HLA-E基因多态性与白血病的相关研究

目的探讨HLA-E基因多态性与白血病的相关性,为白血病的发生发展机制提供新的分子标记。方法提取白血病患者组(n=59)及正常人群(对照)组(n=132)外周血DNA,利用长片段高保真PCR方法做HLA-E全长序列扩增并对HLA-E的第3外显子测序并分型;分别计算2组中各基因型的频率及各等位基因的频率。结果白血病患者组:共检出35例纯合子,检出率59.3%(35/59),其中29例(49.2%)为HLA-E*01:03纯合子、6例(10.2%)为HLA-E*01∶01纯合子;正常对照组:共检出62例纯合子,检出率47.0%(62/132)其中36例(27.3%)为HLA-E*01:03纯合子、26例(19.7%)为HLA-E*01∶01纯合子;白血病患者组和正常对照组HLA-E*01∶03等位基因频率分别为69.5%vs 53.7%(P<0.01),2组HLA-E*01∶03纯合子比例分别为49.2%vs 27.3%(P<0.01,OR=2.1)。结论 HLA-E*01∶03是白血病的易感基因。

南方汉族人群HLA-E基因测序分型及其分子遗传多态性研究

目的研究南方汉族人群HLA-E基因的分子遗传多态性。方法随机选择150人份南方汉族健康无关个体,采用1对PCR引物特异性扩增HLA-E基因第1-5外显子目的序列,纯化后的PCR扩增产物作为测序模板,对HLA-E基因的第2、3、4外显子进行双向测序,测序反应产物纯化后经ABI3730测序仪电泳,用Assign 3.5 SBT软件分析结果。结果所检测的150例标本均扩增出清晰的目的条带,对HLA-E基因外显子2-4进行双向测序,所获得的序列无背景信号和杂峰。检出了2种HLA-E等位基因,其中HLA-E*01∶01等位基因频率为0.42,HLA-E*01∶03等位基因频率为0.58。3种HLA-E基因型频率的分布符合Hardy-weinberg平衡定律。结论本文所获得了南方汉族人群HLA-E基因分子遗传多态性等基础数据,可为HLA-E的疾病关联研究、临床移植等提供重要参考。

HLA—E在RSA人绒毛组织中的表达与临床意义

目的研究人类白细胞抗原E（HLA-E）在反复自然流产（RSA）和正常流产人绒毛组织中的蛋白和mRNA表达，探讨HLA-E与不明原因RSA的相关性及其临床意义。方法采用免疫组织化学技术和逆转录一聚合酶链反应技术检测35例RsA人绒毛组织和35例正常流产人绒毛组织中细胞学定位以及HLA-E在mRNA水平的表达。结果免疫组织化学检测结果显示两组中均有HLA-E阳性表达，RSA组的HLA-E在人绒毛组织中阳性表达率低于正常流产组（χ2=131．125，P〈0．05）。逆转录-聚合酶链反应结果显示RSA组和正常流产组均有HLA-E表达，对比显示RSA组的HLA-E表达低于正常流产组（t=1．937，P〈0．05）。结论RSA妊娠妇女早孕绒毛组织中HLA-E在组织细胞学蛋白和mRNA水平均较正常人工流产妊娠妇女早孕绒毛组织中降低，提示自然流产妊娠妇女存在HLA-E表达异常，HLA-E可能与RSA的发生关系密切。

江苏地区汉族人群HLA-E基因多态性分析

目的通过调查江苏地区汉族人群人类白细胞抗原-E(HLA-E)等位基因多态性分布情况,为探讨HLA-E基因多态性与疾病关联奠定基础。方法采用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)方法,调查217例江苏地区汉族献血人群HLA-E的表达。结果检测到HLA-E的2个等位基因,分别是HLA-E*01:01和HLA-E*01:03,分布频率为41.47%和58.53%;基因型HLA-E*01:01/01:01、01:01/01:03和01:03/01:03的频率分别为14.74%、53.46%和31.80%,分布符合Hardy-weinberg平衡定律。结论江苏地区汉族人群HLA-E高度保守,仅有2种基因型。

