为良好,483例遵医行为不良,不良率为71.03%;患儿遵医行为中,合理饮食评分最高,自我管理评分最低。两组患者的患儿年龄、家长年龄、文化程度、人均月收入、职业状态、婚姻状态、SSRS评分比较差异具有统计学意义(P<0.05)。患儿年龄小、家长年轻、家长文化程度低、SSRS评分<41.73分是影响患儿遵医行为的独立危险因素(P<0.05)。结论 AA腹腔镜手术患儿遵医行为普遍较差,其独立危险因素有患儿年龄小、家长年轻、家长文化程度低、SSRS评分低,对以上因素进行干预,有助于改善患儿遵医行为。

鼠伤寒沙门氏菌hilD基因缺失株的免疫效果评价

为探究鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)hilD基因缺失株的免疫效果,本研究利用鼠伤寒沙门氏菌亲本株S.T(pcDNA3.1)、hilD基因缺失株S.T(ΔhilD+pcDNA3.1)和回补株S.T(ΔhilD+pcDNA3.1-hilD)免疫小鼠,通过比较小鼠的血清Ig G抗体效价、血清抑菌能力、白细胞吞噬细菌能力、CD4^(+)/CD3^(+)与CD8^(+)/CD3^(+)比率、相关细胞因子(IL-4,IL-10,IFN-γ,TNF-β,MCP-1)水平、脾淋巴细胞增殖指数SI和肠粘膜s Ig A抗体水平等指标,以评价S.T(ΔhilD+pcDNA3.1)的免疫效果。结果显示,与S.T(pcDNA3.1)和S.T(ΔhilD+pcDNA3.1-hilD)相比,S.T(ΔhilD+pcDNA3.1)免疫小鼠后,除白细胞吞噬细菌能力、CD4^(+)/CD3^(+)与CD8^(+)/CD3^(+)比率优于S.T(pcDNA3.1)与S.T(ΔhilD+pcDNA3.1-hilD)外,血清IgG抗体效价、血清抑菌能力、相关细胞因子水平(IL-4,IL-10,IFN-γ,TNF-β,MCP-1)、脾淋巴细胞增殖指数SI及肠粘膜s Ig A抗体水平均显著优于S.T(pcDNA3.1)与S.T(ΔhilD+pcDNA3.1-hilD);小鼠经二次免疫后攻毒,S.T(ΔhilD+pcDNA3.1)对鼠伤寒沙门氏菌提供的免疫保护率可达100%,且小鼠各脏器损伤程度最低;对肠炎沙门氏菌提供的交叉免疫保护率也达到60%。结果表明S.T(ΔhilD+pcDNA3.1)免疫小鼠后能诱导产生良好的体液免疫、细胞免疫和黏膜免疫,在攻毒后能提供良好的免疫保护力及交叉免疫保护力。

鼠伤寒沙门氏菌hilD基因缺失突变株的构建及其表型分析

为研究鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium,S.T)hilD基因的功能,通过同源重组方法构建S.T hilD基因缺失菌株S.T(ΔhilD),电转化法构建hilD基因回补株S.T(ΔhilD+pcDNA3.1-hilD)、hilD基因缺失株空质粒菌S.T(ΔhilD+pcDNA3.1)和亲本株空质粒菌S.T(pcDNA3.1),进而对S.T(ΔhilD+pcDNA3.1)与S.T(pcDNA3.1)、S.T(ΔhilD+pcDNA3.1-hilD)的表型进行比较。结果显示,S.T(ΔhilD+pcDNA3.1)和S.T(ΔhilD+pcDNA3.1-hilD)遗传性状稳定;三株菌的生长速率无显著差异(P>0.05);S.T(ΔhilD+pcDNA3.1)的生物膜形成能力显著高于S.T(pcDNA3.1)和S.T(ΔhilD+pcDNA3.1-hilD)的(P<0.05);而对于小鼠的致病力及对Hela细胞的黏附力和侵袭力,S.T(ΔhilD+pcDNA3.1)均显著低于S.T(pcDNA3.1)和S.T(ΔhilD+pcDNA3.1-hilD)(P<0.05)。表明S.T hilD基因的缺失不影响其正常生长代谢过程,但毒力减弱。

肠炎沙门菌调控基因hilD与hilA的体外表达规律研究

利用原核表达载体pCold I构建肠炎沙门菌转录调控蛋白HilD和HilA的重组表达菌,并采用Western-blot技术检测两者在体外培养条件下的表达规律。结果表明:成功构建了重组表达大肠埃希菌(E.coli)BL21(pCold I-hilD)和E.coli BL21(pCold I-hilA),经IPTG诱导得到了重组表达的rHis-HilD和rHis-HilA蛋白。将重组表达的蛋白免疫BALB/c小鼠,制备蛋白的多克隆抗体,Western-blot进一步证明了抗体与蛋白可发生特异性反应。肠炎沙门菌C50041在LB培养条件下,HilD与HilA蛋白表现出不同的表达规律,从而为体外研究肠炎沙门菌SPI1与SPI2效应蛋白的表达和功能研究奠定了基础。

