人胎盘胎儿侧间充质干细胞无血清培养上清对肺脏上皮细胞氧化应激的保护作用

背景:前期研究证实人胎盘胎儿侧间充质干细胞培养上清具有一定的清除活性氧自由基的能力,且本身具有一定的抗氧化酶活性。目的:探究人胎盘胎儿侧间充质干细胞在无血清培养条件下所得上清对氧化应激损伤的肺脏上皮细胞的保护作用及其作用机制。方法:分别使用不同浓度的过氧化氢(200,400,500,600,800μmol/L)对肺脏上皮细胞A549细胞系进行6,12,24 h的氧化刺激,通过CCK-8法对肺脏上皮细胞存活率进行检测,得出存活率为50%时的过氧化氢浓度作为氧化损伤模型的最适条件。用Hochest33258染色及Western Blot对模型有效性进行验证。采用无血清培养基培养胎盘胎儿侧间充质干细胞,收集P3代细胞培养上清将其作用于氧化损伤的肺脏上皮细胞,培养24 h,即上清组。同时设立损伤组(仅进行氧化损伤)和维生素C组(培养基中添加100μmol/L的维生素C)。利用流式细胞术对各组细胞凋亡情况进行检测以及Western Blot检测凋亡相关蛋白及氧化应激经典信号通路Nrf2-Keap1-ARE信号通路相关蛋白的表达。结果与结论:(1)CCK-8法检测得出,采用600μmol/L的过氧化氢对肺脏上皮细胞进行24 h的氧化刺激,A549细胞存活率为(56.41±3.31)%。Hochest33258染色及Western Blot证实模型的可靠性;(2)流式细胞术结果显示维生素C组和上清组氧化损伤细胞的凋亡率与损伤组细胞相比有不同程度的降低,其中上清组与损伤组相比差异有统计学意义(P<0.05);(3)Western Blot对凋亡相关蛋白的检测显示,与损伤组对比,维生素C组和上清组凋亡促进基因Bax蛋白表达减弱,凋亡抑制基因Bcl-2蛋白表达增强,且差异有统计学意义(P<0.05)。Nrf2-Keap1-ARE信号通路相关蛋白显示与损伤组对比,维生素C组和上清组Nrf2蛋白表达增强,Keap1分子表达减弱且差异有统计学意义(P<0.05);(4)上述结果提示,实验成功构建了肺脏上皮细胞损伤模型,且人胎盘胎儿侧间充质干细胞培养上清具有一定的抗氧化能力,能够起到减弱氧化损伤,抑制细胞凋亡的作用,其作用机制可能与激活Nrf2-Keap1-ARE信号通路有关。

20(S)-原人参二醇对人前列腺癌细胞凋亡的诱导作用

目的:研究20(S)-原人参二醇对人前列腺癌细胞凋亡的影响。方法:采用台盼蓝染色、噻唑蓝(MTT)法、Hochest33258染色和DNA Ladder方法分别测定20(S)-原人参二醇对DU145和PC3细胞凋亡诱导作用。结果:20(S)-原人参二醇可明显降低DU145和PC3细胞存活率和细胞活性,IC50分别为38.0μmol/L和28.6μmol/L。20(S)-原人参二醇处理后DU145和PC3细胞核出现典型的凋亡形态学改变,琼脂糖电泳呈现明显的DNA Ladder条带。结论:20(S)-原人参二醇可有效诱导人前列腺癌DU145和PC3细胞的凋亡并有剂量依赖关系。

20(S)-原人参二醇抑制小细胞肺癌A549细胞增殖的研究

采用台盼蓝和MTT法测定20(S)-原人参二醇(Ppd)对肺癌A549细胞增殖的抑制作用,Hochest 33258染色和DNA Ladder方法观察Ppd对小细胞肺癌A549细胞凋亡及周期的影响。结果表明,Ppd对肺癌A549细胞具有明显的抑制作用并有剂量时间依赖关系,可明显降低肺癌A549细胞的存活率和活性(IC50为20.7μmol/L);染色后肺癌A549细胞核出现典型的凋亡形态学变化,与DNA Ladder电泳条带弥散情况一致。因此,Ppd对肺癌A549细胞的增殖有明显的抑制作用。