新疆维吾尔族人自然长寿与HLA-DRB,ACE,ApoE基因多态性分析

目的：探讨人类白细胞抗原（human leukocyte antigen, HLA）基因、血管紧张素转换酶（An-giotensin-Coverting Enzyme, ACE）基因及载脂蛋白E（Apolipoprotein E, ApoE）基因多态性与新疆维吾尔族自然长寿的关系。方法将研究对象根据年龄分为长寿组和老年组，同时选择同一地区无血缘关系已自然死亡（61-73岁）者为对照组。分别应用聚合酶链反应-序列特异引物法（PCR-SSP），单链构象多态性（SSCP）分析和直接测序技术对长寿组、老年组、对照组进行基因分型。结果长寿组HLA-DR1，DR6（14）基因频率较对照组升高（P〈0.05），与老年组比较差异无统计学意义；长寿组HLA-DR9基因频率较对照组降低（P〈0.05），较老年组显著降低（P〈0.01）；长寿组HLA-DR51基因频率较老年组降低（P〈0.05），与对照组比较差异无统计学意义。在ACE基因分析中，长寿组D/D基因型频率较对照组显著升高（P〈0.01），而较老年组升高（P〈0.05），另外，长寿组D等位基因频率也高于对照组（P〈0.05），与老年组比较差异无统计学意义；另外，3组间DI，Ⅱ基因型比较未见明显差异。 ApoE基因分析中，长寿组ε3/3基因型频率较老年组升高（P〈0.05），与对照组比较差异无统计学意义；长寿组ε4/3基因型频率较对照组明显降低（P〈0.001），较老年组也显著降低（P〈0.01）；其余基因型比较差异无统计学意义。结论 HLA-DRB基因的DR1,DR6（14）等位基因，ApoE的ε4/3基因型及ACE基因的DD基因型，D等位基因对长寿可能有保护作用，是长寿有利基因；HLA-DRB基因的DR9基因型可能不利于长寿，是长寿的危险因素。

HLA-E在老年人群结肠癌前病变中的表达研究

目的分析人类白细胞抗原E(human leukocyte antigen-E,HLA-E)在老年人群结肠癌癌前病变中的表达现状。方法随机选取109例内镜手术患者的病理标本,其中管状绒毛状腺瘤组织59例,高级别类瘤变/癌变组织50例;肠镜活检获取20例健康体检者的正常黏膜组织。根据年龄分为<60岁、60~70岁及>70岁,比较不同年龄受试者结肠组织的一般资料,应用免疫组化检测HLA-E表达。结果不同年龄受试者在正常黏膜组、管状绒毛状腺瘤组及高级别类瘤变/癌变组中HLA-E表达差异有统计学意义(P<0.05)。HLA-E强阳性表达率在正常黏膜组、管状绒毛状腺瘤组和高级别类瘤变/癌变组中依次增多,随着年龄增加HLA-E强阳性表达率增高(P<0.001)。结论 HLA-E在老年人群结肠癌癌前病变中高表达,可能促使早期结肠癌细胞形成免疫逃逸。

基于HLA-E功能特点的肿瘤免疫治疗新策略

人类白细胞抗原-E(HLA-E)在多种肿瘤中呈高表达,其与肿瘤患者预后的关系呈现肿瘤类型依赖性。HLA-E主要通过与NK细胞或T细胞上的激活性(NKG2C)或抑制性(NKG2A)受体结合,在调控抗肿瘤免疫应答中发挥重要作用。基于此,靶向HLA-E/NKG2A以阻断HLA-E与NKG2A的相互作用或抑制HLA-E表达,有望成为增强抗肿瘤免疫应答的新策略。鉴于HLA-E的功能特点设计增强型或通用型的T/NK细胞过继免疫疗法,有望提高过继免疫细胞疗法的治疗效果,具有良好的研发和临床应用前景。如何将靶向HLA-E或NKG2A的疗法与其他免疫疗法有效联合,实现更精准的免疫治疗以提高临床治疗效果是目前该方面研发和应用需要解决的难题之一。

人类白细胞抗原-E基因多态性与乳腺癌遗传易感性的关系

目的探讨人类白细胞抗原-E(HLA-E)基因多态性与中国张家口地区汉族女性乳腺癌遗传易感性的关系。方法采用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)法对中国张家口地区200例乳腺癌患者和114例健康对照人群HLA-E等位基因进行检测。结果乳腺癌患者和健康对照组均检出两种等位基因:HLA-E*0101和HLA-E*0103;共检出三种基因型:HLA-E*0101/HLA-E*0101、HLA-E*0101/HLA-E*0103和HLA-E*0103/HLA-E*0103。其中HLA-E*0103等位基因和HLA-E*0103/H L A-E*0 1 0 3基因型在乳腺癌患者组的分布频率明显高于健康对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。且携带HLA-E*0103/HLA-E*0103基因型的个体乳腺癌发病风险明显增加(OR=2.05,P=0.004)。结论 HLA-E基因多态性与中国张家口地区汉族女性乳腺癌遗传易感性相关,并且HLA-E*0103/HLA-E*0103等位基因可能是易感基因。

妊娠高血压综合征与组织相容性白细胞抗原-E的关联研究

目的 探索妊娠高血压综合征 (PIH)的发生与组织相容性白细胞抗原 (HLA) E基因多态性是否存在关联。方法 采用地高辛标记的寡核苷酸探针杂交技术 ,检测 5 8例PIH患者 (实验组 )和 15 6名正常孕妇(对照组 )的HLA E等位基因多态性。结果 实验组和对照组中 ,HLA E 0 10 1均为最常见的等位基因 ,其等位基因频率分别为 4 3.1%和 4 2 .2 5 % ;其次是E 0 10 32 ,分别为 2 8.4 5 %和 32 .84 % ;E 0 10 31分别为 2 8.4 5 %和2 4 .88% ;HLA E 0 10 2和E 0 10 4在两组标本中均未检出。两组间检出的 3个等位基因的差异均无显著性 (P>0 .0 5 )。结论 PIH的发生与HLA E等位基因多态性可能无直接关联。