早期综合发展指导对小儿发育的影响

目的讨论早期综合发展指导对小儿发育的影响,为实际应用提供参考。方法选择2021年3月至2022年5月在中国航天科工集团七三一医院进行体检的儿童80例,运用抽签法分为观察组和对照组,分别给予常规保健方式、早期综合发展指导,比较两组干预效果的差异性。结果观察组的体格发育指标(身高、头围)、智力发育评分(语言、社交行为、大运动、精细动作、社会适应性)优于对照组,儿童常见病总发生率(腹泻、贫血、佝偻病及呼吸道感染)低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在儿童保健工作中应用早期综合发展指导有较明显优势,能够加快儿童体格和智力的发育,提高儿童抵抗力,降低儿童常见病的发病率,对小儿发育有积极的影响,可以推广应用。

金红石型二氧化钛在醇酸树脂体系中遮盖力的检测方法探究及评价

采用金红石型二氧化钛为颜料,按照一定的配方和方法制备涂料浆,取适量待测涂料浆和标样涂料浆置于黑白板顶端,利用自动涂布机制备涂膜,采用分光光度计分别检测黑白板上涂膜的反射率,得到其遮盖力,同时对影响遮盖力检测的关键因素进行优化。结果表明,以醇酸树脂、混合溶剂、硝基清漆、钛白粉为原料制备涂料,湿膜厚度为80μm的条件下,金红石型二氧化钛在醇酸树脂中的遮盖力数值稳定,数据重塑性好。采用该种方法可实现生产线钛白粉质量稳定性评价。

影响牦牛肉保水性能的因素及其嫩度的研究

在新鲜牦牛肉中添加不同比例的持水剂 (复合磷酸盐 ) ,用加热离心法测定牦牛肉的持水力值 ,采用正交试验 ,得出复合磷酸盐的比例为 2∶2∶1(三聚磷酸钠∶焦磷酸钠∶六偏磷酸钠 ) ,添加量为 0 .4%时 。

二胎政策实行以来巨大儿发生率及其临床预后的回顾性研究

二胎政策开放后由于高龄、具有糖尿病等基础疾病的高危孕妇增加,巨大儿的发生率进一步上升,巨大儿对母婴都会带来不良影响,对母体的不良影响主要有剖宫产率增加,产道损伤率增加,子宫收缩乏力,产后出血增加等,对巨大儿本身的影响主要有肩难产概率增加,产伤,新生儿窒息率,畸形胎儿出生率等不良预后发生率增高,其远期肥胖,高血压,糖尿病发生率也有所提高,因此,二胎政策实行以来对巨大儿的研究显得十分重要,本文就其发生率及其临床预后做一综述。

阎锡山故居的家训石刻

:镶嵌在阎锡山故居墙壁上的家训似语录形式 ,内容可为做人、处人、管人三大类 ,寓意深刻 ,词句精辟 。

男性儿童常见外生殖器畸形的异常染色体核型特点

目的探讨男性儿童常见外生殖器畸形的异常染色体核型特点。方法回顾性分析2012年1月至2017年12月浙江大学医学院附属儿童医院收治的2408例患儿的临床资料。平均年龄(38±7)个月。其中尿道下裂1115例,隐睾189例,小阴茎304例,隐匿性阴茎681例,性发育异常119例。所有患儿均行外周血染色体550带检测,并分析染色体的核型。结果本组2408例,共检测出异常染色体核型131例,检出率5.4%,其中染色体数量异常46例,结构异常85例;性染色体异常64例,常染色体异常67例。最常见的异常染色体核型为46,XY,inv(9)(p12q13),共28例,占比21.4%;其次为47,XXY,共16例,占比12.2%性发育异常、尿道下裂、隐睾、小阴茎、隐匿性阴茎患儿染色体异常检出率分别为12.6%(15例)5.5%(61例)、5.3%(10例)4.9%(15例)、4.4%(30例)。结论男性常见外生殖器畸形患儿中染色体异常不罕见。染色体结构异常较数量异常更常见,性染色体异常与常染色体异常占比相当。