肺移植术后急性细胞介导排斥反应的诊疗新进展

急性细胞介导排斥反应(ACR)是肺移植术后常见的并发症,主要是由T淋巴细胞识别移植物细胞表面的主要组织相容性复合体引发的免疫反应,目前被认为是急性排斥反应的主要形式。ACR不仅可以直接导致受者死亡,也是肺移植术后慢性排斥反应的高危因素。但肺移植术后ACR的诊断困难,治疗棘手。本文总结了肺移植受者ACR的危险因素、发病机制、诊断和治疗新进展,以期提高ACR的诊治效率,延长受者生存期。

宫颈上皮内瘤变患者血清和病灶中HLA-E、HLA-G表达与临床病理特征及术后复发的关系分析

目的研究宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)患者血清和组织中人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)-E、HLA-G表达与临床病理特征及术后复发的关系及其临床意义。方法选取2014年5月至2016年5月民航总医院492例CIN患者,入院后均采集患者基本资料,明确诊断后进行冷刀锥切术(cold-knife conization,CKC)和宫颈环形电切术(loop electrosurgical excision procedure,LEEP),术后门诊随访至少1年,观察病灶残留或复发情况,中位随访时间为54(18~72)个月,所有患者均检测血清和病灶中HLA-E和HLA-G水平以及人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)感染情况,比较不同临床病理特征的CIN患者血清和病灶HLA-E和HLA-G表达水平并分析其对术后复发的预测价值。结果CIN患者血清和病灶HLA-E和HLA-G水平随着CIN分级增加和高危型HPV感染而明显升高(P<0.05),年龄、孕次和产次等其他临床病理资料不同的患者HLA-E和HLA-G水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);492例CIN患者术后复发37例(7.52%),复发组血清和病灶HLA-E和HLA-G表达水平高于非复发组,差异有统计学意义(P<0.05);血清HLA-E、HLA-G水平及两者联合检测预测CIN术后复发的曲线下面积(area under curve,AUC)分别为0.690、0.709和0.865,病灶HLA-E、HLA-G水平及两者联合检测预测CIN术后复发的AUC分别为0.849、0.891和0.906。结论CIN患者血清和病灶HLA-E和HLA-G表达水平均与CIN分级、高危型HPV感染和术后复发存在密切联系,且检测血清HLA-E和HLA-G能为预测CIN术后复发风险提供参考信息。

四君子汤调节NKG2A表达影响NK细胞抗结肠癌作用

目的:探讨中药复方四君子汤通过调节NKG2A的表达影响自然杀伤(NK)细胞抗结肠癌的作用。方法:分离、纯化来自健康人外周血NK细胞进行培养,分别构建人NK细胞单培、HCT116细胞单培和NK细胞与HCT116细胞共培模型,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测NK细胞中自然杀伤细胞2族成员A(NKG2A)、白细胞介素(IL)-15及结肠癌细胞中组织相容性白细胞抗原E(HLA-E)mRNA的表达,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测NK细胞中IL-15分泌;噻唑蓝(MTT)比色法筛选IL-15的浓度,检测四君子汤和IL-15对NK细胞活性和共培模型中HCT116细胞活性的影响,Real-time PCR检测四君子汤和IL-15对NK细胞中NKG2A和HCT116中HLA-E mRNA表达的影响;使用Anti-NKG2A抗体(M)阻断NKG2A/HLA-E通路,MTT比色法检测共培模型中HCT116细胞增殖情况。结果:与单培组比较,NK细胞和HCT116细胞相互作用引起NK细胞的NKG2A和HCT116中的HLA-E mRNA表达均上调(P<0.05);IL-15 mRNA表达和分泌也增加(P<0.05);IL-15可增强NK细胞活性和抗结肠癌作用(P<0.01),也可上调NKG2A表达(P<0.05);与空白组比较,四君子汤组、四君子汤+IL-15组的NK细胞活性和抗结肠癌作用进一步增加(P<0.01),Real-time PCR结果显示,与空白组比较,四君子汤组和四君子汤+IL-15组中NK细胞NKG2A表达下调(P<0.05),共培模型中四君子汤组HCT116中HLA-E表达下调(P<0.01);与相应未加M组比较,M组与IL-15+M组HCT116细胞增殖被抑制(P<0.01)。结论:NK细胞与结肠癌细胞相互作用可引起NKG2A-HLAE通路活化导致NK功能受损,四君子汤可抑制该信号激活从而恢复NK细胞抗结肠癌作用。