靶向捕获高深度测序及转录组测序在儿童急性B淋巴细胞白血病中的应用

目的探讨靶向捕获高深度测序(Panel-seq)及转录组测序(RNA-seq)与传统检测方法在儿童初发急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)细胞及分子遗传学分型中的差异及意义。方法回顾性分析2020年9月至2021年12月在广州市妇女儿童医疗中心新诊断为B-ALL的152例患儿临床资料。患儿除接受包括核型分析、荧光原位杂交以及43种融合基因定量筛查的传统细胞及分子遗传学方法检测外,还进行Panel-seq及RNA-seq检测。Panel-seq覆盖血液系统肿瘤常见变异的600多个基因,同时分析融合基因及基因突变;RNA-seq分析融合基因、基因突变及基因表达情况,推测染色体水平的拷贝数变异,并结合基因表达谱聚类和拷贝数变异预测高二倍体亚型。分析比较各检测方法遗传学分型结果。结果152例患儿中,男性93例,女性59例,中位年龄4.0岁(0.8~13.0岁),中位原始细胞比例0.855(0.215~0.965)。152例患儿中,传统检测方法鉴定出4例(2.6%)BCR-ABL1、2例(1.3%)CRLF2基因相关融合、27例(17.8%)ETV6-RUNX1、1例(0.7%)iAMP21、5例(3.3%)MLL重排、8例(5.3%)TCF3-PBX1以及22例(14.5%)高二倍体核型;Panel-seq鉴定出4例(2.6%)BCR-ABL1、2例(1.3%)CRLF2基因相关融合、27例(17.8%)ETV6-RUNX1、3例(2.0%)MEF2D基因相关融合、1例(0.7%)MEIS1-FOXO1、5例(3.3%)MLL重排、5例(3.3%)PAX5基因相关融合、8例(5.3%)TCF3-PBX1、4例(2.6%)ZNF384基因相关融合和2例(1.3%)IKZF1 N159Y突变。1例MLL重排患儿因样本质量问题未进行RNA-seq检测,其余151例患儿中,共检出1例(0.7%)ACIN1-NUTM1、4例(2.6%)BCR-ABL1、3例(2.0%)CRLF2基因相关融合、8例(5.3%)DUX4基因相关融合、27例(17.9%)ETV6-RUNX1、3例(2.0%)MEF2D基因相关融合、1例(0.7%)MEIS1-FOXO1、4例(2.6%)MLL重排、5例(3.3%)PAX5基因相关融合、1例(0.7%)ZMIZ1-ABL1、8例(5.3%)TCF3-PBX1、4例(2.6%)ZNF384基因相关融合及61例(40.4%)高二倍体亚型和2例(1.3%)IKZF1 N159Y突变;RNA-seq对融合基因及高二倍体核型检出有明显优势。传统方法、Panel-seq和RNA-seq检测的细胞及分子遗传学分型率分别为45.4%(69/152)、40.1%(61/152)和87.4%(132/151),三者结合可对89.5%(136/152)患儿进行分型。结论联合应用Panel-seq、RNA-seq技术可提高B-ALL患儿遗传学异常的检出率,从而进行更精确的细胞及分子遗传学分型,为指导治疗及判断预后提供依据。

小儿颈椎椎间盘钙化

小儿颈椎椎间盘钙化非常少见。本文报告１２例，男８例，女４例。年龄５～１３岁。其中３例有发热史，２例有外伤史。除１例无症状者为偶然发现外，其余患者均有以颈部疼痛为主的临床症状，部分同时有全身症状和／或神经压迫症状。Ｘ线平片检查表现为颈椎椎间盘中央部分的钙化阴影，而ＣＴ扫描和ＭＲＩ检查可明确显示椎间盘钙化范围及脊髓和／或神经根受压程度。小儿颈椎椎间盘钙化症属自限性疾病，预后良好。即使存在有神经受压症状，非手术治疗仍可获得满意疗效。

小儿脊柱爆裂型骨折

目的：探讨小儿脊柱爆裂型骨折的特性、诊断与治疗、并比较与成人同类骨折的不同特点。资料与方法：１９７４～１９９４年间收治的小儿创伤性、闭合性脊柱损伤中，有１１例诊为爆裂型骨折。平均年龄为１４．４岁，男５例，女６例。平均随访时间为９年（２～１６年）。按照Ｄｅｎｉｓ爆裂型骨折分类法，４例为Ａ型；６例为Ｂ型；１例为Ｃ型。根据伤后的严重程度，６例行后路融合和器械固定，５例卧位，石膏和支具治疗。结果：随访发现９０％患儿有满意的功能结果。伤后及随访时的Ｘ线摄片评价表明手术治疗能够改进和维持骨折部位的后凸畸形（伤后平均１９°，随访时１２°），椎体前侧压缩改进１５％（伤后平均３９％，随访时２４％）。而非手术治疗的后凸畸形平均进展９°（伤后平均１５°，随访时为２４°），椎体前侧压缩进展８％（伤后平均３６％，随访４４％），３例合并有神经系统症状患儿，２例有明显改进。结论：１．由于小儿脊柱的解剖特点，爆裂型骨折的诊断与治疗有其特性。２．与成人同类骨折相比，骨折的稳定性较好，神经系统症状轻。３．手术治疗可稳定骨折，并防止后凸畸形和椎体前侧压缩的进一步发展，减少住院或卧床时间。４．非手术治疗对无神经系统症状的稳定骨折是有效治疗手段，但?

论印度童工问题及其治理

印度童工问题严重,尤其是存在"债役童工"一类恶劣的童工形式,严重妨碍印度的社会发展,影响其国际形象。广大民众长期陷于贫困是印度童工问题的根源,传统的种姓制和社会观念助长了童工现象,基础教育资源的匮乏加重了童工问题。近年来,印度政府采取立法与政策并重的措施,实施国家童工项目与社会保障计划,积极与国际社会合作,治理取得显著成效。尽管如此,印度的童工问题依然严峻,治理工作任重道远。